专利名称:IL-1ra-Fcε融合基因及其编码的蛋白在治疗过敏性鼻炎方面的应用的制作方法鼻腔炎性细胞浸润以及血清中IgE浓度升高是过敏性鼻炎主要的指征。抑制IgE 水平升高及抗炎治疗是过敏性鼻炎治疗的研究热点。研究证实,IL-Ira作为有效的抗炎因 子,具有治疗和预防过敏性鼻炎的作用,但IL-Ira分子半衰期较短,在一定程度上限制了 它的广泛应用。鼻炎发病过程中,IgE与其高亲和力受体的结合是触发肥大细胞、嗜碱性粒 细胞脱颗粒,是导致发病的关键因素。阻断IgE与其高亲和力受体的结合是治疗过敏性鼻 炎的有效靶点之一。白细胞介素-I(IL-I)为体内作用较强的致炎症细胞因子之一,在过敏性鼻炎发 生、发展过程中具有重要作用。IL-Ira作为天然的IL-I拮抗剂,它能在受体水平拮抗IL-I 的作用。但由于IL-Ira在体内的半衰期极短,且需要大量的IL-Ira才能消除IL-I的作 用,所以必须长期大剂量的应用才能达到治疗的效果,此点在IL-Ira治疗类风湿性关节炎 中得到证实,长期的全身大剂量用药将产生强烈的不良作用。IgE与其受体结合是诱发过敏性鼻炎的关键性因素,阻断IgE与其高亲和力受体 的结合是治疗过敏性鼻炎的有效靶点之一,IgE分子恒定区Fc3-4具有与IgE高亲和力受 体的结合的特点。本研究室利用基因工程技术将IL-Ira和IgE分子恒定区Fc3_4基因重 组在一起,获得了可阻断IgE与其高亲和力受体结合,又可拮抗IL-I的生物学效应并延长 IL-Ira的半衰期的具有双功能的融合蛋白分子。本发明将IgE分子的Fc3_4区与IL-Ira构建成融合分子,利用该融合基因及其所 编码的蛋白,以分别直接给药的方式治疗过敏性鼻炎。滴注的裸基因表达载体可以在鼻腔 内表达,表达的重组蛋白不仅能拮抗IL-I的炎性作用,其中融合的Fc片段还可封闭IgE的 受体,抑制肥大细胞、嗜碱性粒细胞脱颗粒,从而达到治疗过敏性鼻炎的目的;利用纯化制备的重组IL-Ira-Fc ε蛋白直接滴注也可获得同样的治疗效果。
本发明的目的在于提供IL-Ira-Fc ε融合基因在治疗过敏性鼻炎方面的应用。本发明的目的还在于提供IL-Ira-Fc ε融合基因编码的蛋白在治疗过敏性鼻炎 方面的应用IL-Ira-Fc ε融合基因在治疗过敏性鼻炎方面的应用,其特征在于,将构建的融合 基因表达载体与转染试剂配置成混悬液,直接滴入鼻腔,对过敏性鼻炎进行治疗,滴入周期 为每天一次,连续滴鼻7天。所述转染试剂为脂质体2000,用量为10 100 μ L/只大鼠;所述IL-lra-Fc ε融合基因载体的用量为10 100 μ g/只大鼠。 IL-Ira-Fc ε融合蛋白在治疗过敏性鼻炎方面的应用,其特征在于,将纯化的 IL-Ira-Fc ε融合蛋白用PBS缓冲液稀释至0. 1 5mg/ml,直接滴入鼻腔,治疗过敏性鼻 炎,滴入周期为每天一次,连续滴鼻7天。所述IL-Ira-Fc ε融合蛋白的用量为0. 2mg/只大鼠。所述纯化的IL-Ira-Fc ε融合蛋白为经过S300分子筛柱和S_s印harose阳离子 层析柱纯化并逐步透析复性的蛋白[2]。PBS 缓冲液成分为 NaCl 1. 37mol/L、KCl 27mmol/L、Na2HPO4IOOmmo 1/L、KH2PO4 20mmol/L, pH 为 7· 5。本发明的有益效果本发明的IL-Ira-Fc ε融合基因编码的蛋白即能拮抗IL-I 的炎性作用,还可抑制肥大细胞、嗜碱性粒细胞脱颗粒,从而达到治疗过敏性鼻炎的目 的。可直接利用构建的IL-Ira-Fc ε真核表达载体滴鼻治疗过敏性鼻炎;利用纯化的 IL-Ira-Fc ε融合蛋白直接滴鼻也可治疗过敏性鼻炎。图1为大鼠鼻腔病理HE染色嗜酸性粒细胞计数;其中,A-正常组、B-模型组、C-IL-Ira-Fc ε基因治疗组、D-IL-lra-Fc ε蛋白治 疗组;图2为大鼠鼻腔转染荧光检测;其中,A-对照组、B-IL-Ira-Fc ε基因治疗2天后、C-IL-lra-Fc ε基因治疗7天后O
本发明公开了属于生物医药领域的IL-1ra-Fcε融合基因及其编码的蛋白在治疗过敏性鼻炎方面的应用。本发明是将构建的IL-1ra-Fcε融合基因表达载体按照一定的浓度配制成混悬液,直接滴入鼻腔治疗过敏性鼻炎;或者将纯化的IL-1ra-Fcε融合蛋白用PBS缓冲液稀释至一定的浓度,滴入鼻腔,治疗过敏性鼻炎。本发明中,IL-1ra-Fcε融合基因编码的蛋白能拮抗IL-1的炎性作用、抑制肥大细胞、嗜碱性粒细胞脱颗粒,从而达到治疗过敏性鼻炎的目的。
IL-1ra-Fcε融合基因及其编码的蛋白在治疗过敏性鼻炎方面的应用制作方法
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