专利名称：含昆虫病原病毒特别是杆状病毒和硫酸纤维素的植物保护产品的制作方法含昆虫病原病毒特别是杆状病毒和硫酸纤维素的植物保护产品本发明涉及含昆虫病原病毒特别是杆状病毒和硫酸纤维素和/或其衍生物的植物保护广品。昆虫每年能够导致世界粮食产量20至30%的经济损失。特别是，在单一农作物的情况下观察到有害昆虫的大规模出现。在大规模应用农药的情况下，群落生境中的全体昆虫都受到影响，并且还危及生态平衡。因此，越来越多地应用病毒来抗击病虫害。病毒显示对其宿主的高度选择性，同时免于危及有益群体。经估计全世界农经有用植物的主要害虫中约30%可以通过杆状病毒来抗击。在US6，042，843中，描述使用小菜蛾(PlutellaXylostella)品系的杆状病毒来抗击有害昆虫。特别地，多年来在苹果栽培中将杆状病毒用作昆虫病原病毒。杆状病毒是优选感染幼虫的昆虫病原病毒。杆状病毒的优点包括严格的宿主特异性以及不留残余物的降解，由此临收获前也可以处理果实。另外，杆状病毒形成包含体(Occlusion Body，0B)，这允许病毒即使在宿主体外也可以长时间保持生物学活性不变。这些位于保护性包含体中的活性病毒颗粒所保证的是，即使在昆虫群体密度变化很大的情况下，仍然保持昆虫幼虫的经口感染的感染链不断。在苹果栽培中，应用针对苹果小卷蛾幼虫的杆状病毒。但是，近年来已证实存在病毒抗性的苹果小卷蛾(Asser-Kaiser, Science, 2007)。因此，需要更强效果的植物保护产品，也即必须增强已有植物保护产品的效果。硫酸纤维素基于纤维素，其是由β-D-葡萄糖分子或纤维二糖单体构成的多糖。通常得自棉花或木材的纤维素通过硫酸化剂(通常是浓硫酸)得以硫酸化。硫酸纤维素是具有聚 电解质特征的生物聚合物，其能够与带相反电荷的粒子形成复合物。该复合物称为团聚体。硫酸纤维素与聚阳离子的复合物可以形成微孔球，其用于包囊哺乳动物细胞、昆虫细胞和酶。它们还用于培养杆状病毒，如EP 1982758 Al中的描述。根据WHO的研究，检测到包含硫酸纤维素的制剂针对HIV的活性。硫酸纤维素用于植物保护产品的增稠剂的用途描述于DE 1130589B.W0 01/60159Al和US 2007/0179058 Al。然而，这不是包含昆虫病原病毒的植物保护产品。在DD 299313中也公开了，将纤维素的水溶性硫酸盐用作增稠剂以及用作生产膜的成分和用于微囊化的用途。根据DE 10200501 1367 Β4和DE 19756499 C2的教导，硫酸纤维素钠用于生产用来固定化细胞的微胶囊。
本发明的任务是提供新的、经改善的植物保护产品。这种植物保护产品展示提高的效力，从而其能够以明显更低的浓度实现与常规植物保护产品等同的效果。
化学杀虫剂的消耗借此明显减少。
特别是，本发明的另一任务是降低植物保护和抗击有害昆虫的成本。
该任务通过含昆虫病原病毒的植物保护产品和硫酸纤维素得以解决。
根据本发明，硫酸纤维素这一概念还总是包括硫酸纤维素的衍生物。
衍生物是选自下述的化合物:
-一价阳离子盐，比如Na+，K+，NH4+的盐；二价阳离子盐，例如Mg2+，Ca2+，Sr2+，Ba2+，Fe2+的盐；和三价阳离子盐，比如A13+，Fe3+的盐；
-每纤维双糖单体具有至少一个烷氧基的硫酸纤维素；
-在硫酸纤维素分子的一个或多个单体上取代有甲基、乙基、乙酰基的硫酸纤维素，所述硫酸纤维素分子取代有甲基、乙基、乙酰基；
-硫酸化度或者取代度为0.01至3.0，特别是0.4至0.7，优选0.5至0.6，特别是0.6 ；
-特别是水溶性硫酸纤维素。
在本发明的一种变型中，根据本发明的植物保护产品包含在硫酸纤维素分子的一个或多个单体上取代有甲基、乙基、乙酰基的硫酸纤维素衍生物。
在本发明的另一变型中，硫酸纤维素以水溶性形式存在。
在本发明的又一实施方式中，硫酸纤维素作为聚阳离子上的团聚体(Koazervat)以结合形式存在。
本发明的一种实施方式的特征在于，昆虫病原病毒是杆状病毒，优选颗粒体病毒和/或核型多角体病毒。
在本发明的一种备择方案中，植物保护产品是用于抗击昆虫，特别是鳞翅目种类的植物保护产品。
在上述备择方案中的一种当中，本发明的植物保护产品是杀虫剂。
本发明可以将植物保护产品用作喷雾液使用。
在本发明的一种实施方式中，植物保护产品包含浓度为IxlO5至IxlO1Vg的昆虫病原病毒优选杆状病毒和含量为0.01%至70%，特别是0.1至10%的硫酸纤维素。
在本发明的另一 实施方式中，植物保护产品包含浓度为IxlO5至IxlO1Vkg的昆虫病原病毒优选杆状病毒和浓度为0.1ppm至700ppm的硫酸纤维素。
