一种水蛭提取物及其生产方法和用途制作方法

康强

2003年11月5日

2002年4月28日

2002年4月28日

康强

A61K35/56GK1452986SQ0211672

水蛭 提取物 用途 生产

1.一种菲牛蛭提取物，其特征是该提取物采用菲牛蛭活体生理盐水提取，或活体冷冻融溶后生理盐水提取的方法生产的具有生物活性的冻干固体提取物2.按照权力要求1所述水蛭提取物的生产方法，采用菲牛蛭(HIRUDINARIA MANILLENSIS)为原料，通过提取、冷冻干燥制得本品，其特征采用如下步骤和方法①活体菲牛蛭，或活体冷冻融后的菲牛蛭，加入适量生理盐水，匀浆，搅拌30——60分钟后，过滤，滤液调PH值＝7--8，待用；②不溶物加入乙酸乙酯溶解，调PH值为3.5-4.5，加热到80℃，在溶剂蒸发后，将剩余物溶解在PH值＝7--8的生理盐水中，搅拌过滤，滤液待用；③合并滤液，送入冻干机中冷冻干燥，收集冻干粉3.按照权力要求2所述的水蛭提取物的生产方法，其特征在于有最佳抗凝血酶活性4.按照权力要求1所述的水蛭提取物的用途，其特征在于用于制备治疗血栓性心脑血管疾病的药物中的应用

