专利名称：一种使用素食材料生成维生素b12的方法维生素B12对人体的健康非常重要，缺乏适量的维生素B12，会导致恶性的贫血及大脑神经受到破环，因维生素B12主要存在于肉类及乳类中，而不存在植物里，对一些不食用乳类食品的长期素食者会造成营养不良，这都是一直以来在营养学上的问题，虽然近来据说维生素B12存在于大豆中，实验证明及西方研究并不赞同这种说法，而事实因植物类食品本身是决乏维生素B12，有些食品往往便添加了维生素B12在其中。而现时维生素B12 的制造是通过微生物发酵技术，转化前体化学物为维生素B12，在转化过程中添加化学物。 也有传言说发酵的大豆食品中含有维生素B12，经过对市场中发酵大豆食品的普查中，利用高效液相分折仪的分析，市场中出售的发酵大豆食品，例如腐乳、南乳等，并没有发现其含有可分析量的维生素B12。总之到目前为止，并没有使用纯天然、没添加化学品、用全素食材料制造维生素B12的方法
本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术的上述缺陷，提供一种使用素食材料生成维生素B12的方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是构造一种使用素食材料生成维生素 B12的方法，其包括以下步骤将能代谢淀粉或多糖为单糖的食用发酵真菌的菌株接种到大豆混合物的凝结物的表面，并在室温有氧条件下发酵培养至长满菌丝；将费氏丙酸杆菌的菌株接种到所述大豆混合物的凝结物的表面，并在室温低氧的环境条件下，发酵培养至产生维生素B12。在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，所述大豆混合物是大豆与米类的混合物、大豆与谷类的混合物、或者大豆与黑豆的混合物。在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，所述食用发酵真菌是雅致放射毛霉。在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，通过以下步骤生成所述大豆混合物的凝结物将大豆混合物用清水浸泡5、小时；在浸泡后的大豆混合物中加入清水，用粉碎机磨成浆，并进行分离浆汁；用慢火将所述浆汁煮15 30分钟，然后使用葡萄糖内酯或其它凝固剂制成所述大豆混合物的凝结物。在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，将所述大豆混合物用清水浸泡6小时，其中，浸泡时间会在不同温度下作出调整。在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，使用网孔布，进行分离浆汁。
在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，用慢火将所述浆汁煮20 分钟。
在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，所述葡萄糖内酯的浓度为 0.01mol/L。
在本发明所述的使用素食材料生成维生素B12的方法中，还包括加入盐卤汁，淹过所述大豆混合物的凝结物的表面，再培养1-2个月。
实施本发明的使用素食材料生成维生素B12的方法，具有以下有益效果利用多种微生物在全素食材料中发酵制造维生素B12，可为长期素食者，无论其素食的原因是宗教信仰，还是潮流推动，带来的是全素及纯天然含维生素B12的食品。


下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中图1是本发明生成的维生素B12的高效液相色谱分析仪的标准曲线示意图； 图加是本发明大豆和大米混合的分析图； 图2b是图加中维生素B12的含量分析图； 图3a是本发明大豆和谷类混合的分析图； 图北是图3a中维生素B12的含量分析图； 图如是本发明大豆和大麦混合的分析图； 图4b是图如中维生素B12的含量分析图； 图如是本发明大豆和黑米混合的分析图； 图恥是图fe中维生素B12的含量分析图； 图6a是本发明大豆和黑豆混合的分析图； 图6b是图6a中维生素B12的含量分析图； 图7a是本发明大豆和别的非米类、谷类或豆类物质混合的分析图； 图7b是图7a中维生素B12的含量分析图。

