专利名称：具有改变的受体特异性的嵌合成纤维细胞生长因子的制作方法成纤维细胞生长因子(FGF)家族包括FGF19亚家族，该亚家族由人FGF21、FGF23和FGF19以及鼠FGF15组成。与典型地以旁分泌的方式作用于其起源组织的FGF家族的其他成员不同，FGF19亚家族的成员以内分泌的方式作用于特定的末端组织。FGF家族成员的作用是由它们与FGF受体酪氨酸激酶(FGFR)家族的一个或多个成员的肝素依赖性结合导致的。此受体家族包括各自具有酪氨酸激酶结构域的四个成员FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4,以及FGFRl、FGFR2和FGFR3各自的两个剪接变体。这些发生在FGFRl、FGFR2和FGFR3的外显子3中的剪接变体，被称为“b”和“c”变体(S卩，FGFRlb, FGFR2b、FGFR3c、FGFRlc、FGFR2c 和 FGFR3c，其也被分别称为 FGFRl (III) b、FGFR2 (III) b、FGFR3(III)c、FGFRl (III)c、FGFR2(III)c 和 FGFR3(III)c)。FGF19亚家族的成员涉及在哺乳动物中调节多种组织特异性代谢过程。尤其为人所关心的是FGF19，FGF19显示靶向脂肪细胞和肝细胞两者并且对脂肪细胞和肝细胞两者具有作用。例如，用重组人FGF19(rhFGF19)处理过的小鼠尽管处于高脂肪饮食，但显示增加的代谢率，增加的脂类氧化，较低的呼吸商和重量减轻。此外，尽管处于高脂肪饮食，但是这些小鼠显示较低的瘦蛋白质、胰岛素、胆固醇和甘油三酯血清水平，和正常水平的血糖，并且食欲没有减退。缺乏瘦蛋白质但是含有FGF19转基因的肥胖小鼠显示重量减轻，胆固醇和甘油三酯降低，并且没有发展出糖尿病。当注射以rhFGF19时，缺乏瘦蛋白质的肥胖、糖尿病小鼠以重量减轻和血糖降低的方式显示其代谢特性的反转。(Fu, L.等，Endocrinology (内分泌学)145 (6), 2594-2603 (2004) ；Tomlinson, E.等，Endocrinology (内分泌学)143(5)，1741-1747 (2002))。FGF19亚家族的另一个成员，FGF21，主要由肝脏表达并且具有与FGF19相似的代谢作用，如经由其对脂肪组织作用的增加的代谢，重量减轻，降低的血糖水平，和对肥胖和糖尿病的抗性(Kharitonenkov, A.等，J Clin Invest (临床研究杂志)115 (6),1627-1635(2005))。FGF21转基因小鼠同样抵抗饮食诱导的肥胖。此外，在糖尿病啮齿动物模型中，FGF21给药降低了血糖和甘油三酯水平。FGF21也已经显示在调节生长激素(GH)通路中起作用。GH的合成代谢作用由胰岛素样生长因子I(IGF-I)调节，IGF-I主要由肝脏产生。GH诱导IGF-I转录，由此通过经GH受体的詹纳斯激酶2(JAK2)的激活来增加其循环水平。被激活的JAK2使信号转导子和转录激活子(STAT)家族成员磷酸化，当被磷酸化时，STAT家族成员经历核易位并且与目标基因的调节元件(包括IGF-I的调节元件)结合。尤其，磷酸化形式的STAT5显示出在此响应中发挥显著作用。GH对IGF-I水平的作用显示出被导致低水平的IGF-I转录和循环IGF-I的饥饿和禁食条件所抵消(Thissen，J. P.等，Endocr. Rev (内分泌学综述).15，80-101 (1994))。这些对IGF-I的作用可以是由被磷酸化的STAT5的水平的下降所导致的。特别，受GH注射的禁食大鼠与非禁食大鼠相比具有较低水平的肝磷酸化STAT5(Beaul0ye，V.等，Endocrinology (内分泌学)143，792-800 (2002))。在饥饿或禁食条件下在肝中被诱导的FGF21可以介导此作用。FGF21转基因小鼠已经显示出具有降低水平的IGF-I和被磷酸化的 STAT5 (Inagaki，T.等，Cell Metabolism(细胞代谢)8，77-83 (2008))。FGF19和FGF21的代谢作用通过它们与FGFRlc、FGFR2c和FGFR3c受体的结合来实现，其中与FGFRlc和FGFR2c的结合是最显著的。此外，FGF19和FGF21与这些受体的结合需要共同受体Klotho-beta。尽管这些FGFR受体具有普遍性，但是此对具有组织特异性定位的Klotho-beta共同受体的需要使得FGF19和FGF21的代谢作用变得具有脂肪细胞特异性。FGF19也显示出具有区别于FGF21的作用。例如，FGF19显示出经由其肝特异性作用通过肝调节胆汁产生。响应于餐后胆汁产生，FGF19通过抑制胆固醇7 a -羟化酶(胆汁酸合成中的限速酶)基因(CYP7A1)的转录并且通过刺激胆囊的充盈来负调控胆汁产生。此外，FGF19显示出具有肝促有丝分裂作用，没有发现FGF21具有该作用。例如，由于肝细胞增强的增殖和发育异常，FGF19转基因小鼠发展出肝腺癌，而用rhFGF19处理的小鼠显示出肝细胞的肝细胞增殖(Nicholes, K.