专利名称：基本不含香豆素的肉桂提取物和它的制备方法阴香是一种印度尼西亚本地生植物，经验上已知它作为药物的潜能。阴香通常被称作肉桂。肉桂类产品现在已经作为食品添加剂销售了一些时间，并表明治疗各种疾病。然而，尽管存在其治疗效果，近来已知大多数提取自肉桂植物的肉桂产品包含高水平的香豆素。香豆素为存在于包括肉桂、香豆、香草和大花菟丝子(草药)的几种植物中的天然苯并吡喃丙酮化合物。自从1882年来它已经众所周知，并作为香水生产中的一种组分而使用。对于医药用途，香豆素为抗凝剂生产中的前体。然而，香豆素可变得对肝脏有毒性，尤其是在长期使用后。欧洲安全局(ESA)建议的香豆素的一日最大可摄取量(TDI)为每千克体重0.1mg香豆素，这可终身每天服用而不会对健康构成的风险。迄今，市场上没有具有低水平的香豆素的阴香提取物。人们通常使用肉桂的替代来源，包含锡兰肉桂(Cinnamomum zeylanicum),因为它的香豆素水平低,并认为是安全的。但是，锡兰肉桂更昂贵，因而对于大型工业应用来说是不经济的。因此，存在开发基本不含香豆素的阴香提取物的需要。本发明教导了基本不含香豆素因而可长期安全服用的阴香提取物的制备方法
在优选的实施方式中，将解释本发明教导的主题和/或方案。说明的实施方式旨在用于理解本发明，不限制从本发明的实践中获得的其它实施方式的可能性。将从此楚的权利要求书的详细的元素或组合中实现本发明教导的主题和/或方案。如在实施方式中所述和在本申请中概括地说明的那样，为获得方案并与本发明的主题一致，本发明的第一个方面涉及通过萃取方法，然后基于在两种不同的不互溶的液体的相对溶解度的分馏方法而制备基本不含香豆素的阴香提取物的方法。这个方法目前已知为液-液萃取。本发明的第二个方面涉及作为单一组分或结合使用的基本不含香豆素的阴香提取物，其中，所述提取物中香豆素的水平等于或小于0.39mg香豆素/kg提取物。本发明第三个方面涉及药物组合物或制剂，包含作为单一组分或结合使用的基本不含香豆素的阴香提取物，其中，所述提取物中香豆素的水平等于或小于0.39mg香豆素/kg提取物。整合并构成本申请的说明书的一部分的以下了本发明的一个或几个实施方式。下面的附图用于解释本发明教导的原理。图1为香豆素标准物的薄层色谱。图2为使用水抽提的阴香粗提物和其使用氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷制备的基本不含香豆素的提取物的薄层色谱。注释:I为香豆素标准物，2和3为使用水抽提的阴香粗提物，4和5为使用氯仿分馏的阴香粗提物；6和7为使用正丁醇分馏的阴香粗提物；8和9为使用乙酸乙酯分馏的阴香粗提物；和10和11为使用正 己烷分馏的阴香粗提物。图3为使用甲醇抽提的阴香粗提物及其使用氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷制备的基本不含香豆素的提取物的薄层色谱。注释:I为香豆素标准物，2和3为使用甲醇抽提的阴香粗提物，4和5为使用氯仿分馏的阴香粗提物；6和7为使用正丁醇分馏的阴香粗提物；8和9为使用乙酸乙酯分馏的阴香粗提物；和10和11为使用正己烷分馏的阴香粗提物。图4为使用乙醇抽提的阴香粗提物及其使用氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷制备的极性提取物的薄层色谱。注释:I为香豆素标准物，2和3为使用乙醇抽提的阴香粗提物，4和5为使用氯仿分馏的阴香粗提物；6和7为使用正丁醇分馏的阴香粗提物；8和9为使用乙酸乙酯分馏的阴香粗提物；和10和11为使用正己烷分馏的阴香粗提物。图5为使用丙酮抽提的阴香粗提物及其使用氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和正己烷制备的基本不含香豆素的提取物的薄层色谱。注释:I为香豆素标准物，2和3为使用丙酮抽提的阴香粗提物，4和5为使用氯仿分馏的阴香粗提物；6和7为使用正丁醇分馏的阴香粗提物；8和9为使用乙酸乙酯分馏的阴香粗提物；和10和11为使用正己烷分馏的阴香粗提物。图6为标准香豆素化合物的高效液相色谱。图7为使用水抽提的阴香粗提物的高效液相色谱。图8为使用甲醇抽提的阴香粗提物的高效液相色谱。图9为使用乙醇抽提的阴香粗提物的高效液相色谱。图10为使用丙酮抽提的阴香粗提物的高效液相色谱。