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β-甘露聚糖酶及其编码基因和应用制作方法

  • 专利名称
    β-甘露聚糖酶及其编码基因和应用制作方法
  • 发明者
    张珂卿, 罗科
  • 公开日
    2012年7月4日
  • 申请日期
    2011年12月31日
  • 优先权日
    2011年12月31日
  • 申请人
    张珂卿, 罗科
  • 文档编号
    C12N9/42GK102533700SQ201110459930
  • 关键字
  • 权利要求
    1.一种蛋白质,为如下(a)或(b)(a)序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;(b)序列表中序列1自N末端第2至605位氨基酸残基组成的蛋白质2.编码权利要求1所述蛋白质的基因3.根据权利要求2所述的基因,其特征在于所述基因为如下1)-4)中任一所述的DNA 分子1)序列表中序列2自5’末端起第4至1815位核苷酸所示的DNA分子;2)序列表中序列2所示的DNA分子;3)在严格条件下与1)或2、所示的DNA分子杂交且编码所述蛋白的DNA分子;4)与1)或2)的基因具有90%以上的同源性且编码所述蛋白的DNA分子4.含有权利要求2或3所述基因的表达盒、重组表达载体、转基因细胞系或重组菌5.根据权利要求4所述的重组表达载体,其特征在于所述重组表达载体为如下(I) 或(II)或(III)(I)在PUC18载体的多克隆位点间插入所述基因得到的重组表达载体;(II)在质粒PDG148的多克隆位点间插入所述基因得到的重组表达载体;(III)在质粒PDG148的多克隆位点插入特异DNA片段得到的重组表达载体;所述特异 DNA片段中,由序列表的序列5所示的p43启动子启动融合蛋白编码基因的表达;所述融合蛋白编码基因自5’末端至3’末端方向依次包括序列表的序列6自5’末端第7至167位核苷酸所示DNA的反义DNA和编码序列表的序列1所示蛋白质的基因6.根据权利要求4所述的重组菌,其特征在于所述重组菌为如下(IV)或(V)(IV)将(I)所述重组表达载体导入大肠杆菌得到的重组菌;(V)将(II)或(III)所述重组表达载体导入枯草芽孢杆菌得到的重组菌7.一种制备甘露聚糖酶的方法,是培养权利要求4或6所述重组菌,得到β-甘露聚糖酶8.权利要求7所述方法制备得到的甘露聚糖酶9.权利要求1所述蛋白作为β-甘露聚糖酶的应用10.如权利要求9所述的应用,其特征在于所述应用中的反应条件为ρΗ5-9, 37-65 °C
  • 技术领域
    本发明涉及一种β -甘露聚糖酶及其编码基因和应用
  • 背景技术
  • 专利详情
  • 全文pdf
  • 权力要求
  • 说明书
  • 法律状态
专利名称:β-甘露聚糖酶及其编码基因和应用的制作方法β-甘露聚糖酶(EC3.3. 1.78)是一类能够水解甘露聚糖,葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及半乳葡萄甘露聚糖的内切酶。它以内切的方式降解β_1,4糖苷键,降解产物的非还原末端为甘露糖。甘露聚糖是一种半纤维素的主要成分,在植物中广泛存在。半乳甘露聚糖是大量存在于植物种子中的半纤维素。例如,我国西南地区大量种植的魔芋的主要成份为葡萄甘聚糖,我国饲料中大量应用的玉米和大豆也含有大量的甘露聚糖(占非淀粉多糖的比例高达11. 7%和22. 7% )。畜禽和鱼类本身并不产生甘露聚糖酶,因此需添加外源的甘露聚糖酶帮助分解,以促进动物对饲料的能量利用率。目前,甘露聚糖酶已广泛应用于医药、食品、饲料、造纸、纺织、印染、洗涤以及石油开采等工业领域。例如利用甘露聚糖酶处理魔芋粉,生产低聚甘露糖,大大提高了魔芋粉的附加值,这种低聚甘露糖是一种功效显著的双歧因,具有减少有毒代谢产物的产生、抑制病原菌的生长、保护肝脏、提高免疫力的生理机能。在饲料添加剂方面,甘露聚糖酶可以提高动物对饲料的能量利用率,有效阻断细菌和寄生虫对肠道的侵害、提高动物的体重。甘露聚糖酶广泛存在于植物和微生物中,特别是许多真菌和细菌均分泌甘露聚糖酶。工业中应用的甘露聚糖酶大多产自Trichederma和Apergiuvs两个属的真菌。这些真菌产生的甘露聚糖酶在酸性条件下活性最大(PH 3-5.5),最适湿度在40-501,往往不耐 70°C以上的高温。但在许多工业应用(例如饲料),经常要求酶能够耐受一定的高温(70°C 以上),因此需要寻找一些适应更广泛生理条件的甘露聚糖酶。
本发明的目的是提供一种甘露聚糖酶及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质,为如下(a)或(b)(a)序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;(b)序列表中序列1自N末端第2至605位氨基酸残基组成的蛋白质。为了所述蛋白质便于纯化,可在所述蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1 所示的标签。表1标签的序列标签残基序列Poly-Arg5-6(通常为5个)RRRRR本发明公开了一种β-甘露聚糖酶及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质为序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明提供的蛋白质具有β-甘露聚糖酶活性,且适用范围广,在37-65℃和pH5-9都有较高的活性。本发明提供的重组菌能高效表达序列1所示的蛋白质,并将蛋白质分泌到胞外,使得蛋白的纯化变得简单和经济。本发明提供的蛋白质可以作为饲料添加剂。本发明对于工业生产和动物养殖具有重大的应用前景。


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