专利名称：一种支原体培养基的制作方法非淋球菌性尿道炎(nongonococcalurethritis, NGU)在性传播疾病(sexually transmitted disease, STD)中所占的比例逐年升高,无论是国外还是国内都居于首位,而解尿支原体(ureaplasma urealyticum,Uu)和人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)是NGU 的主要病原体。因此，准确有效地检测支原体的存在，成为诊断NGU的关键因素之一。Uu和 Mh的检测目前国内大多采用液体培养法，培养基由黄变红且液体澄清为阳性，不变色或者变色但液体浑浊为阴性。其原理是根据Uu和Mh分解培养基中的尿素产碱使pH上升，而培养基中的酚红指示剂在由酸变碱过程中颜色由黄变红，观察颜色的变化来判断阳性。但是能分解尿素的微生物很多，一些细菌能使颜色变红造成假阳性，还有一些细菌和真菌(尤其是白色念珠菌)能使培养基变红和浑浊，检验科一般会判断阴性，但如果其中同时有支原体生长，由于浑浊就会造成假阴性的判断。前国内商品化的支原体培养基(包括液体和固体) 一般添加青霉素类和多粘菌素，青霉素对大多数革兰阳性球菌的作用较强，对肠球菌作用较差，多粘菌素为多肽类抗生素，对绿脓杆菌等革兰氏阴性杆菌作用强大，但对G-球菌和 G+细菌均无作用，这两种对真菌都无抑制作用。所以，如果标本中有混合真菌感染，污染少量则仅变红而不造成沉淀，可能形成假阳性的判断；污染量多有沉淀和浑浊，可能形成假阴性的判断。在固体培养基上，真菌菌落的生长，会掩盖支原体生长的琼脂表面，使不能观察到支原体的典型菌落。
本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于支原体生长的培养基，降低检验结果的假阳性和假阴性发生率。本发明解决其技术问题的技术方案是一种支原体培养基，其特征在，配制 IOOOrnl培养基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉8g ;酵母浸粉5g ;苯酚红20mg ;氯化钠5. 2g ；L-精氨酸0. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ;无菌绵羊血200ml ;蒸懼水加至 IOOOrnl。优化方案中，每1000ml培养基还含有京尼平酸2mg。优化方案中，每1000ml培养基还含有浓度200g/L的功劳木水煮液200ml。以上各方案的固体培养基配方中，每1000ml培养基还含有琼脂15g。其中所述的蛋白胨提供碳氮源和能量；牛心浸粉含有各种多肽、脂肪、生长因子、 激素等，这些物质对促进支原体的繁殖和生长都是很重要的因素；酵母浸粉提供支原体生长所需的维生素B族；氯化钠维持均衡的渗透压，且由于支原体较其他的细菌更为耐受高渗环境，所以氯化钠水平适当的提高还有利于抑制其他细菌生长；琼脂是培养基的凝固剂； 无菌绵羊血提供能量环境；L-精氨酸属氨基酸类，为营养剂；苯酚红为指示剂；氟康唑可以有效的抑制白色念珠菌在其中的生长；紫番荔枝素有抑制白假丝酵母的真菌作用，且还有一定的细胞毒作用，2mg/L的浓度可以有效的抑制杂菌成长，较普通支原体培养集中使用的高毒醋酸铊安全。京尼平酸能广泛抑制革兰氏阴、阳性菌的生长。功劳木为小檗科植物阔叶十大功劳、细叶十大功劳的茎或茎皮，现代研究表明，功劳木水煎剂在体外对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌均有抑制作用。本发明与现有技术相比较，具有支原体检出可靠的特点。作详细说明。实施例I液体培养基，配制IOOOml培养基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹红20mg ;氯化钠5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 无菌绵羊血200ml ;蒸懼水加至总量为1000ml。同配方中加入琼脂15g既可以用来制备实施例2固体培养基。实施例3液体培养基，配制IOOOml培养基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹红20mg ;氯化钠5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 京尼平酸2mg ;无菌绵羊血200ml ;蒸懼水加至总量为1000ml。同配方中加入琼脂15g既可以用来制备实施例4固体培养基。实施例5液体培养基，配制IOOOml培养基的配方中含有蛋白胨15g ;牛心浸粉 8g ;酵母浸粉5g ;苯酹红20mg ;氯化钠5. 2g ;L_精氨酸O. 5g ;氟康唑30mg ;紫番蒸枝素2mg ； 浓度200g/L的功劳木水煮液200ml ;无菌绵羊血200ml ;蒸馏水加至总量为1000ml。同配方中加入琼脂15g既可以用来制备实施例6固体培养基。实施例6固体培养基制备方法为 取功劳木加水煮沸I小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得功劳木水煮液；将蛋白胨、牛心浸粉、酵母浸粉、苯酚红、氯化钠、琼脂、功劳木水煮液和蒸馏水混匀，在涡旋器上震荡15min，过滤，滤液210°C灭菌15 min,冷却到45°C，加入无菌绵羊血、灭菌氟康唑、灭菌紫番荔枝素，混匀后灭菌蒸馏水定容到IOOOml后分装。所述的功劳木水煮液浓度为200g/L，指的是每升功劳木水煮液中含有生药200g。本发明所得支原体培养基具有检出可靠、支原体分离率高的特点，为临床资料充分证明，有关资料如下。I对象与方法I. I培养基制备共设8组，分别为实施例f 6方案组和对照I组、对照2组。对照I 组为支原体肉汤液体培养基，对照2组为支原体肉汤固体培养基。I. 2标本采集培养方法妇科和皮肤科门诊患者的泌尿生殖道标本拭子108例。 采集方法男性患者用无菌棉球擦干尿道口后，用无菌棉拭子插入尿道口疒3 cm,轻轻旋转后取出；女性患者清除阴道口分泌物后，用无菌棉拭子插入宫颈口广2 cm，轻轻旋转后取出。用拭子先接种固体培养基，然后用于液体培养基接种，36 °C培养。I. 3结果判定方法I.3. I阳性确定金标准显微镜下见到典型支原体生长结合生化反应确认Uu、Mh。I. 3. 2液体培养基阳性确定标准分别于2Γ48 h观察颜色由黄色变红色，严格按照结果判读表读取结果。I. 3. 3固体培养基阳性确定标准为24 h后逐日观察颜色的变化(黄色变为红色)。同时在显微镜下观察典型支原体菌落:Mh煎蛋样菌落(10(Γ300μπι)，υιι棕褐色颗粒、 棕褐色菌线或棕褐色团块样菌落。2结果108份标本最后确定阳性为41例，各组阳性例数见下表。
金标准实施例I实施例2实施例3实施例4实施例5实施例6对照I组对照2组例数(例)413937403940424529 3结论实施例1飞培养基可以有效的提高泌尿生殖道标本支原体检验的准确率，减少假阴性和假阳性的发生，使妇科患者的临床诊断正确率进一步加强。


本发明公开了一种支原体培养基及其制备方法。其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有蛋白胨15g；牛心浸粉8g；酵母浸粉5g；苯酚红20mg；氯化钠5.2g；L-精氨酸0.5g；氟康唑30mg；紫番荔枝素2mg；无菌绵羊血200ml；蒸馏水加至1000ml。本发明与现有技术相比较，具有检出可靠、支原体分离率高的特点。