一种含有外异蛋白Eda的用于眼表及角膜疾病治疗的药物的制作方法[0002]Ectodysplasin,中文名为外异蛋白，简称Eda。它是一种保守的蛋白，在不同种属中，Eda蛋白氨基酸序列几乎相同，结构相似。先天性缺乏Eda蛋白可以引起少汗型外胚层发育不良综合症(XLHED)。该疾病是一种较为常见的遗传病综合性疾病，患者会有干眼，角膜炎结膜炎等临床表现。但应用该Eda蛋白进行眼表及角膜相关疾病的治疗药物却未见报道。
[0003]本发明的目的在于提供一种用于眼表及角膜疾病治疗的药物，该药物中含有外异蛋白Eda。[0004]本发明的具体技术方案如下:[0005]一种用于眼表及角膜疾病治疗的药物，其有效成分包括浓度为Ing/mL~lmg/mL的外异蛋白Eda，该蛋白为天然外异蛋白Eda和/或重组外异蛋白Eda，具有促进角膜上皮增殖修复的功能。[0006]在本发明的一个优选实施方案中，该药物为滴眼液，包括如下组分:外异蛋白Eda、溶解剂、pH调节剂、等渗剂、稳定剂和水。[0007]进一步优选的，所述溶解剂为丙二醇和/或羟丙基β环糊精；所述pH调节剂为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、磷酸、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸、酒石酸钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠和碳酸氢钾中的至少一种；所述等渗剂为氯化钠、氯化钾、硼酸、硼砂、硫酸钠、硫酸钾、硝酸钠、硝酸钾、醋酸钠、甘露醇、甘油、丙二醇和葡萄糖中的至少一种。
[0008]在本发明的一个优选实施方案中，该药物为眼膏，包括如下组分:外异蛋白Eda和
眼膏基质。
[0009]进一步优选的，该眼膏还包括乳化剂和眼用药物抑菌剂。
[0010]进一步优选的，所述眼膏基质中包括凡士林、液体石蜡和无水羊毛脂；所述乳化剂为卡波姆、丙二醇或聚山梨酯80 ;所述眼用药物抑菌剂为羟苯乙酯或苯扎氯铵。
[0011]在本发明的一个优选实施方案中，该药物为眼用凝胶制剂，包括如下组分:外异蛋白Eda、凝胶基质、溶解剂、渗透压调节剂、pH调节剂、防腐剂和水。
[0012]进一步优选的，所述凝胶基质为卡波姆、羟丙基纤维素、玻璃酸钠和黄原胶中至少一种；所述溶解剂为丙二 醇和/或羟丙基β环糊精；所述渗透压调节剂为氯化钠和/或甘露醇；所述PH调节剂为氢氧化钠水溶液、三乙醇胺溶液、氨水和碳酸钠溶液中的至少一种；所述防腐剂为苯扎氯铵、苯扎溴铵、三氯叔丁醇和尼泊金中的至少一种。[0013]进一步优选的，所述凝胶基质为卡波姆。
[0014]一种上述天然或重组外异蛋白Eda在制备用于眼表及角膜疾病治疗的药物中的应用。
[0015]本发明的有益效果是:本发明以Eda蛋白作为有效成分，对角膜没有毒性，具有促进角膜上皮修复和治疗Eda基因突变所产生的眼表疾病的作用。



[0016]图1为本发明实施例1的实验结果图，第一行为对照组，第二行为10ng/mL Eda组；
[0017]图2为本发明实施例2的实验结果图，第一行为普通显微镜观察结果，第二行为荧光素钠的染色结果。

[0018]以下通过结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
[0019]实施例1
[0020]取4只同龄C57小鼠，去除中央角膜上皮后，摘取眼球，将眼球放入含I %的FBS中进行培养，随机分为Eda给药组和对照组,在Eda给药组中加入10ng/ml的Eda蛋白，12h给药一次，连续给药36h，并在0h，12h，24h，36h，对角膜进行用荧光素钠着色，测量其损伤和修复面积，计算出角膜上皮修复率(具体如图1所示)。可以得出Eda蛋白具有促进角膜上皮修复的作用。
