专利名称：人参皂苷-Rd透皮吸收渗透促进剂及其应用的制作方法人參皂苷-Rd是从三七总皂苷中分离提取出来的单体，三七总皂苷是五加科植物三七的有效成分。人參皂苷-Rd还广泛存在于五加科植物人參的根、花蕾、叶、芦头、茎中。同时人參皂苷-Rd也是ニ醇型人參皂苷在人体肠道内的主要代谢产物。人參阜苷-Rd(Ginsenoside Rd)是四环三職类衍生物，属原人參ニ醇型阜苷。 它的中文化学名为20-(S)_原人參ニ醇-3-20_0-β -D-卩比喃葡萄糖苷，英文化学名为20 (S) -Protopanaxadiol 3-0- [ β -D-glucopyranosyl (I — 2) - β -D-glucopyranosyl] -20-0- β -glucopyranoside,分ナ式C48H82O18 ·3Η20，相对分子量1001. 20 ;外观为白色至微黄色粉末，无臭，易溶于甲醇、こ醇、丙ニ醇及正丁醇，溶于丙酮、氯仿及热水。主要理化常数为熔点206-209°C，在甲醇介质中紫外吸收Xmax = 203nm。人參阜苷-Rd的结构式见图I。已有的研究表明，人參皂苷-Rd具有多种医药功效，其中包括(a)保护心脑血管的作用。已通过微循环、血浆复钙试验证实人參皂苷-Rd是三七等中药具有活血化瘀作用的有效成分。广东泰和医药科技有限公司所做的药效学实验也证实，人參皂苷-Rd是ー种血管平滑肌受体操纵Ca2+通道抑制剂，与三七总皂苷具有相同的作用靶点，即能通过受体操纵途径特异性地阻断受体操纵Ca2+通道，是活血化瘀药的有效单体。动物实验也表明，人参皂苷-Rd能明显抑制高血压脑血管重构，降低易卒中型自发性高血压大鼠(SHR-SP)中风率及死亡率，保护脑细胞。(b)免疫调节作用。人參皂苷-Rd可以显著提高刀豆蛋白A (Con A)诱导的小鼠脾细胞白细胞介素-2 (IL-2)、干扰素、IL-4和IL-IOmRNA表达，表明人參皂苷Rd有免疫佐剂活性。动物试验还证实人參皂苷-Rd有免疫抑制作用，能明显抑制小鼠迟发型超敏反应、ConA诱导的人T淋巴细胞增殖及大鼠同种异体皮肤移植后的免疫排斥反应。(c)抗炎作用。A.,— -Rd(100yg/ml)可以诱导环氧合酶C0X-2的表达。动物试验证实，人參皂苷-Rd静脉和肌肉注射均有显著的抗炎作用，能显著抑制角叉菜胶引起的大鼠及小鼠足肿，使足肿胀度明显下降。(d)镇痛作用。人參皂苷-Rd具有抗伤害性感受能力，并且呈现剂量依赖性关系，但不会影响到运动功能；且人參皂苷-Rd抗伤害性感受不被阿片受体阻断剂纳洛酮阻滞，说明其主要抑制化学成因疼痛，而对非阿片受体引起的热痛无效。(e)抗自由基作用。缺血再灌注体内外实验中发现，人參皂苷-Rd可以保护相关酶系，对氧化应激有抑制作用，具有抗氧化活性。已发现人參皂苷-Rd可以修复损坏的自由基清除系统，減少自由基诱导的损伤。(f)神经系统保护作用。人參皂苷-Rd对突变型模型神经干细胞球分化为星形胶质细胞有显著的促进作用，从而保护中枢神经系统。此外，人參皂苷-Rd能够改善运动系统功能，减小纹状体损伤面积，具有神经保护作用。 药物应用于皮肤上后，穿过角质层，扩散通过皮肤，由毛细血管吸收转运至局部靶组织或全身血液循环的过程称为透皮吸收或经皮吸收。经皮给药系统(transdermal drugdelivery system, TDDS) 一般是指经皮肤给药而起全身治疗作用的控释制剂,是经皮给药的新剂型，包括软膏、硬膏、贴剂、巴布剂，还可以是涂剂和气雾剂等。