专利名称：野菊花注射液制剂及其制备方法 野菊花为菊科植物野菊的干燥头状花序，又称疟疾草、苦薏、山菊花等，野菊之名始见于《日华子本草》，《本草汇言》称其可“破血疏肝，解疗散毒。主妇人腹内宿血，解天行火毒丹疗，洗疮疥，又能去风杀虫”。《中华人民共和国药典》2005年版一部有收载。野菊花呈类球形，黄绿色至棕黄色，气芳香，味苦。以色黄无梗、完整、气香、花未全开者为佳，而花完全开放、散瓣、有花梗、吸潮、色暗、散气者，质次。具有清热解毒、疏风平肝之功效，在我国民间药用历史悠久，现代药理证明野菊花具有广谱抗菌、抗病毒、降压、增加冠脉血流量、清除氧自由基等作用。野菊花中所含的绿原酸、挥发油和总黄酮类化合物是其发挥药效的主要有效成分。野菊花生物活性多样、清香宜人、安全可靠，同时药源广泛、价格低廉，在药品、食品、保健品和化妆品等多领域具有开发价值。已上市的野菊花注射液(WS-11041(ZD-1041)-2002)，其主要用于肌肉注射剂，具有清热解毒功效，用于外感热病、目赤肿痛、咽喉疼痛、上呼吸道感染、急性扁桃体炎属热毒上功者。当前所用的野菊花注射液均为肌注液，使用范围窄，将其改为静脉和肌注同时使用的注射液的优点是使用范围广和起效快等。
本发明的目的是在原有肌肉注射剂的基础上进行改进，提供了一种质量稳定、方便使用的能够供静脉或肌肉使用的野菊花注射液。本发明通过以下技术方案实现。一、制备方法(1)原料药的处方为野菊花。(2)取野菊花药材，加水浸泡2小时，用水蒸汽蒸馏法，收集初蒸馏液约1000ml，再重蒸馏收集重蒸馏液约为500ml，备用。将提取挥发油的水液滤过，药渣再加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.24(40～70℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达到65-70％，冷藏，静置18小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的大孔吸附树脂柱，用5倍量柱体积的水洗脱后，先用5倍量柱体积30％乙醇洗脱后，再用5倍量柱体积40％～50％乙醇水溶液洗脱，最后再用5倍量柱体积65％～80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至500ml(含生药2g/ml)，冷藏18小时，备用。取野菊花提取液500ml和重蒸馏液500ml混合均匀，滤过，加入聚乙二醇5g或吐温805ml，95％乙醇5ml和氯化钠7g，加热回流30分钟，放冷至室温，用20％氢氧化钠溶液调节PH值至7.4～7.6。加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。二、含量测定分析1、野菊花制剂中总黄酮的含量测定1.1仪器与试药日本岛津UV-3000A紫外分光光度计；本发明野菊花注射液(本公司实验室提供)；芦丁对照品(中国药品生物制品检定所)；甲醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠试剂均为分析纯；水为三蒸水(自制)。1.2对照品溶液的制备精密称取干燥的芦丁对照品22mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇适量，溶解后用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
1.3标准曲线制备精密吸取上述对照品溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml，分别置25ml量瓶中，各加入60％乙醇至6.0ml，再加入5％亚硝酸钠溶液各1ml，混匀，放置6min，加入10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min，加入4％NaOH试液10ml，加水至刻度，摇匀，放置15min后，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为Y＝0.458X+0.0028，r＝0.9993，在0.216～1.301范围内对照品的量与吸光度有良好的线性关系。
1.4供试品溶液的制备取本品内容物(本发明野菊花水提取物)，精密称定，取约0.25g，置具塞锥形瓶中，精密加入60％乙醇100ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用60％乙醇补足减失的重量，摇匀，离心(12000rpm)10min，取上清液过滤，取续滤液，即得。
取本发明注射剂一支(三批)，冷干，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％乙醇100ml，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用60％乙醇补足减失的重量，摇匀，离心(12000rpm)10min，取上清液过滤，取续滤液，即得。
1.5总黄酮的测定分别精密量取供试品溶液5ml置25ml容量瓶中，照标准曲线方法进行测定，显色，在500nm波长处测定A值，另精密量取供试品溶液5ml置25ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，在500nm波长处测定A值，取两次吸收度差值，按回归方程计算总黄酮含量。
1.6结果见表表1制剂中总黄酮(以无水芦丁计)含量测定

2、野菊花制剂中绿原酸的含量测定2.1色谱条件色谱柱YMC-Pack ODS-A(250mm×4.6mm，5μm)；柱温室温；流动相甲醇-0.2％醋酸(60∶40)；流速1.0ml/min；检测波长326nm。
2.2标准曲线制备精密称取绿原酸对照品20mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液0.477mg/ml。再准确吸取该溶液0.5ml置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得浓度为0.0239mg/ml的对照品溶液。准确吸取该溶液2、4、6、8、10ul，注入色谱仪，得峰面积和样品量的回归方程A＝35106X-175.77。结果表明，绿原酸的量与色谱峰面积的分值在0.0475～0.3815之间有良好的线性关系。
2.3取三批样品(本发明野菊花水提取物)，精密称定，按上述HPLC法分别测定，结果见表2。
取本发明注射剂一支(三批)，冷干，精密称定，按上述HPLC法分别测定，结果见表2。
表2制剂中绿原酸含量测定