[0021]实施例2
[0022]选取出生后5周的野生型(WT)小鼠和Eda基因突变(Ta)小鼠各6只，每次对小鼠右眼给予7ul浓度为10ng/ml的Eda眼药水，6小时给药一次，连续给药三周，对其左眼给药等剂量的Eda眼药水溶剂PBS。三周后，如图2所示，对比Ta-PBS组，Ta-Eda组的角膜的荧光素钠着色明显减轻，眼表病变得到改善；在WT-Eda组和WT-PBS组中，均未见角膜异常。可以得出Eda蛋白对角膜没有毒性，且具有治疗Eda基因突变小鼠的眼表疾病的作用。
[0023]实施例3
[0024]滴眼液的制备方法，包括如下步骤:
[0025]1、精密称取天然Eda蛋白或Eda重组蛋白0.0Ol-1OOOmg> PH调节剂0.l_50g、等渗剂 0.l_50g、稳定剂 0.01-5g ；
[0026]2、先用1-50倍量的溶解剂将天然Eda蛋白或Eda重组蛋白充分溶解，搅拌混合，调PH范围为:7.0-8.0，用注射用水定容至1000ml，得药液；
[0027]3、在百级环境下，将步骤I所得药液可经微孔滤膜过滤I至5次；
[0028]4、在百级环境下，灌装药液至单剂量包装容器中，封口，既得成品。
[0029]所述溶解剂为丙二醇和/或羟丙基β环糊精；所述pH调节剂为磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、磷酸、硼酸、硼砂、醋酸、醋酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、酒石酸、酒石酸钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠和碳酸氢钾中的至少一种；所述等渗剂为氯化钠、氯化钾、硼酸、硼砂、硫酸钠、硫酸钾、硝酸钠、硝酸钾、醋酸钠、甘露醇、甘油、丙二醇和葡萄糖中的至少一种。[0030]实施例4
[0031]眼膏的制备方法，包括如下步骤:
[0032]1、无水羊毛脂和白凡士林加热融化后无菌纱布过滤后150度高温干燥灭菌Ih ；
[0033]2、液体石蜡150度高温干燥灭菌Ih ；
[0034]3、称取适量的天然Eda蛋白或Eda重组蛋白(使眼膏中该蛋白的终浓度为
0.0Ol-lOOOmg/mL，可加入适当乳化剂)，加入少量液体石蜡，研成细腻糊状，再加入灭菌的其余眼膏基质少量，研匀，再分次加入剩余基质(还可加入眼用药物抑菌剂)，使成全量，无菌分装即得Eda蛋白眼膏。
[0035]所述乳化剂为卡波姆、丙二醇或聚山梨酯80 ;所述眼用药物抑菌剂为羟苯乙酯或苯扎氯铵。
[0036]实施例5
[0037]眼用凝胶制剂的制备方法，包括如下步骤:
[0038]1、首先用1-50倍量的溶解剂把天然Eda蛋白或Eda重组蛋白溶解；
[0039]2、再与渗透压调节剂、pH调节剂、防腐剂和水混合加热熔解，1.5% -3.0%的凝胶基质溶胀制成透明乳膏，与上述材料混合即得眼用凝胶制剂，眼用凝胶制剂中Eda蛋白的终浓度为 0.001-1000mg/mL。
[0040]所述凝胶基质为卡波姆、羟丙基纤维素、玻璃酸钠和黄原胶中至少一种；所述溶解剂为丙二醇和/或羟丙基β环糊精；所述渗透压调节剂为氯化钠和/或甘露醇；所述PH调节剂为氢氧化钠水溶液、三乙醇胺溶液、氨水和碳酸钠溶液中的至少一种；所述防腐剂为苯扎氯铵、苯扎溴铵、三氯叔丁醇和尼泊金中的至少一种。
[0041] 以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，SP依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。