经皮给药系统具有超越一般给药方法的独特优点(I)提高药物在体内的预见性，可避免ロ服给药可能发生的肝脏首过效应和药物在胃肠道的降解，药物吸收不受胃肠道影响，比ロ服给药更稳定地直接进入血流，減少用药的个体差异，也可減少药物对胃肠道的刺激作用，提高制剂的生物利用度和治疗效果；(2) —次给药可以长时间使药物以恒定速率进入体内，減少给药次数，延长给药间隔；(3)可按需要的速率将药物输入体内，維持恒定的血药浓度，避免ロ服给药等引起的血药浓度峰谷现象，降低了毒副作用，是具有更好性能的药物制剂；(4)使用方便，可以随时中断给药，去掉给药系统后，血药浓度下降，減少了 ロ服或注射给药的危险性，特别适合于婴儿、老人或不宣ロ服的病人。但是，并不是所有的药物都适于开发成经皮给药系统，选择经皮给药所考虑的最主要因素是临床的合理性。药物在胃肠道的降解、通过肝脏的首过效应、生物半衰期短和需长期给药等都是应考虑的因素。其次，由于皮肤(特别是角质层)对药物透皮吸收的屏障作用，除了少数剂量小和具有适宜溶解性的小分子药物，大部分药物的透皮速率都满足不了治疗要求，因此克服皮肤屏障作用，提高药物的透皮速率，促进药物在一定时间内透皮渗透达到治疗量也是开发经皮给药系统的关键。促进药物经皮渗透主要是通过提高药物通过皮肤的能力、降低皮肤的屏障性能和利用微粒载体帮助药物穿透皮肤等途径而实现的。根据不同药物，促进药物经皮渗透的方法有多种，但主要有(I)滲透促进剂法；(2)超声波滲透法；(3)离子电渗法。应用渗透促进剂是目前研究最多的降低皮肤屏障性能的方法。滲透促进剂是指能够透入皮肤降低药物透过皮肤阻力的材料，作用原理可能是通过增加类脂骨架无序性ニ增加皮肤的非均匀性，打开新的渗透途径。理想的滲透促进剂应具备的条件包括(I)对皮肤及机体无药理作用、无毒、无刺激性及无过敏反应；(2)起效快，应用后立即起作用，具有预期作用时间，能可逆地降低皮肤的屏障性能，而又不损害皮肤的其它功能，去除后皮肤能恢复正常的功能；(3)不引起体内营养物质及水分通过皮肤损失；(4)理化性质稳定，与制剂中所有组分不出现配伍禁忌；不与药物及其他附加剂产生物理化学作用；(5)无色、无臭、无刺激性气味。滲透促进剂种类繁多，化学结构不同，对不同有效成分的促滲透作用也不相同。例如，尿素是ー种常用的滲透促进剂。已报道，I %尿素可使氟比洛芬经皮滲透速率提高1.1倍(田薇，王茂义，杨亚惠，等.促渗剂对布洛芬透皮吸收速率的影响.中国医药エ业杂志，1996 ；27(4) :161-162)。目前，虽然人參皂苷-Rd的药物组合物有多种剂型，常见剂型是ロ服剂型和注射剂型。然而，这些剂型也存在ー些缺点。例如，人參皂苷-Rd临床现有制剂只有注射剂，规格较小，仅IOmg/支，且限制于静脉滴注，不能直接静脉注射给药。肌肉注射刺激性大，且有一定副作用。此外，人參皂苷-Rd作为三七中活血化瘀药的有效成分,主要用于脑出血、脑血栓形成、脑梗塞等脑血管疾病的治疗。若人參皂苷-Rd用于脑梗塞等脑血管疾病的治疗，静脉滴注给药途径只能用于此类疾病的急性期，而在疾病的预防和恢复期，静脉滴注的给药方式难以长期应用。此外，对于ロ服而言，研究表明，三七提取物及人參皂苷-Rd等18种单体纯品对大鼠灌胃，发现结肠内有大量脱糖基皂苷存在，血浆中的主要皂苷是Ra3、Rb1和Rd，但血浆中药物浓度很低，平均ロ服生物利用度仅O. 1%-O. 2% (Liu H F，et al. Absorption anddisposition of ginsenosides after oral administration of Panax notoginsengextract to rats. Drug Metab Dispos，2009 ;37 :2090-8)。因此人參皂苷-Rd ロ服生物利用度低，不宣通过ロ服途径给药治疗全身性疾病。 经皮给药制剂具有超于一般给药方法的独特优点，可以避免ロ服给药生物利用度低和注射给药的一系列问题，而且可以长期给药，尤其适用于脑血管疾病预防和恢复期的长期治疗，但是，目前本领域未见令人满意的透皮吸收或经皮吸收剂型。因此，本领域迫切需要开发新的能够有效通过透皮给药或经皮给药的人參皂苷-Rd的制剂。
