专利名称：一种人参皂苷的应用的制作方法人参皂苷(ginsenoside，GS)是一种固醇类化合物，人参皂苷主要存在于人参属药材中。人参皂苷是人参的主要有效成分之一，它是人参根的主要生理活性物质。人参皂苷是由三十个碳原子组成的三萜达玛烷环类衍生物，具有类似糖皮质激素留环样的结构。人参皂苷被视为是人参中的活性成分，因而成为研究的目标。因为人参皂苷影响了多重的代谢通路，所以其效能也是复杂的，而且各种人参皂苷的效能是难以分离出来的。目前人参皂苷的制备方法是(1)取人参根、根茎或者人参叶，加入溶剂，将溶液调至碱性后再进行提取，得提取液； (2)提取液上大孔型碱性阴离子交换柱，先用碱水和纯水冲洗，冲洗液弃去，再用含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即得人参总皂苷。人参皂苷是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为RH2单体。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物(如顺钼)联合应用有协同作用。糖皮质激素性骨质疏松是指长期的糖皮质激素治疗导致骨量丢失，增加了骨折的发生率，是继发性骨质疏松症的最常见原因。骨量丢失程度随着糖皮质激素治疗剂量和时间的变化而变化。在最初运用糖皮质激素治疗的6个月里，骨量丢失最严重(5%-15%)，接着以每年2%的速率丢失，骨小梁比皮质骨更受影响。最明显的丢失通常发生在每日7.5mg 或者更高的剂量，并且治疗时间至少3个月以上。骨折的发生率与激素剂量呈依赖性关系。 在停止激素治疗后，脊柱骨折的发生率从第1年的2. 4%下降至第2年的1.8%，随后与对照组的发生率相同。近期的研究数据表明，糖皮质激素治疗不仅导致骨量丢失，而且改变骨的质量，其作用大于雌激素缺失的结果。Carbonare等发现，绝经后妇女和男性病人使用糖皮质激素后骨超微结构发生定性改变，即骨小梁穿孔的增加与骨小梁连接性的丢失相关联。 这些研究表明，糖皮质激素可能会增加骨吸收。糖皮质激素作用于骨组织的机制很复杂，至今尚不清楚。生物和组织学的证据，特别是骨超微结构的研究观察到小梁骨穿孔的增多，表明骨形成的大幅度减少，似乎是糖皮质激素引起的骨质疏松症的潜在机制。中国专利文献CN 101352482A，
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种人参皂苷的应用。为实现上述目的，本发明采取的技术方案是一种人参皂苷的应用，所述的人参皂苷在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。所述的骨质疏松症为糖皮质激素性骨质疏松症。本发明优点在于1、本发明提供了一种人参皂苷的新的用途，拓宽了人参皂苷的药用范围；2、本发明的人参皂苷能对糖皮质激素性骨质疏松症起到疗效，在增强激素疗效的同时可以有效地防治糖皮质激素性骨质疏松症，减轻病人因为激素治疗而引起的骨质疏松；
3、本发明填补了现有糖皮质激素性骨质疏松症治疗技术领域的空白，为糖皮质激素性骨质疏松症患者提供更好的治疗。

作详细说明。实施例1 1、实验材料
实验试剂人参皂苷(购于上海药检所)，DMSO溶液，地塞米松磷酸钠注射液(Dex，由上海第一制药厂提供)。实验动物3月龄雌性Wister大鼠，50只，体重150g左右(由第二军医大学实验动物中心提供)。2、实验方法 (1)动物造模及分组
将小鼠适应性喂养7天后，随机分为5组正常对照组(NC) 10只，模型组(糖皮质激素性骨质疏松模型)(Dex)(小鼠在适应性喂养前，用Dex 0. lmg/100g对其进行皮下注射每日1次，持续8周)10只，人参皂苷治疗组(GS+Dex)30只(高剂量组GS 100 mg/kg,中剂量组 50 mg/kg，低剂量组 25 mg/kg)。(2)实验步骤
实验共12周，前8周人参皂苷治疗组高剂量组、中剂量组、低剂量组三组大鼠均予以 Dex 0. lmg/100g皮下注射每日1次；NC组和Dex组不给药。所有动物在同条件下饲养，自由摄食和饮水，每周称体重1次，根据体质量调节药物剂量。3、观察方法
(1)体质量测量及生长情况观察
实验期间密切观察大鼠生活情况(包括摄食、饮水、活动、皮肤色泽等)，实验前、实验开始后每周用天平测量大鼠体质量，观察其变化。(2)骨密度测定取大鼠第五腰椎(保留椎体和棘突)和右侧股骨分别剔尽其附着软组织，用浸透生理盐水纱布包裹，检测时去掉纱布，将标本置于双能X线骨密度测定仪上测定，计算机采用小动物梯级标准分析软件，并自动记录骨密度。(3)骨生物力学测定
①压缩实验应用大鼠第五腰椎，去除棘突，只保留椎体，实验试件经切割打磨去除软骨板，并使两面平行，将标本置于钢制平台上，保持椎体上下面水平，加载速度为2mm/min， 压缩以过最大载荷为限，计算机得出载荷位移曲线。②三点弯曲实验取右股骨全长，两端用牙托粉浇铸固定后放在试验机上测试，跨距22mm，标本横截面短轴的方向与加载力方向一致，最大加载速度2mm/min，计算机得出载荷挠度曲线。(4)血清学指标检测
各组大鼠均于末次干预给药后禁食12h，用10%水合氯醛lml/kg麻醉后，腹主动脉采血，手机血液离心(300r/min，lOmin)。分离血清，_80°C冰箱冻存待测，分别采用全自动生化分析仪测定血清钙、磷，放射免疫法测定血清BGP、CT含量，及比色法测定血清TRACP酶活性等指标。(5)统计学处理方法
所有数据均以X士S表示，各组之间比较采用单因素方差分析，组间差异用SNK法，P < 0. 05作为差异有统计学意义的检测标准。采用SPSS13. O统计软件进行分析。4、实验结果
(1)大鼠一般生长情况
在激素应用过程中，模型组大鼠逐渐出现毛被稀疏缺乏光泽、懒动、少食、体质量增长缓慢等，而正常组和人参皂苷高剂量组大鼠活动自由，皮毛光泽。实验过程中有4只大鼠因感染和灌胃死亡，被剔除。(2)血清学指标测定结果
反映骨形成指标BGP、CT及血清Ca水平，模型组显著低于正常组，人参皂苷高剂量组显著高于模型组(P<0. 05);反映骨吸收的TRACP酶活性及血清P水平，各组之间无统计学意义 (P > 0. 05)，测定数据见表1和表2。表1人参皂苷对骨质疏松大鼠骨代谢指标的影响(X士S)


本发明涉及一种人参皂苷的应用，所述的人参皂苷在制备治疗骨质疏松症药物中的应用，所述的骨质疏松症为糖皮质激素性骨质疏松症。本发明优点在于本发明提供了一种人参皂苷的新的用途，拓宽了人参皂苷的药用范围；本发明的人参皂苷能对糖皮质激素性骨质疏松症起到疗效，在增强激素疗效的同时可以有效地防治糖皮质激素性骨质疏松症，减轻病人因为激素治疗而引起的骨质疏松；本发明填补了现有糖皮质激素性骨质疏松症治疗技术领域的空白，为糖皮质激素性骨质疏松症患者提供更好的治疗。

公开日2011年12月21日 申请日期2011年7月26日 优先权日2011年7月26日