专利名称：一种提取纯化丹酚酸b的方法 丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza bunge)干燥的根及根茎，为多年生草本植物，是我国传统医学中的常用药之一，具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦之功效。丹参临床主要用于治疗肾病、肝病、心脑血管疾病等，有着广泛的应用领域。丹酚酸B(Salvianolic acid B or Lithospermic acid B)在丹参干药材中含量约为2~8％，是丹参主要水溶性有效成分之一。药理研究表明，丹酚酸B在清除氧自由基、保护心脑缺血再灌注损伤和保肝护肾等方面具有较强的药理作用。其分子式为C36H28O18，结构式为 丹酚酸B在C-9和C-9′位存在两个酯键，在水中不稳定，易降解。同时水溶性丹酚酸类化合物在结构和理化性质上具有很大的相似性，要大规模地分离出高纯度的丹酚酸B非常困难。现有技术中从丹参中提取丹酚酸B的方法主要有①用水浸取、渗滤提取、超声破碎提取或微波辅助提取丹参酚酸，提取液经酸化后，用多种填料(如大孔树脂类、离子交换树脂、SephadexLH-20凝胶、C18键合相或C8键合相等)的柱层析法纯化制备丹酚酸B(中国专利CN02160771)；②用水提取后，再用壳聚糖絮凝，醇沉、有机溶剂萃取，经硅胶柱纯化制备丹酚酸B(中国专利CN03151476)；③用60~80％丙酮水或60~80％的C1~C5低级醇等有机溶剂为提取剂取代热水浸提丹参粉末，经大孔树脂和聚酰胺二步纯化制取丹酚酸B镁盐(中国专利CN02137375)。现有技术的不足是，用水提取时间长，丹酚酸B降解较多，并且长时间地用水浸泡，容易染菌，并有可能产生有毒物质。有机溶剂的大量使用存在溶剂残留问题，难以保证用药安全，而且分离工艺步骤越多，成本越高，收率越低。
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种工艺简单、收率较高、适于工业生产，而且成本低廉的提取纯化丹酚酸B的方法。本发明的技术方案包括用微波处理和聚酰胺层析两部分，其中微波处理方法有两种，一种是用微波对丹参鲜药材进行处理，一种是用微波对浸泡在水中的药材进行辅助提取，具体步骤为(1)微波提取a.微波对丹参鲜药材的处理取含水量20~65％的丹参药材，均匀地铺成5~20mm的厚度，置于微波场中处理1~10min，使药材中的水份汽化率达到90~99％。然后晒干，或直接按15~15物料比加水进行提取。提取液经纱布过滤后，在1000~5000rpm下离心除去沉淀；b.微波辅助提取将丹参药材粉碎，过10~60目筛，取丹参药材粉末按15~15的料液比加入水，处于微波场中处理1~20min，提取液经初步过滤后，在1000~5000rpm下离心除去沉淀；(2)聚酰胺柱纯化离心后的上清液经聚酰胺(聚己内酰胺，polyamide)柱层析，依次用5~15倍柱体积的水、1~2倍柱体积20％~50％的乙醇洗脱除杂，然后再用60％~80％的乙醇洗脱丹酚酸B，合并含有丹酚酸B的洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后，得到纯度大于95％的丹酚酸B。在步骤(1)中水要用有机酸或无机酸将pH值调节至1~4。在步骤(2)的聚酰胺层析过程中，可以通过薄层层析或高效液相色谱分析检测方法，检测洗脱液中丹酚酸B的含量。
本发明的效果和益处是①丹参鲜药材经微波处理后，有杀菌作用，减少了药材在晾晒、存储过程中的霉变；②丹参药材经微波处理后，由于细胞内水份受热迅速汽化，使细胞壁破裂，从而明显加快丹酚酸B的浸出速度；③采用微波辅助提取技术，用水作提取剂，短时间内达到提取目的，既避免了丹酚酸B的降解和染菌，又减少了杂质的溶出；④用聚酰胺作填料一步层析，减少工艺步骤，节约生产成本； ⑤以食品级乙醇作洗脱剂，排除有毒物质的残留，保证药用安全；⑥工艺简单，设备投资少，成本低廉，丹酚酸B纯度高，容易实现工业化。

以下结合技术方案，详细叙述本发明的实施例。
实施例一取丹参鲜药材150g(切片长度3cm左右)，在频率为2450Hz的微波场中用中火处理8min。晒干得丹参80g，加入800ml水浸提，提取液用纱布过滤后，在3000rpm下离心除杂，离心液上聚酰胺柱(25×600mm)，树脂床体积为250ml，先用750ml水、250ml 20％的乙醇和375ml 50％的乙醇洗脱除杂，然后再用375ml 70％的乙醇洗脱丹酚酸B，收集含丹酚酸B的洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后，得到纯度为98.5％的丹酚酸B。
实施例二丹参药材粉碎，过40目筛，取丹参粉末30g，加入300ml水，在频率为2450Hz的微波场中处理3min，用纱布过滤后，在3000rpm下离心除杂，离心液上聚酰胺柱(25×600mm)，树脂床体积为100ml，先用300ml水、100ml 20％的乙醇和150ml 50％的乙醇洗脱除杂，然后再用400ml 70％的乙醇洗脱丹酚酸B，收集含丹酚酸B的洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后，得到纯度为97.5％的丹酚酸B。


本发明属于天然产物的提取与分离纯化技术领域，涉及从鼠尾草属植物中提取纯化丹酚酸B的方法，特别涉及从丹参中提取纯化丹酚酸B的方法。其特征是首先丹参鲜药材置于微波场中处理1~10min后，按一定的料液比加水浸提，或者把丹参药材粉碎10~60目，按一定的料液比加入水，置于微波场中处理1~20min，离心去除沉淀，然后经聚酰胺层析，依次用水和20~50％的乙醇洗脱除杂，再用60~80％的乙醇洗脱丹酚酸B，合并含丹酚酸B的洗脱液，经减压浓缩、冷冻干燥后得纯度大于95％的丹酚酸B。本发明的效果和益处是工艺简单，设备投资少，成本低，产品中丹酚酸B纯度高，质量稳定，适合大规模工业化生产。