专利名称：非典型岩藻糖基化抗体与选自人gm-csf、人m-csf和/或人il-3的一种或多种细胞因子的 ...的制作方法非典型岩藻糖基化抗体与选自人GM-CSF、人M-CSF和/或人IL-3的一种或多种细胞因子的联合治疗本发明涉及用特异性结合肿瘤-抗原的非典型岩藻糖基化抗体(afucosylated antibody)与人GM-CSF、人M-CSF和人IL-3中的一种或多种细胞因子对患有癌症的患者的联合治疗，特别是涉及对患有单核细胞/周细胞-浸润性癌症的患者的联合治疗。非典型岩藻糖基化抗体单克隆抗体的细胞介导的效应子功能可以通过如在Umafia, P.，等，Nature Biotechnol.(自然生物技术)17 (1999) 176-180 ；和US 6，602，684中所述那样改造其寡糖成分而得以增强。IgGl型抗体是癌症免疫治疗中最常用的抗体，其是在每个CH2结构域中具有在Asn297的保守的N-连接的糖基化位点的糖蛋白。附着到Asn297上的两个复合双分支寡糖包埋在CH2结构域之间，形成与多肽主链的广泛接触，并且它们的存在是抗体调控效应子功能(诸如抗体依赖性细胞毒作用(ADCC))所必需的(Lifely， Μ. R.，等，Glycobiology (糖生物学)5 (1995) 813-822 Jefferis, R.，等，Immunol. Rev. (免疫学综述)163(1998)59-76 ；Wright, Α.和 Morrison, S. L.，Trends Biotechnol. (生物技术趋势)15(1"7)26-32)。Umafia, P.，等，Nature Biotechnol.(自然生物技术)17(1999) 176-180 和 TO 99/54342 表明，β (1，4)-N-乙酰葡糖胺转移酶 III ( β (1， 4)-N-acetylglucosaminyltransferase III) ( “ GnTIII “)( 一种催化形成平分型 (bisected)的寡糖的糖基转移酶)在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的过表达显著增加抗体的体外ADCC活性。改变N297糖类的组成或其消除也影响与Fc γ R结合的Fc与Cl q 的结合(Umafia, P.，等，Nature Biotechnol.(自然生物技术)I7 (1999) 176-180 ； Davies, J.，等，Biotechnol. Bioeng.(生物技术和生物工程)74(2001)288-294 ； Mimura, Y.，等，J. Biol. Chem.(生物化学杂志)276(2001)45539-45547 ；Radaev, S.， 等，J. Biol. Chem.(生物化学杂志)276(2001) 16478-16483 ；Shields, R. L.，等，J. Biol. Chem.(生物化学杂志)276(2001)6591-6604 ；Shields, R. L.，等，J. Biol. Chem.(生物化学杂志)277(2002)26733-26740 ;Simmons，L. C.，等，J. Immunol. Methods (免疫学方法杂志)263 (2002) 133-147)。Iida, S.，等，Clin. Cancer Res.(临床癌症研究)12 (2006) 2879-2887表明，非典型岩藻糖基化的抗-⑶20抗体的功效通过加入岩藻糖基化的抗-CD20而被抑制。非典型岩藻糖基化的和岩藻糖基化的抗-CD20s的1 9混合物 (10微克/mL)的功效劣于单独的非典型岩藻糖基化的抗-CD20的1，000-倍稀释物(0. 01 微克/mL)的功效。他们推论出不包含岩藻糖基化对应体的非典型岩藻糖基化的IgGl可以通过其高度的Fc γ RIIIa结合而避免血浆IgG对ADCC的抑制作用。Natsume，Α.，等在 J. Immunol. Methods (免疫学方法杂志)306 (2005) 93-103中表明，从人IgGl-型抗体的复合型寡糖去除岩藻糖导致抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)的极大增强。&itoh，M.，等，Expert Opin. Biol. Ther.(生物学治疗的专家观点)6 Q006) 1161-1173讨论了非典型岩藻糖基化的治疗性抗体作为下一代治疗性抗体。Satoh，M.，推论出，仅由非典型岩藻糖基化的人IgGl形式组成的抗体被认为是理想的。Kanda，Y.，等，Biotechnol.Bioeng.(生物技术和生物工程)94(2006) 680-688比较了岩藻糖基化的CD20抗体(96%岩藻糖基化，CH0/DG44 1H5)与非典型岩藻糖基化的CD20抗体。DaviesJ.