实施例1野菊花 100gNaCl 0.7g聚乙二醇(PEG400) 0.5g注射用水至 100mL按照上述处方量，取野菊花药材，加水浸泡2小时，用水蒸气蒸馏法，收集初蒸馏液约100ml，再重蒸馏收集重蒸馏液约为50ml，备用。将提取挥发油的水液滤过，药渣再加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.24(40～70℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达到65％，冷藏，静置18小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用5倍量柱体积的水洗脱后，先用5倍量柱体积30％乙醇洗脱后，再用5倍量柱体积45％乙醇水溶液洗脱，最后再用5倍量柱体积70％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至50ml(含生药2g/ml)，冷藏18小时，备用。取野菊花提取液50ml和重蒸馏液50ml混合均匀，滤过，加入聚乙二醇(PEG400)0.5g，95％乙醇0.5ml和氯化钠0.7g，加热回流30分钟，放冷至室温，用20％氢氧化钠溶液调节PH值至7.4～7.6。加注射用水至100ml，滤过，灌封，灭菌，分装成50支。
实施例2野菊花 1000gNaCl 7g聚乙二醇(PEG1000) 5g注射用水至 1000mL按照上述处方量，取野菊花药材，加水浸泡2小时，用水蒸气蒸馏法，收集初蒸馏液约1000ml，再重蒸馏收集重蒸馏液约为500ml，备用。将提取挥发油的水液滤过，药渣再加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.24(40～70℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达到70％，冷藏，静置18小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用5倍量柱体积的水洗脱后，先用5倍量柱体积30％乙醇洗脱后，再用5倍量柱体积50％乙醇水溶液洗脱，最后再用5倍量柱体积80％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至500ml(含生药2g/ml)，冷藏18小时，备用。取野菊花提取液500ml和重蒸馏液500ml混合均匀，滤过，加入聚乙二醇(PEG1000)5g，95％乙醇5ml和氯化钠7g，加热回流30分钟，放冷至室温，用20％氢氧化钠溶液调节PH值至7.4～7.6。加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，分装成500支。
实施例3野菊花 100gNaCl 0.7g聚乙二醇(PEG4000) 0.5g
注射用水至 100mL按照上述处方量，取野菊花药材，加水浸泡2小时，用水蒸气蒸馏法，收集初蒸馏液约100ml，再重蒸馏收集重蒸馏液约为50ml，备用。将提取挥发油的水液滤过，药渣再加水煎煮二次，每次一小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.24(40～70℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达到65％，冷藏，静置18小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用5倍量柱体积的水洗脱后，先用5倍量柱体积30％乙醇洗脱后，再用5倍量柱体积45％乙醇水溶液洗脱，最后再用5倍量柱体积70％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至50ml(含生药2g/ml)，冷藏18小时，备用。取野菊花提取液50ml和重蒸馏液50ml混合均匀，滤过，加入聚乙二醇(PEG4000)0.5g，95％乙醇0.5ml和氯化钠0.7g，加热回流30分钟，放冷至室温，用20％氢氧化钠溶液调节PH值至7.4～7.6。加注射用水至100ml，滤过，灌封，灭菌，分装成50支。
实施例4野菊花 100gNaCl 0.7g吐温 800.5ml注射用水至 100mL按照上述处方量，取野菊花药材，加水浸泡2小时，用水蒸气蒸馏法，收集初蒸馏液约100ml，再重蒸馏收集重蒸馏液约为50ml，备用。将提取挥发油的水液滤过，药渣再加水煎煮二次，每次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20～1.24(40～70℃)的浸膏，加乙醇使含醇量达到70％，冷藏，静置18小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加水稀释至溶液∶药材为1∶1，药液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，用5倍量柱体积的水洗脱后，先用5倍量柱体积30％乙醇洗脱后，再用5倍量柱体积50％乙醇水溶液洗脱，最后再用5倍量柱体积75％乙醇水溶液洗脱，合并乙醇洗脱液，减压浓缩至无醇味，加水稀释至50ml(含生药2g/ml)，冷藏18小时，备用。取野菊花提取液50ml和重蒸馏液50ml混合均匀，滤过，加入吐温80 0.5ml，95％乙醇0.5ml和氯化钠0.7g，加热回流30分钟，放冷至室温，用20％氢氧化钠溶液调节PH值至7.4～7.6。加注射用水至100ml，滤过，灌封，灭菌，分装成50支。


本发明提供一种野菊花注射液制剂及其制备方法，其中含有野菊花挥发油提取物、水提取物、助溶剂和注射用水，也可以根据需要添加等渗调节剂。