一种银杏内酯冻干粉针剂的制备方法

张平

2003年1月15日

2002年6月21日

2002年6月21日

张平

A61K31/365GK1390542SQ0213422

冻干粉 内酯 针剂 银杏

1.一种银杏内酯冻干粉针剂的制备方法，包括以下步骤(1)将银杏混合内酯原料溶解于碱溶液，配制成含银杏内酯的碱溶液；(2)将上述碱溶液充分搅拌，使银杏内酯全部溶解；(3)在上述溶液中加入甘露醇使溶解，过滤；(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得2.根据权利要求1所述的银杏内酯冻干粉针剂的制备方法，其特征在于所述的碱溶液为葡甲胺溶液

本发明涉及一种银杏内酯药物制剂的制备方法，更具体地说，涉及一种银杏内酯冻干粉针剂的制备方法银杏叶提取物中主要含有生物活性物质银杏内酯A和B，它是一类强血小板板活化因子PAF拮抗剂，而且这些成份目前仅发现存在于银杏一种植物中，由于该成份结构复杂，目前也没有可能用有机合成方法生产血小板活化因子是一种哺乳动物内源性生理活性物质，主要与过敏、溃疡、哮喘、血栓形成、某些炎症、脏器移植的异体排斥、冠心病人由于缺氧引起的心肌损伤等的发病密切相关，因此血小板活化因子拮抗剂有可能用于上述疾病的防治由于银杏内酯具有独特的药理作用，故国内外科学家对其进行了许多研究，但国外目前尚无正式产品，临床试验曾经使用的剂型主要是片剂，也有采用吸入剂型，银杏内酯B也有采用针剂进行临床试验但对银杏内酯的剂型目前报导很少，由于银杏内酯本身很难溶于水，因此目前采用冻干粉针剂作为给药形式尚未见报导本发明提供的制备银杏内酯冻干粉针剂的方法，包括以下步骤(1)将银杏混合内酯原料溶解于碱溶液，配制成含银杏内酯的碱溶液；(2)将上述碱溶液充分搅拌，使银杏内酯全部溶解；(3)在上述溶液中加入甘露醇使溶解，过滤；(4)滤液无菌分装，冷冻干燥，即得上述步骤(1)中所用的碱溶液为葡甲胺溶液本发明所述的银杏混合内酯A、B结构式如下 其中 由于银杏内酯难溶于水，对制备成水针剂带来一定难度，又银杏内酯在水中不稳定，本发明采用银杏内酯结构中可利用的内酯部分使其成盐的形式而使银杏内酯溶解于水中，然后再制成冻干粉，使其稳定保存本发明方法工艺简单，产品水溶性好，可不加任何其他助溶剂，用注射用水溶解即可使用下面结合实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明术后24h按Bederson的方法对动物的行为缺陷进行分级评分，标准如下0级未观察到神经症状；1级提尾悬空时，动物的手术对侧前肢表现为腕肘屈曲，肩内旋，肘外展，紧贴胸壁；2级将动物置于光滑平面上，推手术侧肩向对侧移动时，阻力降低；3级动物自由行走时向手术对侧环转或转圈；4级软瘫，肢体无自发活动MCAO 24h后，断头处死大鼠，取出全脑，左右脑分别切开，称重在右脑视交叉及其前后各2mm处，做冠状切，脑切片于1％TTC溶液中避光37℃孵育25分钟，用眼科镊分离苍白区(梗赛区)和非仓白区(正常区)，计算梗塞百分比.梗塞百分比(％)＝苍白区重量/(苍白区重量+非苍白区重量)×100％将染色后的脑组织置于110℃烘箱烘干，对照大脑湿重求出脑含水量如下脑组织含水量(％)＝(1-脑组织干重/脑组织湿重)×100％表1注射用银杏内酯冻干粉iv对局灶性脑缺血大鼠神经行为、脑梗塞率、脑含水量的影响(x±s，n＝10)组别剂量(mg/kg) 神经行为评分 脑梗塞率(％) 脑含水量(％)假手术组- 0.3±0.5 077.0±0.9模型对照- 3.3±1.1 21.0±2.380.9±1.030.0 1.4±1.0**13.8±2.0**78.1±0.9**冻干粉 15.0 1.8±1.0**16.4±2.4**78.9±0.7**7.52.4±0.8*18.4±2.0*79.3±0.8*金钠多组1ml/kg 1.8±1.1**15.6±3.0**78.7±1.0**尼膜同组0.21.9±0.7**16.9±1.9***78.3±1.3***P＜0.05**P＜0.01 υs模型对照结论注射用银杏内酯冻干粉静脉给药7.5，15.0，30.0mg/kg