，等，Biotechnol. Bioeng.(生物技术和生物工程)74 (2001) 288-294报道，对于CD20抗体，增加的ADCC与增加的与Fc γ RIII的结合相关。例如，在WO 2005/018572, WO 2006/116260, WO 2006/114700, WO 2004/065540, WO 2005/011735, WO 2005/027966, WO 1997/028267，US 2006/0134709,US 2005/0054048, US 2005/0152894, WO 2003/035835, WO 2000/061739，Niwa，R.，等，J. Immunol. Methods (免疫学方法杂志)306(2005) 151-160 ;Shinkawa，Τ.等，J Biol Chem(生物化学杂志)， 278(2003)3466-3473 ；WO 03/055993 或 US 2005/0M9722 中记述了通过减少岩藻糖的量而增强单克隆抗体的细胞-介导的效应子功能的方法。CD20 和抗 CD20 抗体⑶20分子(也称为人B淋巴细胞限制性分化抗原或Bp35)是一种位于前B (pre_B) 和成熟B淋巴细胞上的分子量约35kD的疏水跨膜蛋白(Valentine，M.A.，等，J.Biol. Chem.(生物化学杂志)264(19) (1989) 11282-11287 ；和 Einfield, D. A.，等，(1988) EMBO J. (ΕΜΒ0 杂志)7(3) :711-717 ；Tedder, Τ. F.，等，Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. Α·(美国国家科学院学报)85 (1988) 208-12 ；Stamenkovic, I.，等，J. Exp. Med.(实验医学杂志)167 (1988) 1975-80 ；Tedder, Τ. F.，等，J. Immunol.(免疫学杂志)142 (1989) 2560-8)。 CD20见于多于90%的来自外周血或淋巴样器官的B细胞的表面上，其在早期前B细胞发育期间表达并且一直存在直至浆细胞分化。⑶20存在于正常B细胞以及恶性B细胞上。 具体地，⑶20在多于90%的B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)上表达(Anderson，K. C.，等， Blood (血液)63(6) (1984) 1424-1433)，但不存在于造血干细胞、原B细胞(pro-B cells)、 正常浆细胞或其他正常组织中(Tedder，Τ. F.，等，J，Immunol.(免疫学杂志)135 (2) (1985)973-979)。CD20蛋白的85个氨基酸羧基末端区位于胞质中。该区的长度与其他B细胞特异的表面结构相反，上述表面结构诸如IgM、IgD和IgG重链或Il类组织相容性抗原a或β 链，它们具有分别为3、3、28、15和16个氨基酸的相对短的胞质内区域(Komaromy, Μ.，等， NAR (核酸研究)11 (1983) 6775-6785)。在最后61个羧基末端氨基酸中，21个是酸性残基，而仅有2个是碱性的，这表明该区具有很强的净负电荷。GenBank登记号为ΝΡ-690605。⑶20 被认为可能参与调节B细胞活化和分化过程中的(一个或多个)早期步骤(Tedder，T.F.， 等，Eur. J. Immunol.(欧洲免疫学杂志)16(8) (1986)881-887)，并且可行使钙离子通道的功能(Tedder, Τ. F.，等，J. Cell. Biochem.(细胞生物化学杂志)14D(1990) 195)。存在有两种不同类型的抗-CD20抗体，两者在其CD20结合模式和生物学活性方面明显不同(Cragg, M. S.，等，Blood (血液)103 (2004) 2738-2743 ；和 Cragg, M. S.， 等，Blood(血液)101 0003) 1045-1052)。I 型抗体，例如，利妥昔单抗(rituximab)(一种具有正常糖基化模式的未-非典型岩藻糖基化的(non-afocusylated)、未糖改造 (non-glycoengineered)的抗体)，在补体介导的细胞毒性中有效，而II型抗体，例如，托西莫单抗(Tositumomab) (Bi)、11B8、AT80或人源化B-Lyl抗体，有效地通过胱天蛋白酶 (caspase)非依赖性凋亡启动靶细胞死亡并伴随着磷脂酰丝氨酸的暴露。I型和II型抗-⑶20抗体共有的通用特性总结在表1中。表1 :1型和II型抗-⑶20抗体的特性本发明涉及特异性结合肿瘤抗原的非典型岩藻糖基化抗体与选自人GM-CSF、人M-CSF和/或人IL-3的组的一种或多种细胞因子用于治疗癌症的联合治疗。