本发明的ー个目的就是提供适用于制备人參皂苷-Rd经皮给药制剂的滲透促进剂及其组合。本发明的另ー个目的就是提供有效的人參皂苷-Rd经皮给药制剂或透皮给药制剂的制备方法。本发明的另ー个目的就是提供有效的人參皂苷-Rd经皮给药制剂或透皮给药制剂及其应用。在本发明的第一方面，提供了ー种人參皂苷-Rd体外透皮吸收的渗透促进剂，其中所述的渗透促进剂选自下组氮酮、薄荷醇、月桂醇或其组合。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂含有氮酮、薄荷醇、月桂醇中的两种或三种物质。在另ー优选例中，所述的滲透促进剂同时含有氮酮、薄荷醇和月桂醇。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂中各组分的含量如下0-10重量份数的氮酮；0-15重量份数的薄荷醇；0-15重量份数的月桂醇；附加条件是至少一种组分的含量不等于O重量份数。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂中各组分的含量如下1-5重量份数的氮酮；0. 5-10重量份数的薄荷醇；0. 5-10重量份数的月桂醇。在本发明的第二方面，提供了一种物质的用途，所述物质选自下组氮酮、薄荷醇、月桂醇或其组合，其中所述的物质被用于制备促进人參皂苷-Rd体外透皮吸收的渗透促进剂或药物组合物。在本发明的第三方面，提供了ー种药物组合物，所述的药物组合物含有(a)人参阜苷-Rd; (b)药学上可接受的载体；和(C)本发明第一方面中所述的人參阜苷-Rd体外透皮吸收的渗透促进剂。在另ー优选例中，所述的药物组合物的剂型为透皮吸收剂型或经皮吸收剂型。更佳地，所述的药物组合物的剂型包括软膏、硬膏、贴剂、巴布剂、涂剂或气雾剂。在另ー优选例中，所述的药物还含有丙ニ醇作为人參皂苷-Rd的药物溶媒。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂选自下组(i) I. 5-2. 5wt%氮酮 +2. 5-7. 5wt%薄荷醇 +0. 5-2wt%月桂醇；、(ii) 2-4wt%氮酮 +0. 5-2wt%薄荷醇 +2. 5-7. 5wt%月桂醇；或(iii) 2~4wt %氮酮 +2_4wt %薄荷醇 +0. 5_2wt %月桂醇。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂选自下组(i) I. 5-2. 5体积％氮酮+2. 5-7. 5wt%薄荷醇+0. 5-2体积％月桂醇；(ii)2-4体积％氮酮+0. 5_2wt%薄荷醇+2. 5-7. 5体积％月桂醇；或(iii) 2-4体积％氮酮+2-4wt%薄荷醇+0. 5-2体积％月桂醇。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂选自下组(i) 2体积％氮酮+5重量％薄荷醇+1体积％月桂醇；(i i) 3体积％氮酮+1重量％薄荷醇+5体积％月桂醇；或(iii)3体积％氮酮+3重量％薄荷醇+1体积％月桂醇。