本发明的一种实施方式是特征在于，昆虫病原病毒优选杆状病毒在固定化的昆虫细胞中进行培养，并随后从中分离出来。
本发明的又一主题是生产本发明植物保护产品的方法，其中昆虫病原病毒优选杆状病毒在固定化的昆虫细胞中进行培养并随后从中分离出来。
在本发明方法的备择方案中，昆虫病原病毒优选杆状病毒在用硫酸纤维素包囊的昆虫细胞中进行培养并随后从中分离出来。
在一种实施方式中，这样生产本发明植物保护产品:将昆虫细胞包囊于硫酸纤维素，优选硫酸纤维素钠中，进行培养并随后用杆状病毒感染；或者将经感染的昆虫细胞包囊于硫酸纤维素，优选硫酸纤维素钠中，并进行培养。
随后，将包含经感染的昆虫细胞的固定化物(Immobilisate)分离，并且将经分离的固定化物冻干并研磨。
视需要将固定化物在冻干前均化。
在该实施方式中，根据本发明的产品作为粉状配制剂存在。
在一备择方案中，向粉状配制剂中添加粉状填料，比如奶粉、蔗糖、酵母提取物、蛋白胨、木质素。
在本发明方法的另一实施方式，在分离之后将固定化物均化，并且产品以液体形式存在。
在另一实施方式中，对于本发明植物保护产品的生产相当重要的是，不进行从固定化物的病毒纯化。
本发明的又一主题是本发明植物保护产品用于抗击昆虫，特别是鳞翅目种类的用途。
在本发明的变型中，将含昆虫病原病毒的植物保护产品和硫酸纤维素一起、同时和/或在混合物中施 用。
在本发明的另一变型中，在施用包含昆虫病原病毒的本发明植物保护产品之后施用硫酸纤维素。
在本发明的又一实施方式中,在施用本发明的含昆虫病原病毒的植物保护产品之前施用硫酸纤维素。
硫酸纤维素和包含昆虫病原病毒的植物保护产品展示高稳定性并且保持其各自活性长达数周，优选数月。
相应地，硫酸纤维素和本发明的包含昆虫病原病毒的植物保护产品-无关顺序地-在2个月，优选6周、5周、4周,特别优选3周、2周、I周,特别是6天、5天、4天、3天、I天的时间间隔内施用。
根据本发明，效力 的提高总是与对照相比来确定，对照在相同条件下且以等同浓度应用植物保护产品，但是不与硫酸纤维素接触。
按照本发明，植物保护产品效力与对照相比来确定。对照包括在与本发明方法相同的条件下施用植物保护产品。然而，既不在使用对照植物保护产品之前或之后、也不与之同时地将硫酸纤维素施用至植物。效力可以根据损失也即受损的植物、叶片、种子或果实来确定，或者在另一实施方式中通过农经产品比如种子或果实的产量来确定。
根据本发明，效力的提高意味着，为了实现与对照等同的效果可以使用更小浓度的植物保护产品。在本发明方法中，植物保护产品的浓度相对用作对照的病毒可以减少至 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%,优选 10%, 5%, 1%，0.5%, 0.25%, 0.1%，0.005%,尤其优选0.001%。
根据本发明通过硫酸纤维素提高包含昆虫病原病毒的植物保护产品效力的特征在于，在保持同样高的效力的情况下，昆虫病原病毒的活性含量可以减少一个或多个数量级。
因此，在本发明的一个变形中，昆虫病原病毒的浓度与对照相比可以减少至10%，1%,优选 0.5%, 0.1%，尤其优选 0.05%, 0.01%,特别是 0.005%, 0.001%。
在本发明中，将植物保护产品施用至植物应理解为，将植物保护产品直接应用至待保护的植物，或者应用至植物部分比如叶片、种子或果实，或者应用至待保护植物的处所，以及直接应用至位于植物上或附近或者其处所的有害昆虫。
本发明的另一备择方案中，除了使用包含病毒的植物保护产品外，还涉及使用和应用至少一种其它的植物保护产品，优选杀虫剂、杀真菌剂和除草剂，特别是杀虫剂。
在一种实施方式中，除了上文所述的植物保护产品，还施用硫酸纤维素或包含病毒的植物保护产品与硫酸纤维素的混合物。
本发明的另一实施方式涉及使用浓度如下的硫酸纤维素:0.1ppm至IOOOOppm,优选Ippm至5000ppm,特别是尤其优选Ippm至IOOOppm,特别是优选Ippm至5000ppm。
本发明的一种实施方式涉及以水溶性形式或者作为聚阳离子团聚体以结合形式使用硫酸纤维素。
硫酸纤维素可以作为植物保护产品的成分存在。
在本发明方法的备择方式中，在施用植物保护产品时向喷雾液添加硫酸纤维素。
在本发明的一种变型中，植物保护产品的昆虫病原病毒是杆状病毒。