等，Am J Pathol (美国病理学杂志)160，2295-2307(2000))oFGF19的这些另外的活性似乎通过其与FGFR4的结合来介导。FGF19可以以依赖Klotho-beta的方式和不依赖Klotho-beta的方式结合FGFR4。尽管FGF21同样显示出以依赖Klotho-beta的方式结合FGFR4，但是FGF21与FGFR4的结合不产生有效的信号转导。需要发展用于治疗代谢相关疾病如糖尿病、肥胖、高血糖和其他相关疾病的新疗法。同样需要发展用于这些代谢相关疾病的新疗法，其中这种疗法的不需要的生长或增殖潜能(例如，肿瘤发生潜能)得到消除或减小。同样需要发展用于这些代谢相关疾病的新疗法，其中这种疗法的生长激素抵抗的可能性得到消除或减小。发明概述在第一方面中，本发明提供嵌合人成纤维细胞生长因子19(hFGF19)多肽。在本发明的一些实施方案中，嵌合多肽的序列包含C端部分，该C端部分包括hFGF19多肽序列的C端部分；以及N端部分，该N端部分包括hFGF21多肽序列的N端部分。在某些实施方案中，hFGF19多肽序列的C端部分的长度是约45至约185个残基而hFGF21多肽序列的N端部分的长度是约7至约140个残基。在本发明的另一个实施方案中，提供有这样的嵌合hFGF19多肽，其中该多肽的序列包含C端部分，该C端部分包括hFGF21多肽序列的C端部分；以及N端部分，该N端部分、包括hFGF19多肽序列的N端部分。在一些实施方案中，hFGF21多肽序列的C端部分的长度是约8至约145个残基，而hFGF19多肽序列的N端部分的长度是约45至约175个残基。在本发明的另一个实施方案中，提供有这样的嵌合hFGF19多肽，其中该嵌合多肽的序列包含第一多肽序列，所述第一多肽序列与hFGF19多肽的序列至少具有一定的序列同一性，并且其中第一多肽序列的一部分被第二多肽序列的一部分取代以致第一多肽序列的被取代部分的长度是约3至约185个残基，所述第二多肽序列与hFGF21多肽的序列至少具有一定的序列同一丨I"生。在本发明的一些实施方案中，提供有这样的嵌合hFGF19多肽，其中该嵌合多肽的序列包含第一多肽序列，所述第一多肽序列与hFGF19多肽的序列至少具有一定的序列同一性，并且其中第一多肽序列的一部分被第二多肽序列的超过一个部分取代，所述第二多肽序列与hFGF21多肽的序列至少具有一定的序列同一性。在一些实施方案中，嵌合hFGF19多肽包含用第二多肽的￠1-02环，第二多肽的P 10- P 12区段，和/或第二多肽的对应序列GQV对第一多肽的2环的取代，对第一多肽的MO-P 12区段的取代，和/或对第 一多肽的五个残基WGDPI的取代。在本发明的某些实施方案中，嵌合hFGF19多肽包含序列HPIPDSSPLLQFGGQVRQRYLYTSGPHGLSSCFLRIRADGVVDCARGQSAHSLLEIKAVALRTVAIKGVHSVRYLCMGADGKMQGLLQYSEEDCAFEEEIRPDGYNVYRSEKHRLPVSLSSAKQRQLYKNRGFLPLSHFLPMLPMVPEEPEDLRGHLESDMFSSPLETDSMDPFGLVTGLEAVRSPSFEK(SEQ ID NO:5).在某些实施方案中，将本发明的嵌合hFGF19多肽融合到第二多肽，所述第二多肽是免疫球蛋白的Fe部分，免疫球蛋白的Fe部分的类似物以及免疫球蛋白的Fe部分的一个或多个片段。在某些实施方案中，免疫球蛋白选自由以下组成的组IgG_l，IgG-2, IgG-3,IgG-4, IgA-I，IgA-2, IgE, IgD和IgM。在一些实施方案中，Fe部分是人的或人源化的。在一些实施方案中，嵌合hFGF19多肽的C末端被融合到第二多肽的N末端。在一些实施方案中，将嵌合hFGF19多肽的C末端经由接头融合到第二多肽的N末端，所述接头选自由以下组成的组[Gly]n接头、[Gly3Ser]m接头和[Gly4Ser]m接头,其中n是1_30的整数而m是1-6的整数。本发明包括与天然hFGF19具有至少或几乎相同的生理学半衰期的嵌合hFGF19多肽。本发明包括与天然hFGF21具有至少或几乎相同的生理学半衰期的嵌合hFGF19多肽。在某些实施方案中，嵌合hFGF19多肽基本不以不依赖Klotho-beta或依赖Klotho-beta的方式使FGFR4激活。在某些实施方案中，嵌合hFGF19多肽以依赖Klotho-beta 的方式激活 FGFRlc。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽不减小个体的瘦体重。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽基本不使个体的瘦体重减小。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽不使个体的骨密度减小。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽基本不使个体的骨密度减小。