在本发明的第四方面，提供了一种提高人參皂苷-Rd或含人參皂苷-Rd的制剂中的人參皂苷-Rd的体外透皮吸收的方法，所述的方法包括向人參皂苷-Rd或所述制剂中添加选自下组的渗透促进剂氮酮、薄荷醇、月桂醇或其组合。在另ー优选例中，所述的制剂是药物制剂，更佳地所述的制剂包括软膏、硬膏、贴齐U、巴布剂、涂剂或气雾剂。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂选自下组(i) I. 5-2. 5wt%氮酮 +2. 5-7. 5wt%薄荷醇 +0. 5-2wt%月桂醇；(ii) 2-4wt%氮酮 +0. 5-2wt%薄荷醇 +2. 5-7. 5wt%月桂醇；或(iii) 2~4wt %氮酮 +2_4wt %薄荷醇 +0. 5_2wt %月桂醇。在另ー优选例中，所述的渗透促进剂选自下组(a) 2体积％氮酮+5重量％薄荷醇+1体积％月桂醇；(b) 3体积％氮酮+1重量％薄荷醇+5体积％月桂醇；(c) 3体积％氮酮+3重量％薄荷醇+1体积％月桂醇。在本发明的第五方面，提供了ー种由氮酮、薄荷醇和月桂醇构成的混合物，所述混合物中各组分比例如下1-5重量份数的氮酮；O. 5-10重量份数的薄荷醇；O. 5-10重量份数的月桂醇。在另ー优选例中，所述的混合物中各组分如下I. 5-4重量份数的氮酮；O. 75-7. 5重量份数的薄荷醇；O. 75-7. 5重量份数的月桂醇。在另ー优选例中，所述的混合物的配方如下(a) 2体积份数氮酮+5重量份数薄荷醇+1体积份数月桂醇；(b) 3体积份数氮酮+1重量份数薄荷醇+5体积份数月桂醇；(c) 3体积份数氮酮+3重量份数薄荷醇+1体积份数月桂醇。在本发明的第六方面，还提供上述混合物的用途，它被用于制备促进人參皂苷-Rd体外透皮吸收的药物组合物；或者用于制备或用作促进人參皂苷-Rd体外透皮吸收的渗透促进剂。在本发明中，当I重量份数=I克时，则I体积份数=I毫升。因此，I体积份数氮酮可对应于I毫升氮酮，I重量份数薄荷醇可对应于Ig薄荷醇，而I体积份数月桂醇可对应于I毫升月桂醇。其他各重量份数或体积份数可依次类推。·应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在
此不再一一累述。


图I显示了人參皂苷-Rd的化学结构。图2显示了人參皂苷-Rd的标准曲线。图3显示了溶剂(甲醇/生理盐水，1/1，v/v)的HPLC图。图4显示了人參皂苷-Rd在溶剂(甲醇/生理盐水，1/1，v/v)中的HPLC图。图5显示了不加渗透促进剂时接受液的HPLC图。图6显示了渗透促进剂为2%氮酮时接受液中人參皂苷-Rd的HPLC图。图7显示了渗透促进剂为3%薄荷醇时接受液中人參皂苷-Rd的HPLC图。图8显示了渗透促进剂为3%月桂醇时接受液中人參皂苷-Rd的HPLC图。图9显示了渗透促进剂2%氮酮单用和联合应用(2%氮酮+5%薄荷醇+1%月桂醇)促进人參皂苷-Rd体外经皮渗透吸收的曲线。图10显示了本发明ー个实例中，人參皂苷-Rd贴剂制备エ艺I的流程图。

l-99wt %。(此处wt %指人參皂苷-Rd溶液在药物组合物中所占的重量百分比,重量单位为克)。在本发明的一个实施方式中，所述药物组合物中包含O. 5-7. 5g% (W/V)的本发明的人參皂苷-Rd溶液，优选O. 5-7. 5g% (W/V)，更优选O. 5-2. 5g% (W/V)。(其中的单位(W/V)是指每IOOml药物组合物中含有的人參皂苷-Rd溶液的克数)。在本发明的另ー实施方式 中，以药物组合物总体积为基准计，所述药物组合物中所含人參皂苷-Rd的量为5-100mg/ml,更优选 5-75mg/ml,最优选 5_25mg/ml。