在本发明方法的又一实施方式中，涉及通过基因工程方法优化杀虫效力的病毒，优选杆状病毒。例如，通过基因工程方法特异性地拓展宿主谱系，或者增强杆状病毒对较晚幼虫阶段的毒力，或者提高其起效速度。基因工程方法包括，例如将神经毒素基因整合入病毒基因组或者将病毒egt-基因删除。由此，可以实现起效速度的显著加快。昆虫特异性的神经毒素可以例如自蝎子或螨虫分离出来，并且在重组病毒中表达。本发明能够使用的基因工程病毒的列表(通过援引并入本文)公开于Chen，X.W.等人(Journal ofInvertebrate Pathology,76,140-146)。
在本发明方法的又一实施方式中，将Enhancin与硫酸纤维素和/或昆虫病原病毒一起施用。
Enhancin 是由粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni Granulovirus)形成的一种蛋白，并且优选通过病毒来增强各种鳞翅目(L印idoptera)种类中的感染。效率的提高也可以这样实现:分开提供纯化形式的Enhancin,或者将编码Enhancin的基因整合入昆虫病原病毒中，或者提供粉纹夜蛾颗粒体病毒(Trichoplusia ni (Hiibner) Granulovirus)。
Enhancin影响幼虫中肠的肠膜完整性，并且在下述不同病毒种类的情况下导致效力增强:T.ni,谷实夜蛾(Helicoverpa zea(Boddie)),烟芽夜蛾(Heliothisvirescens (Fabricius)),贪夜蛾(Spodoptera exigua (Hiibner)),大豆尺夜蛾(Pseudoplusia includens (Walker)),和大豆夜蛾(Anticarsia gemmatalis (Hiibner))，(Granados 等人；Biological Control 20,153-159(2001)。
在本发明的一种变型中，病毒和硫酸纤维素一起以冻干形式存在。由此，保证良好的可分散性并从而容易生产喷雾液。额外，还提供病毒和硫酸纤维素的长期耐久性和稳定性。
在本发明的备择方案中，施用浓度如下的昆虫病原病毒和硫酸纤维素的混合物:0.0lg, IOg/英亩。此处I英亩对应40`46.856m2也即约0.4ha的面积。优选，施用0.1至IOg,特别是0.2至5g，尤其优选0.4g/英亩。植物保护产品和硫酸纤维素的混合物包含0.01至10个包含体(OB) /g,优选0.05至I个ΟΒ/g,尤其优选0.01至0.03个0B/g。
按照本发明，为了完全保护植物，每季度施用0.1至IOOg/英亩，优选0.5至IOg/英亩，尤其优选I至2g/英亩,特别是1.2g/英亩上述混合物。
在本发明的备择方案中，为了完全保护植物，每季度施用0.1至IOxIO12个包含体/英亩，优选0.5至5xl012个包含体，尤其优选I至2xl012个包含体，特别是1.2xl012个包含体/英亩。
在本发明的备择方案中，以三次单独施用来进行所述量的植物保护产品和硫酸纤维素的应用。优选，间隔I至3周，特别是各自间隔2周地实施各次施用。
在一种实施方式中，根据本发明的方法用于保护水果和蔬菜植物，特别是果树，尤其优选苹果树以及相应果实。
本发明植物保护产品能够例如用于水果栽培中，特别保护苹果、梨、榲梓、杏、桃、李子、樱桃、山楂、栗子和胡桃免受害虫，尤其是昆虫特别是其幼虫损害。
在本发明的一种变型中，使用一种或多种选自下述的病毒:苹果皮小卷蛾(Cydiapomonella)颗粒体病毒(CpGV),苹果皮小卷蛾(Cydia pomonella)GV墨西哥系,苜猜银纹夜蛾(Autographa californica) AcMNPV,美洲棉铃虫(Helicoverpa armigera)MNPV,云杉卷叶蛾(Choristoneura furniferana) NPV,斜纹夜蛾(Spodoptera litoralis), MNPV,鲜食葡萄小卷蛾(Lobesia botrana)GV,橡列队蛾(Thaumetopoea processionea) NPV,谷实夜蛾(Helicoverpa zea) (Heliothis zea), (HzSNPV),番爺斑潜妮(Tuta absoluta)NPV,小菜蛾(Plutella xylostella) (PxMNPV),贪夜蛾(Spodoptera exigua) (SeMNPV),草地夜蛾(Spodoptera frugiperda) (SfMNPV)和舞毒蛾(Lymantria dispar) LdNPV0
各病毒的细节可从下表A获知:
表A


本发明涉及植物保护产品，其含昆虫病原病毒特别是杆状病毒和硫酸纤维素和/或其衍生物。