专利名称：人参皂苷f的制作方法
本发明的目的在于提供人参皂苷F1在制备治疗帕金森氏病的药物中的应用。人参的抗衰老、促智作用经几千年的临床实践已得到充分证实，而帕金森氏病为慢性神经系统变性疾病，为老年人常见病。从而提示我们对来源于人参的成分人参皂苷F1是否具有治疗帕金森氏病的作用进行探索，结果表明人参皂苷F1能改善PD大鼠的旋转行为，从而为人参皂苷F1治疗帕金森氏病提供药效学支持。人参皂苷F1是一种已知的具有药物活性的物质，因此，可以按常规制剂方法，将其制备成临床适用的任何一种药剂，例如片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服固体制剂、口服液体制剂、注射剂等。在制备上述制剂的过程当中，可以将人参皂苷F1与任何一种适用于制备成临床药剂的赋型剂混合使用，制备成药物制剂。通过本发明，人参皂苷F1可有效用于治疗帕金森氏病，并且副作用小。由于人参皂苷F1在制备治疗帕金森氏病的药物中的应用是发明人的首次发现，因此，无论是人参皂苷F1单独使用为活性成分制成的药剂，还是利用人参皂苷F1的抗帕金森氏病活性与其他活性成分配合使用制成的药剂，均在本专利的保护范围之内。本发明通过下列实施方式证明了人参皂苷F1在治疗帕金森氏病方面的用途，但不仅限于这些实施例。
1.2药品、试剂及设备人参皂苷F1按制备例4、5方法制备。
6-羟基多巴购自美国Sigma公司。
阿扑吗啡购自美国Sigma公司。
注射用青霉素钠规格160万单位。天津药业焦作有限公司生产。
维生素C东北制药总厂生产。
实验动物脑立体定位仪(SN2型)为日本成茂公司产品。
小动物旋转监测仪Bacman公司生产。
2分组与给药将造模成功的70只PD大鼠随机分为7组，每组10只，具体如下(1)模型组；(2)人参皂苷F1低剂量组(2.5mg/kg，ig)；(3)人参皂苷F1中剂量组(5mg/kg，ig)；(4)人参皂苷F1高剂量组(10mg/kg，ig)；(5)人参皂苷F1低剂量组(1.5mg/kg，ip)；(6)人参皂苷F1中剂量组(3mg/kg，ip)；(7)人参皂苷F1高剂量组(6mg/kg，ip)。
给药方法各组动物于造模前一周开始腹腔注射或灌胃给药，每天1次，连续3周。
3试验方法3.1造模方法130只SD大鼠，随机分出10只作正常对照组，10只作假手术组(注射等量含2g/L维生素C的生理盐水)，其余110只进行造模。造模方法如下戊巴比妥钠按体重50mg/kg腹腔注射麻醉并固定于立体定位仪，颅骨钻孔，6-羟基多巴(6-OHDA)8μg溶于2μL生理盐水(其中含2g/L维生素C)，微量注射于一侧黑质或/和内侧前脑束，注射完毕留针5min再缓慢拔出，封闭伤口。腹腔注射青霉素10万u/kg，换药，每日1次，7日后拆线。术后2周用0.01％阿朴吗啡腹腔注射(1ml/只)，观察记录每5min向健侧旋转次数及40min旋转的总次数，旋转次数≥7圈/min(280圈/40min)者为阳性。每周1次，连续4周阳性者为合格的PD模型大鼠。假手术组大鼠未出现旋转行为。
3.2观察指标与方法分别于给药第1、2、3周末用盐酸阿扑吗啡诱导检测PD大鼠的旋转行为。
4.结果人参皂苷F1对治疗前后大鼠旋转行为的影响表1显示模型组大鼠旋转圈数不断增加，与治疗前比较2周后即有显著性差异(P＜0.01)；灌胃与注射给药的中、高剂量人参皂苷F1治疗后第2周即可改善PD大鼠的旋转行为，使旋转圈数减少(与模型组比较，P＜0.05或P＜0.01)；灌胃与注射给药的低剂量人参皂苷F1治疗3周后比模型组的旋转圈数减少(P＜0.01)。
表1各组大鼠治疗前后旋转行为比较

注#与治疗前比较，P＜0.05；##P＜0.01；*与模型组比较，P＜0.05；**P＜0.01。
5结论人参皂苷F1能改善PD大鼠的旋转行为。
制备例中所述的人参皂苷Re、人参皂苷Rg1采用云南植物药业有限公司生产的市售品；柚皮苷酶采用上海宝丰生化有限公司生产的市售品；二甲亚砜采用盘锦兴海制药有限公司生产的市售品；甲酰胺采用淄博市博山华耀试剂厂生产的市售品；羧甲基纤维素钠采用上海邦成化工有限公司生产的市售品。
制备例1人参皂苷F1的制备500mg人参皂苷Re、150mg柚皮苷酶溶于50ml磷酸-柠檬酸缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的乙醇)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F1301mg。HPLC法测定人参皂苷F1含量为63％。
制备例2人参皂苷F1的制备500mg人参皂苷Rg1，150mg柚皮苷酶溶于50ml甘氨酸-HCl缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的二甲亚砜)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F1325mg。HPLC法测定人参皂苷F1含量为84％。
制备例3人参皂苷F1的制备500mg人参皂苷Re和Rg1混合物，150mg柚皮苷酶溶于50ml为醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的甲酰胺)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F1310mg。HPLC法测定人参皂苷F1含量为69％。
制备例4人参皂苷F1注射药物的制备取制备例2的人参皂苷F10.1g，加水10ml，加入0.1g吐温80，充分溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，分装，121℃灭菌15min，即得。
制备例5动物试验灌胃药物的制备取制备例1的人参皂苷F10.1g，加水10ml，加入1g助悬剂羧甲基纤维素钠，充分混悬，即得。


人参皂苷F