本发明涉及中药制药领域，具体涉及一种用于治疗和预防血栓引起的心脑血管疾病的菲牛蛭(HIRUDINARIAMANILLENSIS)提取物及其生产方法科技的进步，新药开发的突破改善了人类与疾病斗争的方式，另一方面，人类不得不付出更多的文明的代价，冠心病、高血压、高血脂这些文明的“富贵杀手”构成了对人类健康的主要威胁如今，世界上平均每天有5万多人死于心血管病，其中半数是中年人每年中国有200多万人死于心脑血管病，已是心脑血管病高发国，心脑血管病治疗药物逐年增长，是药品零售市场规模最大的一类用药研制高效低毒的心脑血管疾病药物是当务之急蛭类动物是环节动物门(ANNELIDA)蛭纲(HIRUDINEA)的统称，在我国有近百种，其中吸食哺乳动物血液的种类属医蛭科(HIRUDINIDAE)的医蛭属(HIRUDO)和牛蛭属(POECILOBDELLA)以及山蛭科(HAEMADIPSIDAE)的山蛭属(HAEMADIPSA)医学史上，人类很早以前就开始应用水蛭，水蛭最初被用作放血，以代替刺血针，划痕器等，19世纪的欧洲广泛使用水蛭，成为治疗各种疾病的万灵药从水蛭中分离抗血栓物质，实际上是受传统医学适应症的启发1884年HAYCRAFT报道医用水蛭中含有抗凝血物质；1904年，JACOBY自医用水蛭中分离出抗凝有效成分，定名为水蛭素，直到1955年MARKWARDT从医蛭中分离出纯的水蛭素，并鉴定出它是含有65个氨基酸的多肽，药理实验证明，水蛭素是迄今为止世界上最强的天然的凝血酶的特效抑制剂MARKWARDT甚至预言将水蛭素应用于临床，对于血栓病的预防和治疗将是决定性的进展但水蛭素的临床应用需要大量的天然水蛭，而在今天的欧洲天然水蛭稀少，并已被列为欧洲濒危动物，受到法律的保护这就限制了天然水蛭素的推广应用1986年重组水蛭素的出现，虽为水蛭素临床应用带来一线希望，但由于重组水蛭素与天然水蛭素的药理作难以临床推广应用水蛭素的发现及研究，虽然促进了抗凝血药物的研究，“但它也掩盖了水蛭其它生物活性物质的发现，这个不公正的现象在最近的二十几年已被矫正”(G.I.NIKONOV)现在水蛭其他生物活性物质的发现和定性已远远超过水蛭素的生物活性从上世纪八十年代一个名字叫SAWYER的美国生物学家，在英国的威尔士斯旺西成立BIOPHARM水蛭生物公司开始，世界上掀起了水蛭研究和应用的新浪潮，特别是法国、俄罗斯、乌克兰合作成立的BIORICA公司，更是专门致力于水蛭的生物研究及开发临床应用的药物水蛭唾液腺分泌物是一个“药物微工厂”，其生物活性物质除水蛭素——凝血酶高度独特殊的抑制剂外，尚含有失固酶——使血栓溶解的酶；水蛭前列腺素——抑制血小板聚集，降血压；血浆激肽释放酶抑制剂；透明质酸酶——扩散因子；以及CALIN，EGLIN，BDLLINS等生物活性物质；这些水蛭生物活性物质具有抗栓、溶栓、抗动脉粥样硬化、改善微循环等生理作用；SOWYER预言“水蛭生物活性物质对心血管疾病就如青霉素对感染性疾病”但现在以水蛭生物活性物质为主的制剂用于临床的较少，仅有俄罗斯在1993年允许水 蛭提取物——PIYAVIT——胶囊临床用于治疗动脉粥样硬化性冠心病、不稳定型心绞痛及血栓性静脉炎我国有着丰富的水蛭资源可以利用，其在传统的中医药学中是一种常用的活血化瘀药物，以水蛭药材为主制成的许多中成药在市场上流行但对水蛭生物活性物质的研究及应用在我国还未见本发明所应用的水蛭——菲牛蛭，为医蛭科牛蛭属的吸血水蛭，广泛分布在我国的海南、广东、广西、福建及云南等地，是当地稻田的害虫之一菲牛蛭的临床应用，不仅为临床提供有效的预防和治疗心血管疾病的药物，而且除害为利，保护农作物生产菲牛蛭生物活性物质的研究，BIOPHARM公司(EP6373767，1990)纯化出抗凝血酶的水蛭素类物质；但该发明水蛭素类物质使用有机溶剂丙酮提取，分离、纯化工艺复杂，为单一活性成分，活性虽然较高，但收率极低，难以工业化生产，无法满足临床需要HOFMAN等(WO007221，2001)纯化出透明质酸酶(MANILLASE)；该发明物质也为单一活性成分，制备工艺复杂，含量极低，无法进行工业化生产，不能满足临床需要而以生物活性物质——菲牛蛭提取物的临床应用，未见任何报道综上所述，目前还未见到有用于血栓性心脑血管疾病的治疗和预防的菲牛蛭提取物本发明的提取物为菲牛蛭活体混合提取物，含有多种生物活性物质，除具有水蛭素、透明质酸酶生物活性外，还具有血栓溶解作用和抑制血小板聚集作用，以及抗感染作用等本发明的目的在于提供一种由菲牛蛭提取物生产的、用于治疗和预防血栓引起的心脑血管疾病、成本较低、效果显著的提取物及其生产方法，以及该提取物的应用本发明提供的菲牛蛭提取物，其特征是采用了菲牛蛭活体，或菲牛蛭活体冷冻融溶后采用以生理盐水提取的方法制备而成的菲牛蛭提取物菲牛蛭(HIRUDINARIA MANILLENSIS)采自海南、广西等地区，经鉴定而得，其特征为体两侧面各有一条橙黄色或红棕色的纵带腹面带灰色或灰绿色本发明提供的是一种菲牛蛭提取物的生产方法，采用生理盐水为溶剂，通过活体水蛭或活体冷冻融溶水蛭的匀浆，过滤，冷冻干燥等方法制得产品，其特征是采用如下步骤和方法鲜水蛭活体或活体冷冻融溶水蛭，在室温下加入适量生理盐水，匀浆，搅拌30-60分钟，过滤，滤液调PH值为7--8，保留待用；不溶物加入乙酸乙酯在PH＝3.5-4.5，溶解；加热到80℃，溶剂蒸发后，将剩余物溶解在PH＝7-8的生理盐水中，搅拌过滤，与上述保存待用的滤过液合并，冷冻干燥，收集冻干粉，即可该提取物的提取过程在室温下即可进行，提取液的PH值最佳为7-8为了保证生产的提取物的纯度和产品的质量，本发明在生产过程和产品检验过程中采用抗凝血酶活力分析法，计算水蛭素含量(ATU)，进行纯度和产品质量的监控本发明的菲牛蛭提取物，适用于血栓性心脑血管疾病的治疗和预防；用于血栓性心血管疾病，如心绞痛，心肌梗塞，冠状动脉粥样硬化等，治疗用量每日360MG提取物，分2-3次口服，预防量酌情减少用于血栓性脑血管疾病，如中风、偏瘫等，治疗用量每日360MG提取物，分2-3次口服，预防量可酌情减少，病情严重时可增至每日1200MG；用于周围血管疾病，如血栓静脉炎、脉管炎等，治疗用量每日360MG提取物，根据病情可增至每日600MG提取物另外，本提取物也可作为透皮吸收剂的成分外用于治疗皮肤疾病与现有技术相比，本发明具有明显的优点和显著的治疗效果首先本发明的动物来源于海南、广东、广西等菲牛蛭主产区，并按中国动物志——蛭纲对动物进行了鉴定第二，提取过程中以水为溶剂，无污染，生产成本低廉；第三，保存了各种生物活性成分(水溶性、脂溶性)；第四，产品具有显著的治疗效果，对血栓性心脑血管疾病不但具有显著的治疗作用，而且具有预防作用；第五，用生化提取方法引入中药的开发，适应于中药现代化的需要总之，本发明产品的特点1.药物来源有保证，2.提取方法简单易操作，3.生物活性成分效价高，4.治疗和预防效果显著，5.产品采用抗凝血酶活力分析法进行质量监控，效果稳定，6.可替代现有治疗药物，7.使用安全，无毒副作用