本发明的药物组合物为外用制剂形式，包括类透皮吸收剂型或经皮吸收剂型。代表性的剂型包括(但并不限于)软膏、硬膏、贴剂、巴布剂、涂剂或气雾剂。在本发明的另ー实施方式中，所述药物组合物还包含其它活性物质或可与这些活性物质联用，所述其它活性物质选自(但并不限于)抗炎药、免疫抑制剂、急性缺血性脑卒中治疗剂、抗器官移植排斥剂、抗溃疡性结肠炎药、抗血小板药、纤维蛋白溶解药、抗凝血药、脑保护药。本发明的药物组合物可用常规方法和设备进行制备。本发明的主要优点包括(a)本发明的滲透促进剂可以有效促进人參皂苷-Rd的透皮吸收；(b)本发明的透皮或经皮给药制剂可以避免ロ服给药生物利用度低，适合长期给药，尤其适用于脑血管疾病预防和恢复期的长期治疗；(C)本发明的透皮吸收渗透促进剂的组合物有使人參皂苷Rd释放缓慢，在血浆中存在时间长而使其作用持续时间长的特点，可用于慢性炎症及自身免疫性疾病的长期治疗，如可用于溃疡性结肠炎、器官移植排斥的长期治疗，以及风湿性关节炎、类风湿性关节炎、红斑狼疮、风湿与类风湿性脊柱炎的长期治疗。(d)本发明的另ー个特点是透皮或经皮给药制剂临床用药方便，病人的依从性更好。下面结合具体实施例，进ー步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册■ (New York Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。在本申请和实施例中，除非另外说明，否则氮酮和月桂醇的百分比和份数为体积百分比和体积份数，薄荷醇的百分比和份数为重量百分比和重量份数。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例I人參皂苷-Rd的体外透皮吸收的渗透促进剂的筛选I材料与仪器I. I 动物昆明种小鼠，ふ体重18_22g，购自兰州大学实验动物中心，合格证号 SCXK (甘)2005-0007。I. 2药品与试剂人參皂苷_Rd，由广东泰禾生物药业有限公司提供，批号080312。氮酮，上海元越化工有限公司，分析纯；薄荷醇，上海中秦化学试剂有限公司，分析纯，批号20081225 ；N-甲基吡咯烷酮，天津市博迪化工有限公司，分析纯；月桂醇，天津市光复精细化工研究所，分析纯；尿素，上海建信化工有限公司试剂厂，分析纯；松节油，天津市红岩化学试剂厂，分析纯，批号20060602 ；丁香油，国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号F20060403 ；冰片，四川青神康华制药有限公司，分析纯；I. 3 仪器TT-6 (B)透皮吸收试验仪(包括HC-188加热水循环器、MSE-1600磁力搅拌器、TT-6 (B)有机玻璃水箱、Franz扩散池)，由天津市正通科技有限公司提供；岛津公司高效液相色谱仪LC-10AT，Sro-MlOAvP ニ极管阵列检测器，SIL-HT自动进样器，D⑶-HA在线脱气机，LC-10ATvP输液泵，CTO-1OAvP柱温箱，Solution色谱工作站。722s可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司产品。XW-80A涡旋混合器，江苏海门市麒麟医用仪器厂产品；电子天平，型号FA1604S，上海天平仪器厂制造。2 方法2. I人參皂苷-Rd测定方法的建立2. I. I测定条件色谱柱岛津VP-ODS C18柱(150X4. 6mm, 5 μ m);流动相甲醇-こ腈-IOmMこ酸胺(70/10/20，v/v/v);流速 O. 450ml/min ;检测波长203nm ;柱温25°C ;室温20-23°C ;进样量10μ I ;保留时间11. 40-12. 20min。2. I. 2标准曲线用甲醇/生理盐水(1/1，v/v)准确配制浓度为lmg/ml的人參皂苷-Rd贮备液。进ー步用该溶剂稀释成浓度为5、10、100、300、500μ g/ml的标准工作液。标准工作液经