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽不使个体的心脏功能下降。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽基本不使个体的心脏功能下降。在某些实施方案中，嵌合hFGF19多肽不使或基本上不使体内磷酸化的STAT5多肽的量减小。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽不使或基本上不使个体中磷酸化的STAT5多肽的量减小。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，在个体中磷酸化的STAT5多肽的量减少，但是此磷酸化的STAT5多肽的量大于当将天然hFGF21给药于个体时的磷酸化的STAT5多肽的量。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药于个体时，磷酸化的STAT5多肽的量是在个体中不进行这种给药的情况下磷酸化的STAT5 多肽的量的100%至 5%，100%至 10%，100%至 20%，100%至 30%，100%至 40%，100%至 50%，100%至 60%，100%至 70%，100%至 80%，100%至 90%或 100%至 95% 中的任一种。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，磷酸化的STAT5多肽的量的减少小于当给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量的减小。例如，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，磷酸化的STAT5多肽的减少是当给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量的减小的0%至5%，0%至10%，0%至20%，0%至30%，0%至40%，0%至 50%，0%至 60%，0%至 70%，0%至 80%，0%至 90%或 0%至 95%中的任一种。在某些实施方案中，嵌合hFGF19多肽不使或基本上不使体内循环的胰岛素样生 长因子I (IGF-I)的量减少。在某些实施方案中，当被给药到个体时，嵌合hFGF19多肽不使个体中循环的IGF-I的量减少或显著减少。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，循环的IGF-I的量减少，但是此循环的IGF-I的量大于当将天然hFGF21给药于个体时的循环的IGF-I的量。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药于个体时，循环的IGF-I的量是在个体中不进行这种给药的情况下循环的IGF-I的量的100%至5%，100% 至 10 %，100 % 至 20 %，100 % 至 30 %，100 % 至 40 %，100 % 至 50 %，100 % 至 60 %，100%至70%，100%至80%，100%至90%或100%至95%中的任一种。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药于个体时,循环的IGF-I的量的减少小于当给药天然hFGF21时的循环的IGF-I的量的减小。例如，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，循环的IGF-I的减少是当给药天然hFGF21时的循环的IGF-I的量的减小的0%至5%，0%至10%，0%至20%，0%至30%，0%至40%，0%至50%，0%至60%，0%至70%，0%至80%，0%至90%或0%至95%中的任一种。在另一方面中，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的本发明的嵌合hFGF19多肽；以及可接受的药物载体。在另一方面中，本发明提供治疗显示以下症状中的一种或多种的个体的方法月巴胖、I型糖尿病、2型糖尿病、高血糖、代谢综合征、动脉粥样硬化、高胆固醇血症、卒中、骨质疏松、骨关节炎、关节变性病、肌萎缩、老年性肌肉萎缩(sarcopenia)、瘦体重下降、秀发、皱纹、疲劳增加、耐力下降、心脏功能减弱、免疫系统功能障碍、癌症、帕金森氏病、老年痴呆、阿尔茨海默病和认知功能下降，所述方法包括向个体给药治疗有效量的本发明的药物组合物。在另一方面中，本发明提供降低个体的血糖的方法，所述个体需要这种治疗，所述方法包括向个体给药治疗有效量的本发明的药物组合物。在另一方面中，本发明提供分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含与编码具有SEQ ID NO :5的约I至约190的氨基酸残基的多肽的DNA分子或其互补序列(complement)具有至少80*%、至少90*%、至少95%或至少99%序列同一性的DNA。