专利名称：一种生产超氧化物歧化酶sod的除杂纯化新工艺的制作方法超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)简称S0D,是生物体内重要的抗氧化酶，广泛存在于微生物和动植物中。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量的形成，现代医学已经证实由自由基引发的疾病多达一百多种，严重地威胁着我们的健康与长寿。目前，SOD已广泛应用于医药、食品、保健品、化妆品等行业，市场前景十分广阔。目前，从动物血球液中提取超氧化物歧化酶的方法主要是收集新鲜血，抗凝，溶血，氯仿乙醇沉淀血红蛋白，丙酮沉淀，再经过离子交换层析和分子筛层析进行纯化。该方法存在下列缺陷第一，氯仿-乙醇沉淀去除血红蛋白，可以得到粗酶液，但血红蛋白被严重污染，无法综合利用，造成资源浪费，同时有机溶剂成本较高；第二，用丙酮沉淀可以得到SOD粗酶液，但丙酮不仅对SOD的活力破坏比较大，还会残留在SOD终产品中，影响产品的安全性
本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的不足，而提供一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，该工艺简单、成本低廉、高安全性，适合于工业化生产的新工艺。如上构思，本发明的技术方案是一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，包括以下几个步骤(I)在新鲜的动物血液中加入食品级柠檬酸钠做抗凝处理，添加量为3. 5-5g/Kg动物血，离心收集红细胞，然后加入红细胞体积1-3倍的去离子水,不断搅拌,使红细胞破碎，得溶血液；(2)向溶血液中加入单价金属盐，至单价金属盐终浓度为0.07M 4M，调节PH值到4. 0-7. 0，加热至55-75°C，保温反应30_100min，离心取上清，即得超氧化物歧化酶粗提液；(3)在超氧化物歧化酶粗提液中加入可溶性铜盐，至铜离子终浓度为3mM 16mM，加热至55 80°C,保温反应15 60min后,离心去洛,上清液用中空纤维超滤装置进行超滤浓缩得超氧化物歧化酶浓缩液；(4)在超氧化物歧化酶浓缩液中，加入预冷乙醇进行沉淀，离心取沉淀，沉淀用去离子水溶解后，离心去不溶物，上清液通过阴离子交换树脂层析柱和分子筛进行纯化，冷冻干燥，制得超氧化物歧化酶精品冻干粉；本发明使用的中空纤维超滤装置选择截留分子量为4K-15K的膜组件，保持回流压 0.04-0. IMPa0本发明中的预冷乙醇沉淀是分两步进行的，首先加入浓缩液体积0. 4-1倍体积的预冷乙醇，离心取上清；在上清液中继续加入预冷乙醇，两次加入的乙醇总体积为原浓缩液体积的I. I 2. 0倍。本发明中使用的单价金属盐采用氯化钠。本发明中使用的可溶性铜盐采用氯化铜。 本发明的优点是(I)生产中没有使用氯仿、丙酮等有毒有害溶剂，大大降低了生产成本，改善了工作环境，减少了对操作人员的毒害，同时提高了产品的安全性；(2)反应中得到的血红蛋白沉淀没有受到污染，可以进一步利用，加工成血粉等产品;(3)引入超滤浓缩装置，既能有效的对SOD进行纯化，又极大的压缩了浓缩液的体积，使得乙醇的用量减少，操作起来方便快捷，适合大规模工业化生产。本发明公开超氧化物歧化酶SOD除杂纯化新工艺，主要步骤包括动物新鲜血液经抗凝处理后，离心分离得到血球液，经溶血，热变性，超滤浓缩，乙醇分级沉淀得SOD粗品。粗品再经阴离子交换树脂、分子筛层析纯化后冷冻干燥得SOD精品。本方法没有使用任何对人体有害的有机试剂，不仅有效地避免了SOD产品中有毒、有害有机试剂的残留，提高了产品的安全性和使用范围，而且降低了生产成本。本发明方法操作工序简单，生产成本低廉，适于用工业化生产。