专利名称：人参皂苷f的制作方法
本发明的目的在于提供了人参皂苷F1在制备治疗白内障的药物中的应用。《本经》“主补五脏，安精神，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。”且临床报道人参有提高视力及增强视觉暗适应的作用，并由人参中有效成分之一20(S)-人参皂苷Rg3开发的20(S)-人参皂苷Rg3眼膏已批准临床研究。从而提示我们对来源于人参的成分人参皂苷F1是否具有治疗白内障的作用进行探索，结果表明人参皂苷F1能明显延缓白内障的形成，减轻晶状体混浊程度，降低MDA含量，提高SOD活性，且都不同程度优于维生素E。从而为人参皂苷F1治疗白内障提供药效学支持。人参皂苷F1是一种已知的具有药物活性的物质，因此，可以按常规制剂方法，将其制备成临床适用的任何一种药剂，例如片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服固体制剂、口服液体制剂、注射剂、滴眼液、眼膏等眼部用药制剂等。在制备上述制剂的过程当中，可以将人参皂苷F1与任何一种适用于制备成临床药剂的赋型剂混合使用，制备成药物制剂。通过本发明，人参皂苷F1可有效用于治疗白内障，并且副作用小。由于人参皂苷F1在制备治疗白内障的药物中的应用是发明人的首次发现，因此，无论是人参皂苷F1单独使用为活性成分制成的药剂，还是利用人参皂苷F1的抗白内障活性与其他活性成分配合使用制成的药剂，均在本专利的保护范围之内。本发明通过下列实施方式证明了人参皂苷F1在治疗白内障方面的用途，但不仅限于这些
1.2药品、试剂及设备人参皂苷F1按制备例5方法制备。
维生素E注射液规格1ml:50mg，石家庄制药一厂生产。
1％硫酸阿托品眼膏上海通用药业有限公司生产。
半乳糖溶液购自上海迈坤化工有限公司。
SOD、MDA测定试剂盒皆为南京建成生物工程研究所产品。
SLM-1裂隙灯显微镜购自重庆康华科技有限公司。
TG-328B电光分析天平购自上海天平仪器厂。
2分组与给药选用1％阿托品散瞳检查晶状体透明的健康Wistar大鼠48只。动物随机分为6组，每组8只。具体如下(1)正常组。给予生理盐水；(2)模型组给予无菌生理盐水；(3)人参皂苷F1低剂量组(2.5mg/kg)；(4)人参皂苷F1中剂量组(5mg/kg)；(5)人参皂苷F1高剂量组(10mg/kg)；(6)维生素E(1.3ml/100g)。
给药方法于制模当天即给予灌胃，每天1次，连续14天。
3试验方法3.1造模方法每日给予除正常组大鼠外各组大鼠腹腔缓慢注入80％半乳糖溶液(20mg/kg)，共14天。
3.2观察指标与方法3.2.1裂隙灯显微镜检查1％阿托品散瞳，每日用裂隙灯检查双眼晶状体混浊情况，记录下其出现I级混浊的时间，末次给药12小时后记录各组大鼠晶状体混浊情况。
裂隙灯下晶状体检查分级晶状体混浊程度按下列标准分级。0期(无混浊)晶状体透明清亮；I期(轻度混浊)仅赤道部有空泡；II期(明显混浊)空泡扩展到中央；III期(皮质混浊)皮质呈现不规则条纹或剑竹状向前极放射的混浊灶，逐渐形成弥漫性灰色→灰白色混浊，晶状体核心尚透明；IV期(核混浊)晶状体除皮质混浊外晶状体核密度增高，色灰或灰白或白色；V期(完全混浊)整个晶状体呈完全性白内障。
3.2.2晶状体及血清SOD、MDA测定实验第14天给药后12小时，裂隙灯显微镜检查后，各组大鼠乙醚麻醉，摘眼球，眼眶取血。摘除之眼球，以冰生理盐水漂洗后，仔细从后路剖开眼球，除去眼球壁及玻璃体，剥离悬韧带，冰盘上小心分离晶状体。以每只大鼠的晶状体为一个标本，用4℃蒸馏水冲洗后，滤纸吸干，分析天平称重，按W/V＝1∶9加入生理盐水中，于冰浴下研磨10min，高速冷冻离心(3000r/min)10～15min后，取其上清液即为10％晶状体匀浆，同时低温离心血液取血清，立即送检测定。
4.结果4.1人参皂苷F1对大鼠晶状体混浊发生时间的影响人参皂苷F1与维生素E皆可延长晶状体发生混浊的时间，与模型组比较有显著性差异，且人参皂苷F1大剂量优于维生素E疗效，两者比较有显著性差异(表1)。
表1各组大鼠晶状体混浊发生时间情况(X±s)

注与模型对照组比较 *P＜0.05；与维生素E组比较 #P＜0.05。
表2各组大鼠晶状体混浊情况

4.2各组大鼠晶状体及血清SOD活性及MDA的含量变化情况(见表3)表3各组大鼠晶状体及血清SOD活性及MDA的含量变化情况(X±s)

注与模型对照组比较 *P＜0.05，**P＜0.01；与维生素E组比较 #P＜0.05，##P＜0.01。
5.结论人参皂苷F1能明显延缓白内障的形成，减轻晶状体混浊程度，降低MDA含量，提高SOD活性，且都不同程度优于维生素E。
制备例中所述的人参皂苷Re、人参皂苷Rg1采用云南植物药业有限公司生产的市售品；柚皮苷酶采用上海宝丰生化有限公司生产的市售品；二甲亚砜采用盘锦兴海制药有限公司生产的市售品；甲酰胺采用淄博市博山华耀试剂厂生产的市售品；羧甲基纤维素钠采用上海邦成化工有限公司生产的市售品。
制备例1人参皂苷F1的制备500mg人参皂苷Re、150mg柚皮苷酶溶于50ml磷酸-柠檬酸缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的乙醇)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F1301mg。HPLC法测定人参皂苷F1含量为63％。
制备例2人参皂苷F1的制备500mg人参皂苷Rg1，150mg柚皮苷酶溶于50ml甘氨酸-HCl缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的二甲亚砜)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F1325mg。HPLC法测定人参皂苷F1含量为84％。
制备例3人参皂苷F1的制备500mg人参皂苷Re和Rg1混合物，150mg柚皮苷酶溶于50ml为醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.5，离子强度为0.01M，含10％的甲酰胺)中，于40℃水浴中水解7天；反应液经离心收集沉淀；用10ml水洗涤沉淀，洗涤3次(10ml×3)，洗液与母液合并，浓缩至50ml供再次使用；用10ml乙醇洗涤沉淀，洗涤5次(10ml×5)，合并乙醇液、蒸干、收集残余物得人参皂苷F1310mg。HPLC法测定人参皂苷F1含量为69％。
制备例4人参皂苷F1注射药物的制备取制备例2的人参皂苷F10.1g，加水10ml，加入0.1g吐温80，充分溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，分装，121℃灭菌15min，即得。
制备例5动物试验灌胃药物的制备取制备例1的人参皂苷F10.1g，加水10ml，加入1g助悬剂羧甲基纤维素钠，充分混悬，即得。


人参皂苷F