专利名称：一种用于治疗奶牛乳腺炎的冻干粉制剂的制作方法奶牛乳腺炎是一种常见的、复杂的、造成奶牛业经济损失最严重的疾病。国内 外常以大剂量的抗生素治疗奶牛乳腺感染，抗生素虽有一定的疗效，但由于上述致病菌 大都产生了耐药性菌株，因此，疗效并不明显。反而造成牛奶中抗生素残留，将这些牛 所产的奶混入食用牛奶造成的后果是严重的。联合国粮农组织和世界卫生组织都建议， 在奶牛接受抗生素治疗停药后至少3天内挤出的奶汁，不直接作为食用的奶原料。而目 前世界上对付乳腺炎除了抗生素别无它药。近几年来，国内外新型抗菌药物的研究热点 已开始转向具有独特杀菌活性的生物工程酶类。美国专利5,760,026公开了溶葡萄球菌酶治疗奶牛乳腺炎的应用专利，该专利指 出每个乳区给于2-400mg溶葡萄球菌酶可以有效去除感染奶牛乳腺的葡萄球菌，连续给 药3天后，牛乳腺炎的症状出现了明显的好转，牛奶中的体细胞数也明显降低。但在实 际应用中我们发现，由于牛奶中存在大量的酪蛋白，其等电点约为4.6，而溶葡萄球菌酶 的等电点约为10.5-11.0，大剂量的溶葡萄球菌酶被灌注进入奶牛乳腺组织后，会与牛奶 中的酪蛋白发生聚集反应而出现絮状沉淀，造成溶葡萄球菌酶的杀菌活性降低，而且影 响了牛奶的品质。因此，寻找一种既能有效治疗奶牛乳腺炎，又对牛奶品质不造成影响 的溶葡萄球菌酶制剂是本发明需要解决的问题。
本发明需要解决的技术问题是提供一种用于治疗奶牛乳腺炎的冻干粉制剂以克 服现有技术存在的上述缺陷。本发明的发明构思是这样的正常牛奶中酪蛋白含量为30_50g/L，这些蛋白质中的80%是以酪蛋白胶体形式 存在，而酪蛋白的等电点约为4.6，在牛乳中带有负电荷，因酪蛋白胶粒间因具有静电排 斥作用而形成一种稳定的胶体体系，所以正常的牛奶中不会出现絮状沉淀。发生奶牛乳 腺炎后，牛奶中有大量的细菌繁殖，使得这种胶体体系被破坏，出现了絮状沉淀(称之 为“坏奶”)。具有杀菌作用的溶葡萄球菌酶(等电点为10.5-11.0)和溶菌酶(等电点为 10.7-11.0)在生理条件下为带正电荷的蛋白质胶体。当这两种成分进入奶牛的乳腺后， 带正电荷的蛋白质胶体就可以和负电荷的酪蛋白胶粒发生聚集，破坏了牛奶中稳定的胶 体体系，就会出现形似“坏奶”的絮状沉淀。因此直接用高剂量的溶葡萄球菌酶和溶菌 酶灌注治疗存在两个方面的问题，一是溶葡萄球菌酶的使用量要大大提高，因为加入牛 奶后部分与酪蛋白产生沉淀，影响了酶的杀菌作用；二是灌注后产生的牛奶中出现沉淀的现象往往会被理解为经过该产品治疗后奶牛乳腺炎病情加重了，影响到产品的推广使用。因此本发明通过在制剂配方中添加一定量的阻滞剂以解决以上问题。所添加的 阻滞剂可包括两种一种是带负电荷的高分子化合物，使其通过正负电荷的相互作用与 溶葡萄球菌酶及溶菌酶形成物理交联复合物；另一种是表面活性剂，使其形成胶束，将 酶包裹在内。通过以上两种方式起到屏蔽溶葡萄球菌酶和溶菌酶正电荷的作用，从而能 够降低酶和牛奶中酪蛋白电荷作用，使得制剂灌注进入奶牛乳腺后，不仅溶葡萄球菌酶 和溶菌酶在牛奶中能保持很好的稳定性和杀菌活力，而且牛奶中也不会出现溶葡萄球菌 酶或溶菌酶与酪蛋白聚合形成的絮状沉淀。本发明的技术方案如下一种用于治疗奶牛乳腺炎的冻干粉制剂，其组分与重量百分含量为，溶葡萄球 菌酶0.04-1.5wt%，溶菌酶10-72.5wt%，阻滞剂10_40wt%，磷酸二氢钾5-20%，磷酸 氢二钠 10-35%。