专利名称：一种石榴皮中黄酮类化合物的提取方法黄酮是一类自然界中广泛存在的化合物，也是目前倍受关注的天然活性产物之一。现在已经发现的黄酮类化合物有5000多种，在植物体中常以游离或与糖结合成苷的形式存在。黄酮类化合物具有广泛的生物学功能，包括抑制脂质过氧化、降血脂、抑制血小板凝聚、抑制毛细管透性增加和变脆的作用，在生物体内有预防心血管疾病、防癌抗癌、调节免疫、抗衰老、抗菌杀菌、吸收紫外辐射、止咳及肝脏保护作用等诸多药理作用及功效。目前，黄酮类化合物的主要提取方法有热水提取法、溶剂提取法、碱提酸沉法、超临界流体提取法等。其中，溶剂提取法是目前国内外使用最广泛的提取方法。利用黄酮类化合物的性质不同，可以将天然产物直接用乙醇、甲醇、丙酮、含水乙醇或含水丙酮提取，但是该法存在排污量大、有效成分损失多、溶剂残留、提取效率低等缺陷。碱提酸沉法是利用黄酮难溶于酸性水，易溶于碱性水的特点，具有简单易行、经济方便等特点，但是提取过程中使用强酸强碱存在环境污染问题。水蒸气蒸馏法设备简单，但提取率低，现已很少采用。近10年来， 利用超临界C02萃取技术提取天然植物中的有效成分越来越受到人们的关注，它具有传质速度快、渗透能力强、溶解萃取效率高、提取温度低、可室温下操作而更利于热敏性成分的提取、无溶剂残留、无污染、操作方便、快速、能保持天然特征等优点，而更受到重视。但是由于黄酮类化合物位于细胞内，外有细胞壁包被，因此，黄酮类化合物的提取会受到细胞壁的阻碍，提取率较低。石榴(Pimica granatum L.)为石榴科石榴属植物，原产于波斯喜玛拉雅一带的中亚地区，即现在的伊朗、阿富汗等国家，2000多年前由汉代张骞(公元前1 2世纪)经丝绸之路传入我国，西晋张华《博物志》云“汉张骞使西域，得涂林安石国榴种以归”。石榴花开红似火，人见人爱，石榴果实营养丰富，树形美观，耐干旱、瘠薄，具有广泛的适应性，既是人们喜爱的特种果树，又是一种美化环境的观赏树种，在当今大力发展高效生态农业和旅游观光农业等现代农业生产中，栽培石榴具有十分重要的意义。近年来，伴随着国际市场对各种石榴产品需求的增加和国内石榴产量的迅猛增长，必然会在加工过程中产生以石榴皮为主的大量废弃物。石榴皮中含有丰富的黄酮类化合物，而黄酮类化合物在医药和食品中有着广泛的应用。对这些废弃的石榴皮采用新技术进行再加工，在提高原料利用率、减少浪费和创造经济效益都具有非常重要的意义。
本发明的目的在于充分利用来源丰富，且未得到有效利用的石榴加工下脚料—— 石榴皮，提供一种生物酶解技术与超声微波提取技术相结合提取黄酮类化合物的方法，该方法具有提取率高、无污染、过程易控制等特点。技术解决方案石榴皮中黄酮类化合物的提取过程为石榴皮一清洗一干燥一粉碎一酶解一离心 —超声微波提取一分离一黄酮类化合物工艺要点如下干燥石榴皮清洗后，为最大程度地保存黄酮类化合物的活性，本发时采用真空干燥(真空度0. 06-0. 08Mpa，温度50_60°C，时间60-80min)或真空冷冻干燥技术(预冻温度_20°C，干燥室压力为100-200Pa，加热板温度50-60°C，时间4_5小时)，得到含水率为 10 士 2%的石榴皮。粉碎干燥后的石榴皮进行干法粉碎，粉碎粒度为40-60目。酶解准确称取一定量的石榴粉，加蒸馏水混勻，其中料液比为1 5，放入酶反应器中，在PH4-5，温度40-50°C的条件下用复合酶酶解1-1.证。其中复合酶用量为纤维素酶为80-100U/g，果胶酶80-100U/g。酶解反应结束后迅速将酶解液煮沸2分钟，灭酶。超临界0)2萃取将上述石榴皮酶解液转入反应瓶中，条件为超声功率为50W，微波功率284W，提取时间701秒，料液比1 11. 6。本发明的有益效果本发明以石榴加工下脚料——石榴皮为原料，通过清洗、干燥、粉碎、酶解与超声微波提取工艺制备黄酮类化合物，有效提高了产品的得率和品质。与目前应用广泛的溶剂提取技术相比，本发明采用生物酶解技术与超声微波提取技术相结合制备黄酮类化合物，可以实现在低温下较快速提取，且整个过程无有机溶剂残留，产品纯度高、得率高、活性强。与热水提取法相比，本发明温度低、时间短且提取率高。与超声微波提取技术相比，本发明在超声微波提取之前，首先采用纤维素酶和果胶酶的复合酶解技术，可以有效破坏石榴细胞壁，显著提高黄酮类化合物的得率。采用生物酶解与超临界(X)2联合提取技术进行黄酮类化合物的制备，可以获得产率高、质量优且无环境污染的黄酮类产品。采用生物酶解与超声微波提取技术进行黄酮类化合物的制备，解决了石榴加工过程中的下脚料——石榴皮的综合利用问题，从石榴皮中制备出高得率高活性的黄酮类产品，进一步提高了石榴的生理功能和利用价值。本发明采用生物酶解技术与超声微波提取技术相结合的方法提取石榴皮中的黄酮类化合物，既利用酶解技术破坏了石榴细胞壁，有利于细胞内黄酮类化合物的浸出，又具有传质速度快、溶解能力强、操作温度低、节能等特点，最大程度地提高了黄酮类化合物的提取得率，具有较强的应用前景。一种酶解法与超声微波提取相结合提取石榴皮中黄酮类化合物的方法，属于农产品综合利用技术领域，涉及功能食品深加工技术。本发明的主要过程为以石榴皮为原料，首先进行真空干燥或真空冷冻干燥，至石榴皮含水率为10％左右；干燥后的石榴皮进行粉碎处理，其粒径为40-60目；然后以上述石榴粉为原料，采用生物酶解法与超声微波提取法相结合提取黄酮类化合物，即先采用复合酶酶解处理，然后将酶解物进一步采用超声微波提取，制备高得率和高纯度的黄酮类化合物。