专利名称：一种α-半乳糖苷酶及其编码基因和应用的制作方法α -半乳糖苷酶(alpha-galactosidase, EC 3. 2. 1. 22)，也叫蜜二糖酶，是一种夕卜切糖苷酶，它可作用于α-半乳糖苷键，催化α-半乳糖苷类的寡糖以及含α-半乳糖苷键的多聚糖。α-半乳糖苷广泛分布于植物、动物和微生物体内。α -半乳糖苷酶作为一种新型的酶制剂，在饲料工业，食品工业，制糖工业，造纸工业以及医学界都发挥着重要的作用。不同的领域PH作用环境不同，对α-半乳糖苷酶的特点要求也就不同。例如，酸性α-半乳糖苷酶目前不适于应用于豆奶加工中，因为豆奶的PH 约为6. 2-6. 4，而酸性α -半乳糖苷酶的ρΗ在4. 0-4. 5，易造成豆奶中蛋白沉降，奶制品口感偏酸；甜菜糖生产中甜菜糖蜜的PH需用硫磺酸调至5. 2，才能使酸性α -半乳糖苷酶发挥作用；在医学研究中，由B型血到0型血的血液转换，需在中性及碱性条件下作用，酸性条件下会使血细胞不稳定，这是因为血液的PH值在7. 3，中性偏碱性的环境下，碱性的α -半乳糖苷酶会发挥明显的优势。目前酶制剂工业中主要采用微生物作为主要酶源。微生物特别是丝状真菌，因其产生的α-半乳糖苷酶产量相对较高，可胞外分泌、酶学性质优良等特点而受到研究者的青睐。目前，α-半乳糖苷酶主要是利用原菌株的发酵生产，产量较低，成本较高。α-半乳糖苷酶的基因工程菌株目前报道也较少，主要还是在实验室研究阶段。因此，不断提高菌种产酶水平，研究α-半乳糖苷酶合成的调控机制、酶基因的克隆和异源高效表达，进行产业化推广应用是今后发展的主要方向。
本发明的目的是提供一种α-半乳糖苷酶及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，来自菌株WD(Alternaria sp. )No. 4529，命名为LGAL蛋白， 是如下(a)或(b)或(c)(a)由序列表中序列1自N末端第20至739位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有α-半乳糖苷酶活性的由序列1衍生的蛋白质。为了使(a)中的LGAL蛋白便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1标签的序列本发明公开了一种α-半乳糖苷酶及其编码基因和应用。本发明提供的α-半乳糖苷酶是如下(a)或(b)或(c)(a)由序列表中序列1自N末端第20至739位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(c)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有α-半乳糖苷酶活性的由序列1衍生的蛋白质。本发明为今后的高效表达生物反应器的建立提供技术参数，使其应用于不同的工业生产领域，本发明丰富了蛋白来源，该蛋白与已报道的蛋白氨基酸序列一致性低，为α-半乳糖苷酶的分类学提供了新的素材。