专利名称：巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂的制作方法真空冷冻干燥，也叫作冷冻干燥，简称冻干，是将富含水的物料，先冷却至其共晶点或玻璃化转变温度以下，使物料中的大部分水冻结成冰，其余的水分和物料成分形成非晶态(玻璃态)。然后，在真空条件下，对已冻结的物料进行低温下的加热，使物料中的冰升华，实现升华干燥(一次干燥)。接着，在真空条件下对物料进行升温，以除去吸附水，实现解吸干燥(一次干燥)。冻干后的物料含水率低，经密封后，可以在室温或4°C下长期保存。许多微生物，包括细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及病毒等大类的微生物，成功地实现了冷冻干燥。一般微生物细胞的成活率在80%以上；Hesseltin等报道保存在真空冷冻干燥安瓿管中的真菌成活期长达40多年。尽管如此，直至目前还有许多微生物不能实现冷冻干燥，即使对已经能实现冻干的多种微生物，它们的冻干程序和所用保护剂也是不完全相同的。对于巴氏芽胞杆菌，单一的使用任何一种冷冻干燥保护剂都很无法达到较好的保护效果，多种保护剂混合使用，能够达到取长补短，才能达到较好的使用效果，然而针对巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂的研究工作开展较少。
为了提高巴氏芽胞杆菌保藏存活率，本发明提供一种巴氏芽胞杆菌保藏冷冻干燥保护剂。一种巴氏芽胞杆菌保藏冷冻干燥保护剂，由脱脂乳粉，甘油，蔗糖，谷氨酸钠组成，其质量百分组成为脱脂乳粉139Γ16%，甘油19Γ4%，蔗糖129Γ15%，谷氨酸钠0. 59Γ3. 5%，余量为无菌水。有益效果使用本发明的保护剂，可以使巴氏芽胞杆菌的存活率高达82. 3%，相比未添加保护剂直接冷冻干燥的8%的存活率提高了 10倍。1，菌种的培养和收集配制IOOml培养基，每升培养液含有蛋白胨5g、牛肉膏3g，用NaOH溶液调节培养基PH为7，放入高压灭菌锅进行灭菌。灭菌后，以洲的接种量接入巴氏芽胞杆菌(Bacilluspasteurii)，置于摇床中170rpm、恒温37°C培养，24h后取出，6000r/min，离心10分钟后弃上清液，获取菌体。2，预冻和冷冻干燥
先将菌体与保护剂按ι 1混合，使菌体与保护剂充分混合平衡60min，再放置于_40°C预冻池。然后用真空冷冻干燥机冷冻Mh。真空封口后保藏。3，存活率的测定
菌体离心前后及冻干前后活菌数的测定采用稀释平板计数法。茵液中活数测定先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，其均勻分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的活菌数。而菌粉中活菌数测定前先用无菌水稀释原
菌液体积再按上述方法进行测定。(存活率=冻干后活菌数/冻干前活菌数)4，优化结果的验证
在保护剂的配方内，对不同配比的保护剂的效果的验证结果如下冷冻干燥保护剂的效果验证


本发明公开了一种巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂，由脱脂乳粉，甘油，蔗糖，谷氨酸钠组成，其质量百分组成为脱脂乳粉13%~16%，甘油1%~4%，蔗糖12%~15%，谷氨酸钠0.5%~3.5%，余量为无菌水。使用本发明的保护剂，可以使巴氏芽胞杆菌的存活率高达82.3%，相比未添加保护剂直接冷冻干燥的8%的存活率提高了10倍。