iv能使MCAO大鼠的脑卒中评分降低，MCAO梗塞范围缩小，脑组织含水量减少(P＜0.01)其作用强度与金钠多注射液比较无明显差异二、注射用银杏内酯冻干粉iv对大鼠实验性弥散性完全性脑缺血的保护作用取雄性SD大鼠70只，体重300-400g，随机分为7组，每组10只分为注射用银杏内酯冻干粉高剂量组30.0mg/kg，中剂量组15.0mg/kg，低剂量组7.5mg/kg，尼膜同注射液组0.2mg/kg，金纳多组1.0ml/kg，模型对照组和假手术组(均给以等量生理盐水0.6ml/100g)于实验前三天，每天尾静脉注射一次第三天给药后30min，用10％水合氯醛麻醉(30.0mg/kg，ip)将大鼠背位固定，分离双侧颈总动脉于给药后30min大鼠清醒状态下用硅胶管的小动脉夹夹闭双侧颈总动脉，可见大鼠意识和翻正反射消失，眼变白，竖毛，呼吸加快30min后去除动脉夹，造成再灌注模型，再灌同时股静脉注射60mg/kg伊文思蓝60min后大鼠断头取脑，然后用生理盐水和丙酮混合液(3∶7v/v)制成10％匀浆(W/V)，密封放置过夜后，2500rpm离心15min，取上清液，以生理盐水—丙酮混合液调零，在620nm处测吸光度表示脑组织中伊文思蓝含量[以生理盐水—丙酮混合液为溶剂建立伊文思蓝吸光值与浓度的标准曲线]，以此反映给药对脑血管通透性的影响结果由表2所示，注射用银杏内酯冻干粉7.5，15.0，30.0mg/kg连续静脉注射4天可剂量相关性地缩短四动脉结扎—再灌所致全脑弥散性缺血大鼠的翻正反射恢复时间，降低脑匀浆伊文思蓝含量(高剂量组p＜0.001)说明注射用银杏内酯冻干粉能够保护缺血后的脑功能，降低毛细血管通透性表2 银杏内酯冻干粉iv对大鼠实验性弥散性完全性脑缺血的保护作用(n＝10，x±s)组别剂量 翻正反射恢复时间 伊文思蓝含量(mg/kg) (min) (μg/g脑重)假手术组- 7.51±1.0模型对照- 30.1±4.317.5±1.6尼膜同组0.224.7±4.8**15.5±2.2**金钠多组1.0ml/kg 24.1±5.5**15.2±1.9**30.0 23.9±5.1***15.0±1.5***冻干粉 15.0 26.4±3.3**15.3±2.0**7.526.5±3.2**15.9±1.6***P＞0.05，**P＜0.05***P＜0.01 υs模型对照组三、注射用银杏内酯冻干粉iv对小鼠耐缺氧能力的影响取小鼠50只，体重为18-22g，随机分为5组，每组10只，雌雄各半分别为注射用银杏内酯冻干粉48.0、24.0、12.0mg/kg；金钠多注射液组(2.0ml/kg)；尼膜同注射液组(0.4mg/kg)；缺血对照组(给以等量的生理盐水)于实验前三天，每天尾静脉给药一次，以不同浓度等容积给药0.1ml/10g体重第四天最后一次给药后10分钟，将小鼠置于装有25g钠石灰的60ml密闭广口瓶中，记录小鼠的死亡时间表3结果表明银杏内酯冻干粉静脉注射液可显著延长小鼠在缺氧状态下的存活时间(P＜0.01)表3 注射用银杏内酯冻干粉对小鼠耐缺氧能力的影响(n＝10，x±s)组别 剂量(mg/kg) 存活时间(min)阴性对照14.4±1.7尼膜同组 0.417.0±1.5***金钠多组 2.0ml/kg 18.4±1.6***48.0 19.6±1.6***内酯冻干粉 24.0 16.3±1.6**12.0 14.6±1.9**P＞0.05，**P＜0.05***P＜0.01 υS模型对照组四、注射用银杏内酯冻干粉iv对麻醉犬脑循环的影响杂种犬25只，雌雄兼用，随机分为5组，每组5只即注射用银杏内酯冻干粉低、中、高剂量组(2.5，5.0，10.0mg/kg)，阳性对照尼膜同注射液组(0.1mg/kg)，生理盐水对照组将动物以戊巴比妥钠30mg/kg iv.麻醉后背位固定，将充满0.1％肝素生理盐水的聚乙烯管经麻醉犬一侧股动脉插入腹主动脉，通过TP-200T型压力换能器与RM6000型多道生理记录仪相连，直接读取股动脉收缩压(SAP)，舒张压(DAP)，平均动脉压(MAP)和心率(HR)分离颈总动脉和颈外动脉，并结扎颈外动脉，将直径3mm的电磁流量计(MFV-1200)探头放置在颈总动脉上，以测定颈内动脉血流量(JCBF)在第七颈椎水平分离出椎动脉，套上内径2mm的电磁流量计(MFV-3100)探头，以测定椎动脉血流量(VCBF)同时用针型电极由ECG6511型心电图仪观察并记录II导联心电图脑血流量(CBF)和脑血管阻力(CVR)按文献[5]公式计算股静脉插管以追加麻醉维持量及给药待各项指标稳定后记录正常参数值，并给药每犬给药一次，给药容积4ml/kg观察并记录给药后120min内各项指标的变化由表4可见注射用银杏内酯冻干粉静脉给药2.5，5.0，10.0mg/kg对CBF和CVR，HR无明显影响，与给药前及对照组比较P＞0.05，而尼莫地平能使脑血流量增加，脑血管阻力减少，表明银杏叶静脉给药不影响麻醉犬的脑血流量和脑血管阻力由表5可见注射用银杏内酯冻干粉静脉给药2.5，5.0，10.0mg/kg对SPA，DAP，MAP无明显影响，与给药前及对照组比P＞0.05，而尼莫地平静脉给药后血压立即开始下降，与给药前和对照组比较P＜0.05，血压下降持续2h以上表4注射用银杏内酯冻干粉(GBI)iv对麻醉犬脑循环的影响(x±s，n＝5) #P＜0.05 ##P＜0.01 υs给药前*P＜0.05**P＜0.01 υs阴性对照表5注射用银杏内酯冻干粉(GBI)iv对麻醉犬血压的影响(x±s，n＝5) #P＜0.05 ##P＜0.01 υs给药前*P＜0.05**P＜0.01 υs阴性对照