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
在本技术中会使用两种微生物进行发酵，雅致放射毛霉(Actinomucor elegans) 及费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)，其中的真菌雅致放射毛霉常用于腐乳发酵过程，可将淀粉或多糖代谢为单糖，单独使用不能制造维生素B12，细菌费氏丙酸杆菌常用于瑞士芝士制造的发酵中，在乳中发酵能产生小量的维生素B12，但单独使用在植物材料中发酵，并没有发现能制造维生素B12的能力。在本发明申请的技术方案中分两部分(一)将使用真菌雅致放射毛霉在指定的素食材料并在室温有氧条件下，发酵至真菌起白毛，若2天左右(发酵环境可导致时间有差别)把部份的淀粉或多糖代谢为单糖，在此其它的食用发酵真菌能代谢淀粉或多糖为单糖也可使用；(二)再加上细菌费氏丙酸杆菌在室温低氧发酵一至两个月。在一般的素食材料中，使用这两种微生物用上述的方法也未能使其生产维生素B12，只会在一些适当素食材料的组合中才能产生或产生比较多量的维生素B12，适当的组合有大豆加上谷类，如米类，谷类等、或大豆加黑豆。在发明申请中发现使用这两种的组合的素食材料，再加以上所述两种微生物进行分段发酵，都能产生维生素 B12，比单一使用费氏丙酸杆菌在牛奶中发酵所产生的维生素B12高出超过10倍。在一实施例中，使用素食材料生成维生素B12的过程为
将大豆混合物用清水浸泡5、小时；优选的，将所述大豆混合物用清水浸泡6小时，其中，浸泡时间会在不同温度下作出调整。另外，该大豆混合物是大豆与米类的混合物、大豆与谷类的混合物、或者大豆与黑豆的混合物。如图加是本发明大豆和大米混合的分析图； 图3a是本发明大豆和谷类混合的分析图；图如是本发明大豆和大麦混合的分析图；图fe 是本发明大豆和黑米混合的分析图；图6a是本发明大豆和黑豆混合的分析图。在大豆混合物中加入清水，用粉碎机磨成浆，并进行分离浆汁；优选的，使用网孔布，进行分离浆汁。用慢火将所述浆汁煮15 30分钟，然后使用葡萄糖内酯或其它凝固剂制成所述大豆混合物的凝结物；优选的，用慢火将所述浆汁煮20分钟。优选的，葡萄糖内酯的浓度为 0.01mol/L。将能代谢淀粉或多糖为单糖的食用发酵真菌的菌株接种到大豆混合物的凝结物的表面，并在在室温有氧条件下发酵培养至长满菌丝；优选的，该食用发酵真菌是雅致放射毛霉。将费氏丙酸杆菌的菌株接种到所述大豆混合物的凝结物的表面，并在室温低氧的环境条件下，发酵培养至产生维生素B12。如图2b是图加中维生素B12的含量分析图；图 3b是图3a中维生素B12的含量分析图；图4b是图如中维生素B12的含量分析图；图恥是图fe中维生素B12的含量分析图；图6b是图6a中维生素B12的含量分析图。加入盐卤汁，淹过所述大豆混合物的凝结物的表面，再培养1-2个月。图1是维生素B12在高效液相色谱分析仪的标准曲线，利用这标准曲线可计算维生素B12在最后大豆混合物的凝结物样品的含量。如图的分析结果显示维生素B12 可在大豆混合谷类(图h 5b)；及大豆混合黑豆(图6a 6b)中找到，但不在图7a 7b所示的大豆和别的非米类、谷类或豆类物质混合的分析图中找到。可通过如下方法对经过发酵处理后的大豆混合物的凝结物中维生素B12的含量进行检测
把5克样品放入塑料袋中，加20ml酸缓冲溶液，该酸缓冲溶液由1. 92179g/Liter乙酸和2. 44936g/Liter醋酸钠组成。放入研磨机中2分钟以研磨液。把样品从塑料袋拿出，然后在120°C高压灭菌10分钟。
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等待30分钟降温至室温。 把液体样品离心5分钟(8000RMP/分钟)，取上层清液，在0. 45um的滤膜过滤。然后，取每个样品1毫升和添加IOOul的内标。然后在高效液相色谱分析。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。


本发明涉及一种使用素食材料生成维生素B12的方法，其包括以下步骤将能代谢淀粉或多糖为单糖的食用发酵真菌的菌株接种到大豆混合物的凝结物的表面,并在室温有氧条件下发酵培养至长满菌丝；将费氏丙酸杆菌的菌株接种到所述大豆混合物的凝结物的表面，并在室温低氧的环境条件下，发酵培养至产生维生素B12。利用多种微生物在全素食材料中发酵制造维生素B12，可为长期素食者，无论其素食的原因是宗教信仰，还是潮流推动，带来的是全素及纯天然含维生素B12的食品。