在另一方面中，本发明提供分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包含序列CACCCCATCCCTGACTCCAGTCCTCTCCTGCAATTCGGGGGCCAAGTCCGGCAGCGGTACCTCTACACCTCCGGCCCCCACGGGCTCTCCAGCTGCTTCCTGCGCATCCGTGCCGACGGCGTCGTGGACTGCGCGCGGGGCCAGAGCGCGCACAGTTTGCTGGAGATCAAGGCAGTCGCTCTGCGACCGTGGCCATCAAGGGCGTGCACAGCGTGCGGTACCTCTGCATGGGCGCCGACGGCAAGATGCAGGGGCTGCTTCAGTACTCCGAGGAAGACTGTGCTTTCGAGGAGGAGATCCGCCGAGATGGCTACAATGTGTACCGATCCGAGAAGCACCGCCTCCCGGTCTCCCTGAGCAGTGCCAAACAGCGGCAGCTGTACAAGAACAGAGGCTTTCTTCCACTCTCTCATTTCCTGCCCATGCTGCCCATGGTCCCAGAGGAGCCTGAGGACCTCAGGGGCCACTTGGAATCTGACATGTTCTCTTCGCCCCTGGAGACCGACAGCATCGACCCATTTGGGCTTGTCACCGGACTGGAGGCCGTGAGGAGTCCCAGCTTTGAGAAG(SEQ ID NO :7)， 或其部分。在某些实施方案中，本发明的分离的核酸还包含编码对应于免疫球蛋白的Fe部分的氨基酸残基的序列。在另一方面中，本发明提供表达系统，所述表达系统包含本发明的核酸分子。在另一方面中，本发明提供宿主细胞，所述宿主细胞包含本发明的表达系统或核酸。在另一方面中，本发明提供由本发明的核酸分子编码的分离的多肽。在另一方面中，本发明提供生产分离的多肽的方法，所述方法包括在适于表达编码的多肽的条件下培养本发明的宿主细胞和从细胞培养物中回收编码的多肽。在另一方面中，本发明提供通过本发明的方法生产的分离的多肽。附图简述图I显示人FGF19多肽(SEQ ID NO 1)和人FGF19多肽前体(SEQ ID NO 3)的氨基酸序列；图2显示人FGF21多肽(SEQ ID NO 2)和人FGF21多肽前体(SEQ ID NO 4)的氨基酸序列；图3显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的受体结合测定的典型结果；图4显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的受体结合测定的典型结果；图5显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的肝特异性基因表达测定的典型结果；图6显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的脂肪细胞特异性基因表达测定的典型结果;图7显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的血糖下降测定的典型结果；图8显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的葡萄糖耐受测试测定的典型结果；图9显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的免疫球蛋白Fe融合的活性测定的典型结果；以及图10-14显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的受体特异性测定的典型结果。图15显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的有关磷酸化Stat5蛋白质水平的典型结果。图16显示使用本发明的嵌合FGF19多肽的有关细胞总的代谢活性的典型结果。图17显示在胆汁酸(“BA”)调节中FGF19需要FGFR4，而在改善葡萄糖耐受中FGF19不需要FGFR4。图17A显示在葡萄糖耐受测试中用FGF19或PBS处理的野生型(“WT”)小鼠和FGFR4敲除(“K0”)小鼠的葡萄糖水平。*p < 0. 05。**p < 0. 01。曲线下面积(AUC)的P值是p < 0. 02 (WT)和p < 0. 005 (KO)。N = 6 8。图17B显示在第7天在安乐死时用FGF19或PBS处理的WT小鼠和FGFR4 KO小鼠中的多种代谢参数(体重(g)、肝/BW比(% )、血清胰岛素(ng/mL)、血清3 -羟基丁酸(“BHB”)(mg/L)、血清乳酸(mg/dl)、和血清甘油三酯(mg/dl))。对小鼠实施安乐死并且在3hr的禁食后准备血清。N = 6 8。