O.22 μ m滤膜过滤，取10 μ I进样，按上述色谱条件測定相应的人參皂苷-Rd色谱峰面积。以测得的人參皂甙-Rd色谱峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得人參皂苷-Rd在溶剂(甲醇/生理盐水，1/1，v/v)中的标准曲线方程为A = 3678. 9C+28603 (r = O. 9995，η =5，图2)，表明人參皂苷-Rd浓度在10-500 μ g/ml范围内线性关系良好，而且，从图3和图4中可明显看出，在203nm处，人參皂苷-Rd在溶剂(甲醇/生理盐水，1/1，v/v)中的色谱吸收峰不会受到溶剂色谱吸收峰的干扰。2. I. 3方法精密度和回收率按2. 1.2项下配制方法配20、100、40(^8/1111的人參皂苷-Rd样品溶液，连续测定其峰面积，依据标准曲线方程換算，得回收率分别为102. 60 %、102. 56%和98. 56% (η=6)，日内 RSD 分别为 4. 11%,4. 17%,2. 09% (η = 3)，日间 RSD 分别为 3. 42%,7. 76%,
I.50% (η = 3) ο2. 2体外透皮吸收实验接受液中蛋白质的定量研究2. 2. I蛋白质试剂称取考马斯亮蓝G-25025mg溶于12. 5ml 95 %的こ醇，加入25ml 85% (W/V)磷酸，将溶液用双蒸水稀释到250ml，滤纸过滤，4°C保存备用。2. 2. 2蛋白质溶液标准曲线准确配制浓度为lmg/ml的牛血清白蛋白贮备液，分别取上述溶液O. 05,0. 1,0. 2、O. 4,0. 6,0. 8、I. Oml 加双蒸水至 lml，即得 O. 05,0. 1,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8、I. Omg/ml 的标准蛋白质溶液。取标准蛋白质溶液O. 1ml，加入5ml蛋白试剂，充分振荡混合，以O. Iml双蒸水加5ml蛋白试剂作为空白对照，595nm测定光吸收值Y，以光吸收值⑴对标准蛋白质溶液浓度(c)进行直线回归，得标准曲线方程为Y = O. 5998c+0. 0058 (r = O. 9995，η = 8)。2. 2. 3接受液中蛋白质的定量研究依2. 4. 2. I项下方法，供给体中只加入1，2_丙ニ醇溶液，在相同条件下于12h收集样品，按蛋白质溶液标准曲线项下方法，取待测样品O. 1ml，加入5ml蛋白质试剂，充分振荡混合，595nm处测定溶液吸光度，代入蛋白质溶液标准曲线计算蛋白质含量。测得接受液中蛋白质含量分别是 37. 07,45. 42,60. 44、10. 35,27. 05,7. 01、15. 36 μ g/ml，可见接受液中蛋白质含量很低，表明各个时间点所取的样品不除蛋白质，可以直接采用高效液相色谱进行药物的检测和分析。2. 3药物溶媒的选择依据人參皂苷-Rd难溶于水，易溶于甲醇、こ醇及丙ニ醇，在丙ニ醇中可溶解达150mg/ml，丙ニ醇是有机溶剂类渗透促进剂，作用原理为溶胀角质层中的类脂，增加药物的溶解度，并且丙ニ醇用作亲脂性药物的溶剂所产生的滲透促进作用往往比用于亲水性药物好，在体外透皮吸收试验中，丙ニ醇单独应用时促进作用不明显，常作为ー种优良的助渗剂，与月桂氮酮、油酸、月桂醇等合用，可发挥协同作用，产生显著的滲透促进作用，从而减少渗透促进剂的用量，降低毒性反应，又可使主药发挥最佳效能，所以选择丙ニ醇为药物溶媒。