专利名称：一种红参有效组分的制备方法与用途的制作方法肿瘤是一种常见病、多发病，其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾 病。我国危害性最为严重的肿瘤为肺癌、鼻咽癌、食管癌、胃癌、大肠癌、肝癌、乳腺癌、宫颈 癌、白血病及淋巴瘤等。特别是肝癌的发生率近年来有所增加。值得重视，这些肿瘤的病因 学、发病学及其防治，均为我国肿瘤研究的重点。寻找高效低毒的抗癌药物以及抗癌辅助药 物是当前肿瘤研究的重要内容。红参是五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey.的栽培品经蒸制后的干燥根 及根茎，具有大补元气，益血，养心安神的作用。现代药理研究及临床流行病学调查发现，人 参对多种肿瘤具有非器官特异性的预防作用，在降低肿瘤发生率、治疗及预防肿瘤复发方 面有重要作用。红参中含有多种人参皂苷，应用报道也比较多，本方法从红参中分离制备出纯度 较高的小极性环氧炔醇成分，具有较好的抑制肿瘤作用，对于开发治疗肿瘤疾病的现代中 药具有重要的意义。
本发明的目的是提供一种红参有效组分的制备方法，通过以下步骤实现将红参 药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶 进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I， 弃之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样品粗品； 用制备液相色谱继续分离得到样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱，流动相为 水和乙腈，梯度洗脱，获得的有效组分主要含有人参环氧炔醇。优选的，本发明的红参有效组分制备方法，通过以下步骤实现将红参药材粉碎后 加入体积比为1:0. 8 1. 2的乙酸乙酯和乙醇，加热回流0. 8 1. 2小时，提取广3次，合并滤 液得提取液，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离， 首先用体积比为47飞3:1的石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃之，然后改用体 积比为纩13:1的氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样品粗 品；用制备液相色谱继续分离得到样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱，流动相 为水和乙腈，梯度洗脱。最佳的，本发明的红参有效组分制备方法，通过以下步骤实现取红参药材，将 其粉碎后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得 提取液I。将提取液I浓缩成浸膏，用乙醇溶解浸膏，采用正相硅胶柱对其进行分离，首 先用体积比为50: 1的石油醚乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，然后改用体积比为10: 1的氯仿甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，洗脱液II浓缩干燥后得样品粗品；用制 备液相色谱继续分离得到样品制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱(Lichrospher C18 ； 10. OmmX 250mm, 5Mm)，流动相为水A和乙腈B,梯度洗脱程序如下:0min, 50% B, 20in, 95%B ；流速为3. 0 ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时 间段11. 4-18. 3min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分；本发明的另一个目的是提供上述方法获得的有效组分在制备治疗和预防肿瘤疾病药 物中的应用。经药理实验证明，本发明提供的红参有效组分可以.抑制人源鼻咽癌细胞、人 源乳腺癌细胞等肿瘤细胞。本发明提供的红参有效组分作为活性成分，加入药剂学上接受的辅料，按照药剂 学上记载的制剂的制备方法制成制剂。所述的制剂包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣 片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、 丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。本发明的有益效果为提供的制备方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在 生产中更易于药物的质量控制。根据本发明方法制备获得的红参有效组分可在制备治疗和 预防肿瘤疾病药物中的应用。图1是红参有效组分的HPLC色谱图，其中1为人参环氧炔醇。图2是红参有效组分1号色谱峰质谱图。
将200g红参药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取得提取液I，将提取液I浓 缩成浸膏7. 6g，用乙醇溶解浸膏，采用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙 酯作为洗脱剂，得洗脱液I，然后改用氯仿和甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得 样品2. Sg ；用制备液相色谱继续分离得到样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备 柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱，样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段 11. 4-18. 3min收集溶液，浓缩干燥后得到有效组分0. 28go实施例二红参有效组分的制备
将500g红参药材粉碎后加入体积比为1:1. 2的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1. 2小时， 提取2次，合并滤液得提取液I，将提取液I浓缩成浸膏21. 0g，用乙醇溶解浸膏，采用正相 硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为47: 1石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I， 然后改用体积比为8: 1氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品3. 9g ；用 制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为半制备柱，流动相为 水和乙腈，梯度洗脱，流速为3ml/min，柱温为室温，在时间段11. 4-18. 3min收集溶液，溶液 经浓缩干燥后得到有效组分0. 71g。
实施例三红参有效组分的制备
取红参药材250g，将其粉碎后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小 时，提取2次，滤液合并得提取液I。将提取液I浓缩成浸膏得10. 2g，用乙醇溶解浸膏，采 用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50: 1的石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得 洗脱液I，然后改用体积比为10: 1的氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，浓缩干燥后 得样品2. Og ；用制备液相色谱继续分离得到的样品制备色谱的分离条件色谱柱为半制 备柱(Lichrospher C18; 10. Ommχ
250mm, 5 μιη )，流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下0min，50% B, 20 min,95%B ； 30min，100% B ；50min, 100% B ；流速为:3ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备 液相色谱分离，在时间段11. 4-18. 3min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分0. 35g。 该有效组分主要含有人参环氧炔醇，其色谱图及质谱图见图广2。实施例四滴丸的制备
取红参有效组分0. 2g与4. 2g聚乙二醇-20000混合均勻，加热熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，药液滴至6、V液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。实施例五冻干粉针剂的制备
取红参有效组分0. 2g、葡萄糖1. Sg、硫代硫酸钠0. 36g和蒸馏水400ml，上述组分混合 均勻后，分装160支，冷冻干燥，即得。实施例六红参有效组分的活性评价实验
体外培养Kb、K562、MCF-7肿瘤细胞，开展红参组分抗肿瘤细胞增殖活性评价实验。培 养条件37°C，5%二氧化碳，培养液配比90% DMEM培养基或RPMI1640培养基+ 10%胎牛 血清(体积比)+ 200U/L双抗。将得到的红参有效组分用无糖Hanks液(加入少量DMSO助 溶)溶解后加入96孔板培养的肿瘤细胞孵育48小时，采用MTT法评价其抗肿瘤增殖活性。 结果表明，红参有效组分对于Kb、K562、MCF-7肿瘤细胞这三种肿瘤细胞增殖具有显著抑制 作用，且在其浓度为50，100，200μδ/πι1时，对Kb细胞增殖的抑制率分别为15. 6 38.8% 和 98. 5%ο


本发明的目的是提供一种红参有效组分的制备方法，将药材通过加热提取，浓缩，硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用制备液相色谱继续分离，收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分，该有效组分主要含有人参环氧炔醇。本发明提供的红参有效组分可在制备治疗、预防肿瘤疾病药物中的应用。本发明制备方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在生产中更易于药物的质量控制。