图17C显示在用FGF19或PBS处理的WT和FGFR4K0小鼠中的血清BA组成分析。只显示主要BA种类。CA :胆酸，DCA :脱氧胆酸，MCA :鼠胆酸，T-:缀合牛磺酸的。图17D显示通过实时qPCR确定的在用FGF19或PBS处理的WT和FGFR4K0小鼠中多种肝基因(Egr-l、c_Fos、AFP、Cyp7al、Cyp8b、Cyp27al、Cyp7b 和 GK)的相对表达。N = 6 8。图 17B-17D 的 p 值是< 0. 05、** < 0. 005 (PBS vs FGF19)、# < 0. 05、## < 0. 005 (WT vs FGFR4K0)。图18显示对具有减小的FGFR4活性的FGF19变体的鉴定。图18A显示来自GAL-Elkl荧光素酶测定，使用转染有KLB和FGFRlc或FGFR4并用含增加浓度的FGF19 (0)和FGF21 ( ▲)的培养基孵育的大鼠L6细胞，由海肾(renilla)荧光素酶活性归一化的相对的萤火虫荧光素酶活性(显示为相对荧光素酶单位(“RLU”))。图18B显示FGF19(顶部)、FGF21(底部)和具有左边氨基酸组成的多种嵌合蛋白质的图(按比例)。基于显示在图18C中的GAL-Elkl测定的结果，每种嵌合体被分类为如在右侧指示的类别(I)、(II)或(III)。此处不显示当使用条件培养基时不表现与FGF21或FGF19相当的FGFRlc活性的嵌合体。图18C显示在GAL-Elk-I测定中FGFRlc或FGFR4的激活，所述GAL-Elk-I测定使用用KLB和/或FGFR(FGFRlc或FGFR4)共转染并且与条件培养基孵育的L6细胞，所述条件培养基来自用不同FGF构建体(参见图18B :所用FGF构建体的氨基酸组成)瞬时转染的293细胞。将结果显示为相对于用模拟品(mock)转染的细胞调节的对照培养基的诱导倍数(fold induction)。图18D显示在GAL-Elkl荧光素酶测定中FGFR激活的诱导倍数，所述GAL-Elkl荧光素酶测定使用用FGFRlc、FGFR4+KLB或FGFR4转染并且与含有增加浓度的经纯化的FGF19(0)或FGF19v(T)(图18B和18C中的构建体#4)的培养基孵育的大鼠L6细胞。图18E显示FGF19和FGF19v与融合到Fe片段的FGFR4的固相结合测定结果。该实验的示意图显示在右侧。图18F显示在图18E中使用的抗FGF19抗体以难区别的亲和性识别FGF19和FGF19v(对照ELISA实验)。该实验的示意图显示在右侧。图19显示GAL-Elkl荧光素酶测定中的RLU，所述所述GAL-Elkl荧光素酶测定在用KLB和FGFR2c或FGFR3c转染并且与含有增加浓度的FGF19 (0)或FGF21 ( ▲)的培养基孵育的大鼠L6细胞中进行。用KLB和指定的FGFR以及GAL_Elkl、SV40-海肾荧光素酶和Gal响应性荧光素酶报告子(reporter)的表达载体共转染L6细胞。在荧光素酶测定前将经转染的细胞与含有增加浓度的FGF19或FGF21的培养基孵育6小时。通过由海肾荧光素酶活性归一化并且以相对荧光素酶单位(RLU)表达的相对荧光素酶活性来评估转录激活。此图显示在存在KLB的情况下FGF21和FGF19激活FGFR2c和FGFR3c。图20显示在GAL-Elk-I测定中FGFRlc或FGFR4的激活，所述GAL-Elk-I测定使用用KLB和/或FGFR(FGFRlc或FGFR4)共转染并且与条件培养基孵育的L6细胞，所述条件培养基来自用显示在X轴的不同FGF构建体(参见图18B :所用FGF构建体的氨基酸组成)瞬时转染的293细胞。将结果显示为相对于用模拟品转染的细胞的对照培养基的诱导倍数。在X轴指示的编号对应于显示在图18B中的构建体的编号。图21显示FGF19v在饲料喂养小鼠中的作用。图2IA显示在用lmg/kg的FGF21、FGF19或FGF19v或PBS对照注射(经由尾静脉)的FVB小鼠中不同基因(c_Fos、Egr-I、 GK、SHP 和 Cyp7al)的相对表达。p 值* < 0. 05，** < 0. 01，*** < 0. 001 (vs PBS)。在注射后4小时，从每只鼠提取肝mRNA并且对其进行指定基因的实时qPCR分析。图21B显示在用lmg/kg的FGF21或FGF19或PBS对照经腹腔注射的WT小鼠或FGFR4 KO (KO)小鼠(N =5-7)中不同基因(。-卩08、￡81-1、61(、5册和07 7&1)的相对表达。用FGF蛋白质或PBS对照经腹腔注射过夜禁食的小鼠。在注射后4小时，从每只鼠提取肝mRNA并且对其进行指定基因的实时qPCR分析。p值*< 0.05，# < 0.01，*# < 0.001。图21C显示在不依赖贴壁的(anchorage independent)细胞生长测定中通过突光强度(x IO5)测量的用不同浓度(10ng/mL、60ng/mL 和 200ng/mL)的 FGF21、FGF19 或 FGF19v 处理的 H印G2 细胞的增殖。