图11为使用水抽提并使用氯仿分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图12为使用甲醇抽提并使用氯仿分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图13为使用乙醇抽提并使用氯仿分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图14为使用丙酮抽提并使用氯仿分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图15为使用水抽提并使用正丁醇分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图16为使用甲醇抽提并使用正丁醇分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图17为使用乙醇抽提并使用正丁醇分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图18为使用丙酮抽提并使用正丁醇分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图19为使用水抽提并使用乙酸乙酯分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图20为使用甲醇抽提并使用乙酸乙酯分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图21为使用乙醇抽提并使用乙酸乙酯分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图22为使用丙酮抽提并使用乙酸乙酯分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图23为使用水抽提并使用正己烷分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图24为使用甲醇抽提并使用正己烷分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图25为使用乙醇抽提并使用正己烷分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。图26为使用丙酮抽提并使用正己烷分馏的基本不含香豆素的阴香提取物的高效液相色谱。


然后，为了减少粗提物中香豆素的含量，使用有机溶剂通过液-液萃取(LLE)基于相对溶解度分馏浓缩物，所述有机溶剂包括但不限于氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和/或正己烷。粗提物与分馏溶剂的比例为大约1:1至1: 2。轻轻振荡混合物以避免形成乳化。重复进行LLE直到阴香粗提物基本不含香豆素。用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对香豆素的含量进行分析。以后将进一步详细解释TLC和HPLC。最后，干燥基本不含香豆素的阴香提取物。B.使用醇类的抽提方法并从中去除香豆素 或者，还可通过使用醇类的抽提方法制备根据本发明教导的基本不含香豆素的阴香提取物。香豆素易于溶于醇类，导致基于醇类的阴香提取物包含高水平的香豆素。根据本发明的教导使用的醇类包括但不限于甲醇、乙醇和丁醇。优选乙醇和甲醇。使用醇的抽提方法开始于研磨阴香的任何部分，优选地树皮部分；然后，在5 15倍于原料的体积的乙醇或甲醇中浸溃I 2小时。在这个实施例中，水中的醇含量不超过70%。进行过滤方法以获得滤出液，然后通过蒸发滤出液而浓缩以达到在40 IOOcp范围内的粘度。用具有锭子#61的Brookfields DV-E-粘度计在27°C、IOOrpm下测量浓缩物的粘度2分钟。因而获得阴香粗提物。然后，为了减少粗提物中香豆素的含量，使用有机溶剂通过液-液萃取(LLE)分馏浓缩物，所述有机溶剂包括但不限于氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和/或正己烷。粗提物与分馏溶剂的比例为大约1:1至1: 2。轻轻振荡混合物以避免形成乳化。重复进行LLE直到粗提物基本不含有香豆素。用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对香豆素的含量进行分析。然后，干燥基本不含香豆素的阴香提取物。
