专利名称：鸡黄病毒分离株及其在疫苗制备中的应用的制作方法鸡黄病毒病是2009年以来在我国首先出现的一种新疫病，临床特征主要表现为产蛋鸡发热、产蛋急降或停止、采食减少或食欲废绝为；剖检特征主要表现为卵泡出血、萎缩，部分卵黄破裂，形成卵黄性腹膜炎。该病主要侵害产蛋(种)鸡，给我国蛋(种)鸡养殖业造成很大经济损失。福建省农业科学院畜牧兽医研究所在国内外首先分离、鉴定了鸡黄病毒(Chicken Flavivirus, CFV)，确认CFV是鸡黄病毒病的病原，是黄病毒科黄病毒属的新成员，丰富了动物病毒学内容。建立了检测鸡黄病毒病抗原的RT-LAMP方法和检测抗体的微量血清中和方法，制备的疫苗可有效预防鸡黄病毒病。
本发明的目的之一是提供鸡黄病毒CJD05株分离自产蛋下降病鸡的鸡黄病毒CJD05株，保藏在中国典型培养物保藏中心 (China Center for Type Culture Collection，简称 CCTCC)，保藏日 2011 年 7 月 29 日，保藏编号CCTCC V201U6。保藏单位CCTCC地址在中国武汉市武汉大学。本发明的目的之二是提供鸡黄病毒CJD05株应用于鸡黄病毒病疫苗的制备方法， 将上述的鸡黄病毒分离株在番鸭胚或鸡胚尿囊腔中增殖，收获死胚尿囊液经甲醛灭活并超滤浓缩后，按适当比例与油佐剂混勻，研制成安全有效的鸡黄病毒病灭活疫苗，并应用于该病的防制。本发明的创新点在于，鸡黄病毒病是2009年以来新出现的疫病，至今还无法预防和控制，本发明在明确病原的基础上，在国内外率先将鸡黄病毒分离株应用于制备疫苗，并研制成安全有效的鸡黄病毒病灭活疫苗，为该病防制提供了技术支撑。型乳剂疫苗。6、疫苗主要指标测定6. 1无菌检验按现行《中华人民共和国兽药典》附录进行，应无菌生长。6. 2安全性测定用27周龄健康易感的产蛋高峰期海兰褐蛋鸡30羽，随机分成2 组，每组15羽。试验组每羽颈部皮下注射5ml疫苗；对照组每羽腿部肌肉注射5ml Hanks 液，隔离饲养并观察20天。接种鸡全部存活，且采食、饮水、精神状态等均未见异常，试验组产蛋率与对照组无统计差异，接种后10天和20天各随机剖杀3羽，内脏器官、卵泡、卵巢和输卵管等也未见异常。6. 3免疫力测定(免疫抗体、攻毒保护力)6. 3. 1试验设计取12周龄海兰褐蛋鸡40羽，随机分成免疫组和对照组。免疫组每羽颈部皮下接种疫苗lml/1羽份，对照组每羽颈部皮下注射Hanks液Iml ；间隔4周，取经上述免疫的16周龄蛋鸡同剂量颈部皮下加强免疫一次。分别于首次免疫后14天、观天和加强免疫后7天(首免后35天，即17周龄，以此类推)、14天、21天、观天、42天、56天、77 天、90天采血，测定免疫后不同时间的中和抗体效价，评价疫苗诱导的抗体水平。同时，取二免后35天(即21周龄)的免疫组和对照组蛋鸡各10羽，经口、鼻和肌注攻击强毒，1.0ml/ 羽，观察20天，记录各组蛋鸡的饮食欲、精神状态及产蛋数量，评价疫苗的攻毒保护力。6. 3. 2血清中和抗体结果从表1可知，蛋鸡首免后14天部分免疫鸡血清中出现较低水平的中和抗体，首免后观天中和抗体达22 ；二免后14天中和抗体水平为23，随后逐渐上升，二免后观天达24 5，直到90天抗体水平仍维持较高水平(24 3)。表1 12周龄蛋鸡疫苗免疫后血清中和抗体水平动态变化(Log2)本发明公开了分离自产蛋下降病鸡的鸡黄病毒CJD05株，保藏在CCTCC，保藏日期2011年7月29日，保藏编号CCTCC V201126。本发明还公开了鸡黄病毒分离株在制备鸡黄病毒病疫苗上的应用。