基于非突光指示染料刃天青(阿尔玛蓝(Alamer Blue))到试卤灵的转化率来估计在软琼脂中HepG2细胞的增殖。图21D显示在注入FGF19或FGF19v的FVB小鼠中BrdU肝细胞的变化倍数。N = 6，*p < 0. 01，***p < 5E-5 (vs PBS)，##p < 0. 0002 (vs FGF19)。给 FVB 小鼠植入渗透泵从而以lng/hr ( 0. 8mg/kg/天)连续注入指定的FGF蛋白质(第0天)。该小鼠同样接受从第I天开始的每日lmg/kg/天FGF蛋白质(q. d.)和30mg/kg/天BrdU(b.i.d.)的注射。在第7天，将肝切开并进行抗BrdU染色。结果显示为相对于模拟品处理的动物的BrdU阳性肝细胞数目/分析面积的诱导倍数。图21E显示在图21C中所示的研究的代表性图像。图21F显示不同基因(c-Fos、Egr-U AFP、GK、Cyp7al和Cyp8b)在用于图21D 和 21E 的小鼠中的相对表达。N = 6。*p < 0. 05，**p < 0. 005，***p < 0. 001 (vs PBS)， #p < 0. 05，##p < 0. 005 (vs FGF19)。图22显示FGF19v和FGF21具有相似的代谢作用并且改善ob/ob小鼠中的高血糖。给11周龄ob/ob小鼠皮下植入渗透泵从而注入lng/hr FGF蛋白质(0. 4mg/kg/天)或PBS对照(N = 7)。图22A显示在通过渗透泵注入lng/hr FGF21或FGF19v(0. 4mg/kg/天)或PBS对照(N = 7)的ob/ob小鼠中的体重(g)和血糖(mg/dl)。在第0天植入渗透泵。图22B显示在随机喂养条件和在过夜禁食后在注入以FGF21、FGF19v或PBS对照的ob/ob小鼠中的血糖水平(mg/dl)。图22C显示在第8天在注入以FGF21、FGF19v或PBS对照的ob/ob小鼠中的血清非酯化脂肪酸(“NEFA”)水平。图22D显示在第6天在注入以FGF21、FGF19v或PBS对照的ob/ob小鼠中进行的葡萄糖耐受测试结果。使小鼠过夜禁食并在t = 0给其经腹腔注射lg/kg葡萄糖。图22E显示在第8天在注入以FGF21、FGF19v或PBS对照的ob/ob小鼠中的器官/体重比(％)。图22F显示通过qPCR确定的不同基因(AFP、IGFBP2、SCD-I、Cyp7A、Cyp8B、UCP-1、MCAD 和 SREBP-lc)在注入以 FGF21、FGF19v 或 PBS 对照的 ob/ob小鼠的不同组织(肝、褐色脂肪组织(“BAT”)和白色脂肪组织(“WAT”))中的相对表达。p 值* < 0. 05，** < 0. 005，*** < 0. 0005 (vs PBS 对照)。发明详述本发明提供新的嵌合FGF19多肽。在本发明的一些实施方案中，嵌合FGF19多肽序列包含FGF19多肽序列的一部分和FGF21多肽序列的一部分。在某些优选实施方案中，FGF19多肽是经处理的人FGF19 (hFGF19)多肽，其序列在SEQ ID NO :I中得到限定。在某些优选实施方案中，FGF21多肽是经处理的人FGF21(hFGF21)多肽，其序列在SEQ ID N0:2得到限定。在另一方面中，本发明提供新的嵌合FGF19多肽，其进一步与免疫球蛋白结构域，如Fe结构域融合。在另一方面中，本发明提供新的嵌合FGF19多肽，其具有改变的受体特异性。在某些优选实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽基本上不以依赖Klotho-beta或不依赖Klotho-beta的方式使FGFR4激活。在某些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一种。在一些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽可以具有以下有利特征中的一种或多种当给药时多肽在个体中基本不诱导肝细胞增殖，当给药时多肽在个体中基本不诱导生长激素抵抗，多肽不包含种群中的多态性残基，多肽具有与天然FGF19多肽(如天然hFGF19多肽)至少或大约相同的体内生理学半衰期，多肽具有与天然FGF21多肽(如天然hFGF21多肽)至少或大约相同的体内生理学半衰期，当给药时多肽基本不使个体的瘦体重下降，当给药时多肽基本不使个体的骨密度下降，并且当给药时多肽基本不使个体的心脏功能下降。