2. 4体外经皮透过实验2. 4. I离体皮肤的制备将松香-石蜡按I : l(w/w)在沸水浴中溶解、混匀，放置至室温，配制成脱毛剤。脱毛剂在每次临用前于沸水浴中重新溶解，置室温到即将凝固时使用。取健康昆明种小鼠，(5体重18-22g，こ醚麻醉，固定，用脱毛剂脱去腹部皮肤的毛。然后用生理盐水擦拭干净，处死后迅速剥取腹部皮肤(2cmX lcm)，去除皮下组织及脂肪，用生理盐水反复冲洗干净后检查皮肤是否有破损，无破损则置生理盐水中，4°C保存备用(Id内用完)。2. 4. 2实验方法2. 4. 2. I体外透皮吸收实验装置、
采用改良的Franz扩散池做滲透装置，从冰箱中取出备用鼠皮，恢复至室温，用生理盐水冲洗，滤纸吸干表面液体，取适当面积(IcmXlcm)的鼠皮夹在扩散池盖(供给体)与扩散池(接受体)之间。扩散面积为O. 636cm2(扩散池内径为O. 900cm)，接受体容积为500ml，皮肤角质层面向供给体，用生理盐水作接受液，皮肤内表面沉浸在接受液中。以20mg/ml人參皂苷-Rd丙ニ醇溶液为对照(经测试无药物透过)，在扩散池中分别加入对照溶液以及不同的样品1ml，(37+0. 1)°C恒温水浴，400r/min恒速磁力搅拌，分别于不同时间点取样05ml，同时加入同体积生理盐水。每次取样05ml，加甲醇05ml稀释至1ml，涡旋震荡混匀，置4°C保存待測。待测样品经O. 22 μ m滤膜过滤，取10 μ I进样分析，将所测得的药物峰面积代入人參皂苷-Rd标准曲线求人參皂苷-Rd浓度，乘以稀释倍数即得接受液中人參皂苷-Rd的浓度，并计算単位面积累积滲透量。而且，从图5、图6、图7和图8中可明显看出，在203nm处，接受液中人參皂苷-Rd的色谱吸收峰不会受到接受液以及渗透促进剂色谱 吸收峰的干扰。2. 4. 2. 2渗透促进剂的初步筛选依2. 4. 2. I项下方法，扩散池中分别加入20mg/ml人參皂苷-Rd丙ニ醇溶液(其中分别含5%松节油、3%丁香油、2%氮酮、3%薄荷醇、5% N-甲基吡咯烷酮、3%月桂醇、1%尿素、3%冰片)，在4h、8h、12h取样測定。每个样品重复两次，从中初步筛选有促进作用的滲透促进剂。2. 4. 2. 3氮酮、薄荷醇、月桂醇单用时渗透促进效果的比较依2. 4. 2. I项下方法，根据初步筛选结果，扩散池中加入样品为20mg/ml人參皂苷-Rd丙ニ醇溶液(其中分别加入不同百分浓度的2%氮酮、3%薄荷醇、3%月桂醇)，在4h、8h、12h取样測定。每个样品重复三次，比较氮酮、月桂醇、薄荷醇单用时的渗透促进效果O2. 4. 2. 4氮酮、薄荷醇、月桂醇联合应用时滲透促进效果的比较依2. 4. 2. I项下方法，根据初步筛选結果，采用正交试验方法，扩散池中加入20mg/ml人參皂苷-Rd丙ニ醇溶液(其中分别含氮酮、薄荷醇和月桂醇不同百分浓度的正交组合，见表I和表2)，在4h、8h、12h取样測定。每个样品重复三次，比较氮酮、月桂醇、薄荷醇以不同百分浓度联合应用时的滲透促进效果。表I正交试验因素水平表


本发明公开了人参皂苷-Rd透皮吸收渗透促进剂及其应用。具体地，本发明公开了可有效促进人参皂苷-Rd透皮吸收的渗透促进剂及其组合，该渗透促进剂适用于制备人参皂苷-Rd的透皮吸收剂型或经皮吸收剂型。本发明还涉及含有所述渗透促进剂的人参皂苷-Rd的药物制剂。