所述及的阻滞剂为带负电荷高分子化合物、表面活性剂中的一种以上。所述及的带负电荷高分子化合物为阿拉胶、藻酸丙二醇酯、果胶、可溶性大豆 多糖中的一种以上。所述及的表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆中的一种以上。其中优选的组分与重量百分含量为，溶葡萄球菌酶0.1_lwt%，溶菌酶 10-30%,阻滞剂10-40%，磷酸二氢钾10-20%，磷酸氢二钠20-30%。制剂中的溶葡萄球菌酶和溶菌酶能显著杀灭奶牛乳腺中的各种致病菌，稳定剂 可以有效保持溶葡萄球菌酶和溶菌酶在冻干过程中的活性并减弱酶与牛奶中酪蛋白的作 用，制剂中的磷酸盐可将冻干粉剂的酸度控制在溶葡萄球菌酶和溶菌酶的杀菌活性最佳 的pH值范围内。本发明提供的治疗奶牛乳腺炎的重组溶葡萄球菌酶冻干粉制剂用于杀灭引起奶 牛乳腺感染的各种细菌，治疗效果十分显著，尤其对金黄色葡萄球菌、乳房链球菌、大 肠杆菌的杀灭率均超过99%，对奶牛乳腺炎的治疗有效率可以达到90%以上。4配方 溶葡萄球菌酶0.23% (0.23mg)，溶菌酶含量 56.77 % (56.77mg)，果胶 17.03% (17.03mg),磷酸二氢钾 9.01% (9.0Img)，磷酸氢二钠 16.96% (16.96mg)。配方 5溶葡萄球菌酶含量1.09% (Img)，溶菌酶含量10.9 % (IOmg)，藻酸丙二醇酯 38.14% (34.99mg),磷酸二氢钾 17.31% (15.88mg)，磷酸氢二钠 32.56% (29.87mg)。重组溶葡萄球菌酶冻干粉制剂的制备(以配方1为例)1)对桌面、仪器、器皿、配料桶消毒。2)按比例在电子天平上准确称取溶葡萄球菌酶、溶菌酶、阿拉胶、磷酸二氢 钾，磷酸氢二钠，置于配料桶中，用Iml水溶解，搅拌均勻。3)将配制好的溶液用0.22 μ m的滤膜过滤除菌4)取除菌后的Iml溶液分装到IOml的西林瓶中，放置于冷冻干燥机中，冷冻干 燥，干燥后的样品即为治疗奶牛乳腺炎的冻干粉制剂。实施例2配方的筛选实验用pH7.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制IOOml的溶液，含有重组溶葡萄球菌酶 2mg (酶活性为2000U)，将此溶液分成20份，每份5ml。然后分别按重量比1 1加入下 列辅料，混合均勻后，加入20ml新鲜采集的正常牛奶(巴氏消毒)，39°C孵育20小时， 然后观察加了不同序号的样品后，牛奶性状的变化，牛奶中酶生物活性的保存率。具体 结果结果见下表1。表1结果表明阿拉胶、藻酸丙二醇酯、果胶、可溶性大豆多糖、聚 乙烯吡咯烷酮能够很好的稳定溶葡萄球菌酶的在牛奶中的活性，所以我们在实施例1中 的5个配方采用了上述的稳定剂。表1处方筛选预实验结果

本发明属于医药技术领域，具体的说涉及一种用于治疗奶牛乳腺炎的冻干粉制剂。本发明公开的制剂组成及其重量百分含量包括溶葡萄球菌酶0.04-1.5wt％，溶菌酶10-72.5wt％，阻滞剂10-40wt％，磷酸二氢钾5-20％，磷酸氢二钠10-35％。本发明制剂灌注进入奶牛乳腺后，不仅溶葡萄球菌酶和溶菌酶在牛奶中能保持很好的稳定性和杀菌活力，而且牛奶中也不会出现溶葡萄球菌酶或溶菌酶与酪蛋白聚合形成的絮状沉淀。