本发明的嵌合FGF19多肽的有利特征还可以包括以下中的一个或多个在需要这种治疗的个体中，多肽使个体的血糖下降；多肽以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一个；多肽基本不以依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4 ;多肽基本不以不依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4 ;当给药时，多肽不使或基本不使个体的磷酸化的STAT5多肽的量减少；当将多肽向个体给药时，个体的磷酸化的STAT5多肽的量减少但是此磷酸化的STAT5多肽的量大于向个体给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量；当将多肽向个体给药时，个体的磷酸化的STAT5多肽的量的减少小于在个体中给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量的减小；当给药时，多肽不使或基本不使个体的循环的IGF-I多肽的量减少；当将多肽向个体给药时，个体的循环的IGF-I的量减少但是此循环的IGF-I的量大于向个体给药天然hFGF21时的循环的IGF-I的量；当将多肽向个体给药时，个体的循环的IGF-I的量的减少小于在个体中给药天然hFGF21时的循环的IGF-I的量的减小；并且多肽不使或基本不使具有正常或超常量的GH的个体的循环的IGF-I多肽的量减少。在某些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽具有这样的有利特性以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一个，并且基本不以依赖或不依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4。在某些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽具有这样的有利特性以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一个，基本不以依赖或不依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4，并且使个体的磷酸化的STAT5多肽的量减少但是此磷酸化的STAT5多肽的量大于向个体给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量。在某些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽具有这样的有利特性以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一个，并且基本不以依赖或不依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4，并且不包含在种群中具有多态性的残基。在某些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽具有这样的有利特性以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一个，基本不以依赖或不依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4，使个体的磷酸化的STAT5多肽的量减少但是此磷酸化的STAT5多肽的量大于向个体给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量并且不包含在种群中具有多态性的残基。在另一方面中，本发明提供新的嵌合FGF19多肽，其具有改变的受体特异性。在某些优选实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽基本不以依赖Klotho-beta或不依赖Klotho-beta的方式激活FGFR4。在某些实施方案中，本发明的嵌合FGF19多肽以依赖Klotho-beta的方式激活FGFRlc、FGFR2c或FGFR3c中的至少一个。、在另一方面中，与受天然FGF21影响的生长激素抵抗相比，嵌合FGF19多肽不影响个体中的生长激素抵抗活性。在另一方面中，与受天然FGF21影响的生长激素抵抗相比，嵌合FGF19多肽不影响个体中基本的生长激素抵抗活性。在某些实施方案中，嵌合FGF19多肽不使或基本不使个体的磷酸化的STAT5多肽的量减少。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，个体中的磷酸化的STAT5多肽的量减少但是此磷酸化的STAT5多肽的量大于向个体给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，磷酸化的STAT5多肽的量的减少小于给药天然hFGF21时的磷酸化的STAT5多肽的量的减小。在某些实施方案中，嵌合FGF19多肽不使或基本不使循环的胰岛素样生长因子I(IGF-I)的量减少。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，循环的IGF-I的量减少但是此循环的IGF-I的量大于向个体给药天然hFGF21时的循环的IGF-I的量。