C.使用丙酮的抽提方法和从中去除香豆素
再或者，还可通过使用丙酮的抽提方法制备根据本发明教导的基本不含香豆素的阴香提取物。
该抽提方法开始于研磨阴香植株的任何部分，优选树皮部分，然后在5 15倍于原料的体积的丙酮中浸溃I 2小时。在这个实施例中，所用的水中丙酮含量不超过70%。进行过滤方法以获得滤出液，然后通过蒸发滤出液来浓缩以达到在40 lOOcps范围内的粘度。用具有锭子#61的Brookfields DV-E-粘度计在27°C、IOOrpm下测量浓缩物的粘度2分钟。因而获得阴香粗提物。
然后，使用有机溶剂通过液-液萃取(LLE)分馏浓缩物，所述有机溶剂包括但不限于氯仿、正丁醇、乙酸乙酯和/或正己烷。粗提物与分馏溶剂的比例为大约1:1至1: 2。轻轻振荡混合物以避免形成乳化。重复进行LLE直到阴香粗提物基本不含香豆素。用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对香豆素的含量进行分析。与使用水和醇类的抽提方法相似，然后干燥基本不含香豆素的阴香提取物。
D.用薄层色谱(TLC)分析香豆素的含暈
进行这个实验以确定阴香提取物的所含之物基本不含香豆素。在薄层色谱(TLC)板上分析如上所述从几种不同的抽提方法中获得的阴香提取物。制备浓度为4000ppm的粗提物和基本不含香豆素的阴香提取物，并在相同的浓度与香豆素标准物相比较。使用甲苯和乙酸乙酯(93:7)作 为流动相进行洗脱。然后在254nm和366nm的UV下及可见光下观察层析图。
标准香豆素化合物的点在0.42的Rf处显示。图4、5和6中的每个的线2和3显示只有在液-液萃取分馏前制备的粗提物具有与标准香豆素化合物相同的Rf。这可在254nm的UV观察的洗脱液中清楚地看到。另一方面,如图4、5和6中的每个的线4 11所示，作为使用液-液萃取的分馏方法的产物的基本不含香豆素的阴香提取物在表示香豆素化合物的位点的Rf0.42附近未显示出任何点。这表明根据本发明教导制备的阴香提取物基本不含香豆素。
E.用高效液相色谱(HPLC)分析香豆素的含暈
用具有检测器光电二极管阵列Alliance2889的高效液相色谱(HPLC)Alliance2695进行分析，以定量地确定在基本不含香豆素的阴香提取物中香豆素的含量。
干燥基本不含香豆素的阴香提取物，然后在HPLC中分析。在这个分析中，制备浓度为4000ppm的粗提物和基本不含香豆素的阴香提取物，并与50ppm浓度的香豆素标准物相比较。使用水:乙腈(60:40)的流动相进行分析过程,水:乙腈(60:40)的流动相可在274nm下在12分钟的滞留时间处观察到。
结果显示标准香豆素化合物的峰可在5.099的滞留时间处看到。从使用水、醇类和丙酮的抽提方法中获得的阴香粗提物显示出代表香豆素化合物的峰。具体地，如图7所示，从水抽提中获得的粗提物显示在约5.012分钟处的峰。从醇类抽提中获得的粗提物中，对于乙醇显示为大约5.012分钟处及对于甲醇显示为5.007分钟处的峰。从丙酮抽提获得的粗提物显示大约5.011分钟的峰。
与该发现相反，根据本发明的教导，已经使用有机溶剂氯仿或正丁醇或乙酸乙酯和/或正己烷分馏的阴香提取物未显示表示香豆素的任何峰。参看图13 26。因此，根据本发明的教导制备的阴香提取物基本不含香豆素。
通过比较已知浓度(50ppm)的香豆素标准物的峰面积与在与香豆素标准物的同样滞留时间显示的粗提物及基本不含香豆素的提取物的峰面积，可计算粗提物和基本不含香豆素的提取物中香豆素的浓度。
表I根据本发明的教导制备的阴香提取物中香豆素的含量


一种药物组合物，包含源自肉桂的基本不含香豆素的提取物。它的制备方法包括若干步骤研磨原料，通过用第一溶剂浸渍而对前面步骤的原料以获得阴香粗提物进行抽提，通过使用第二溶剂液-液萃取而分馏前面步骤中所抽提的原料以获得基本不含香豆素的提取物，其中所述第二溶剂与所述第一溶剂不互溶，并且可选择地，干燥所述基本不含香豆素的提取物。所述药物组合物包含基本不含香豆素的提取物作为单一组分的或包含基本不含香豆素的提取物与合适的药物赋形剂的组合，以制备可安全地每天食用并长期使用的药物组合物。