在某些实施方案中，当嵌合hFGF19多肽被给药到个体时，循环的IGF-I的量的减少小于给药天然hFGF21时的循环的IGF-I的量的减小。在另一方面中，本发明提供新的分离的核酸分子，其具有编码本发明的嵌合FGF19多肽的序列；包含本发明的核酸分子的新的表达系统；以及含有本发明的核酸分子 或本发明的表达系统的宿主细胞。在另一方面中，本发明包括能够特异性地结合本发明的嵌合FGF19多肽的抗体。在另一方面中，本发明提供药物组合物，其包含本发明的嵌合FGF19多肽和药用载体。在另一方面中，本发明提供通过给药本发明的嵌合FGF19多肽或其合适的药物制剂来治疗个体的代谢相关疾病的方法。在另一方面中，本发明提供在个体中实现以下作用中的至少一个或多个的方法降低血糖、减少肥胖、增加代谢率、增加脂质氧化、减小体重、降低血清葡萄糖、瘦蛋白质、胰岛素、胆固醇和/或甘油三酯水平、治疗糖尿病以及其他代谢作用，其中这些作用是通过向个体给药治疗量的本发明的嵌合FGF19多肽或其药物制剂来实现的。I.具有N端FGF21多肽序列的嵌合FGF19多肽在本发明的一个方面中，嵌合FGF19多肽序列包含C端部分和N端部分。嵌合FGF19多肽序列的N端部分包括FGF21多肽序列的N端部分，而嵌合FGF19多肽序列的C端部分包括FGF19多肽序列的C端部分。在一些上述实施方案中，FGF19多肽序列的C端部分和嵌合FGF21多肽序列的N端部分连续地结合。在一些上述实施方案中，FGF19多肽序列的C端部分和嵌合FGF21多肽序列的N端部分通过使两个部分间共有的I个、2个、3个或多个残基重叠而连续地结合。在一些备选实施方案中，FGF19多肽序列的C端部分和嵌合FGF21多肽序列的N端部分具有I个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基残基的插入间隔部分。在某些优选实施方案中，FGF19多肽是人FGF19(hFGF19)多肽，其序列在SEQ IDNO 1中得到限定(图I)。在一些实施方案中，hFGF19多肽序列的C端部分长度为约45至约185个残基，明显地包含显示在表I中的hFGF19C端部分的序列长度。在一些实施方案中，嵌合FGF19多肽序列的C端部分包括与hFGF19多肽序列具有至少80%、至少85%、至少90 %、至少95 %、至少97 %或至少99 %氨基酸序列同一性的多肽序列的C端部分。在一些实施方案中，FGF19多肽是加工前的人FGF19(hFGF19)多肽，所述加工前的人FGF19 (hFGF19)多肽包括它的信号序列并且其序列在SEQ ID NO 3中得到限定(图I)。在某些优选实施方案中，FGF21多肽是人FGF21(hFGF21)多肽，其序列在SEQ IDNO :2中得到限定(图2)。在一些实施方案中，hFGF21多肽序列的N端部分的长度为约7至约140个残基，明显地包含显示在表2中的hFGF19N端部分的序列长度。在一些实施方案中，嵌合FGF19多肽序列的N端部分包括与hFGF21多肽序列具有至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %、至少97 %或至少99 %氨基酸序列同一性的多肽序列的N端部分。在一些实施方案中，FGF21多肽是加工前的人FGF21(hFGF21)多肽，所述加工前的人FGF21 (hFGF21)多肽包括它的信号序列并且其序列在SEQ ID NO 4中得到限定(图2)。
如在本文中使用的，多肽序列的(如hFGF19或hFGF21多肽序列的)C端部分、N端部分、被取代部分或取代部分具有第一位置和最后位置。这些位置对应于该部分所涉及的多肽序列中的位置。因此，限定部分的序列是连续的氨基酸序列，其在对应于第一位置的多肽序列中的位置处或附近开始，并且在对应于最后位置的多肽序列中的位置处或附近结束。在一些实施方案中，多肽的C端部分的最后位置对应于或大致对应于多肽的最后一个残基。在一些实施方案中，多肽的N端部分的第一位置对应于或大致对应于多肽的第一个残基。本发明中涉及的hFGF19多肽序列的C端部分的实例包括但不限于具有对应于或大致对应于SEQ ID NO 1的以下位置中的任一个的第一位置的那些10、11、25、26、27、28、30、33、35、37、40、41、42、43、44、45、52、53、54、56、57、58、59、72、73、74、79、80、81、143、144、145或146。各个典型C端部分同样具有对应于或大致对应于SEQ ID NO :I的位置194的最后位置。表I显示hFGF19的典型的C端部分的多肽序列。在本文中同样考虑hFGF19的其他类似部分。表I :hFGF19多肽序列的典型C端部分


本发明涉及新的嵌合成纤维细胞生长因子(FGF)多肽、新的编码嵌合FGF多肽的DNA，并且涉及嵌合FGF多肽的重组生产，并且涉及将嵌合FGF多肽用于治疗性治疗代谢相关疾病和其他病症以及将其用于生产包含嵌合FGF多肽的药物活性组合物的方法、组合物和测定，所述组合物具有治疗和药理学性质，其包括与治疗代谢相关疾病和其他病症相关的那些。