专利名称：微生物发酵制取植物蛋白小肽的方法目前将植物蛋白转化成植物蛋白小肽的方法主要是采用酶解法和微生物发酵法，但微生物发酵法更具有先进性和更多的优点，微生物发酵法是通过微生物的生化代谢反应将植物蛋白转化为小分子活性肽，条件温和，工艺先进，成本较低，且所得小肽没有苦味。 现代研究表明，小分子肽比等量的氨基酸具有更高的生物活性和营养价值。由于肽类的氨基酸不同，其功能及生物学效应也不同，肽类和氨基酸可以通过小肠绒毛上皮细胞几乎完全被吸收利用，进入到血液中，然后输入到动物或人体的各个部位，发挥其生物学功能，而蛋白质则必须通过消化后才能够被吸收。许多植物中含有丰富的蛋白质，如果不将其转化，其有效成份的利用率很低。植物蛋白小肽是一种小分子量生物物质，除了易消化吸收外，还具有多种生物学功能。植物蛋白小肽可用于医疗保健食品、运动营养食品、减肥食品、老年人营养食品、降血脂、降血压、降胆固醇产品、补钙产品、孕妇、哺乳期妇女和婴幼儿发育食品、学生和脑力劳动者食品的开发。植物蛋白小肽还可用于普通食品开发，如含肽咖啡、含肽酒、肽饮料、各类含肽面包糕点、肽酸奶、肽化妆护肤品、肽燕麦粥、肽酱油、肽方便面及肽果汁等等，植物蛋白小肽良好的兼容性使其作为主体或载体应用范围十分广泛。植物蛋白小肽还可用于蔬菜、花卉、中草药、烟草等经济作物及粮食作物的生长促进剂，它还是微生物生长繁殖良好的促进剂，可用于工业微生物发酵培养基的配制。目前，植物蛋白小肽更重要的是用于饲料工业，植物蛋白小肽的粗制品如果应用于动物饲养可以促进动物的生长发育、提高动物的免疫力，增强抗病能力，降低料肉比，增进和诱发动物食欲。用于断奶仔猪和保育猪可防止红白痢的发生，减少死亡率，促进动物肠道绒毛细胞的发育。用于虾的养殖可促进虾的快速生长，防治虾病的发生。用于奶牛的养殖可增加奶牛的产奶量和奶的质量。用于毛皮动物的养殖可使毛皮更加光亮。
本发明的目的在于提供一种微生物发酵制取植物蛋白小肽的方法。本发明的目的是这样实现的一种微生物发酵制取植物蛋白小肽的方法，以大豆柏、花生饼柏、棉籽饼柏、菜籽饼柏、玉米蛋白粉、小麦谷朊蛋白粉、大豆分离蛋白、大豆粉为原料，以其中一种或两种以上任意比例混合；先将原料粉碎至40目-100目，加水配制成重量百分比浓度为6% -20%，调整pH值为 5. 5-7. 5，然后在105°C -121°c进行灭菌10分钟-30分钟，冷却至30°C _40°C，按体积百分比为I. 0% -10. 0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种；然后放入发酵罐中发酵，发酵罐中通入无菌空气，进行搅拌发酵，搅拌转数60-200rpm，发酵时保持温度在30°C -40°C，发酵周期为18-96小时；发酵结束后，迅速将温度升至42°C -65°c，保持I. 5-5. 0小时；然后再将温度升至105°C _121°C进行高温灭活，高温灭活后，先进行离心分离除渣，上清液再浓缩至体积比为25% _40%，然后进行喷雾干燥制成粉末状植物蛋白小肽产品；其中所述的培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种通过斜面培养和三角瓶液体培养。所述的枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌L-B-05 (Bacillus subtilis L-B-05)。所述的斜面培养方法为以下为重量百分数，牛肉膏0. 1% -10.0%，蛋白胨0. 1% -10. 0%, NaCl 0. 1% -5. 0%，琼脂 I. 5% -2. 0%，水为溶剂，pH5. 5-7. 5 ;121°C灭菌20分钟，摆成斜面冷却，接种后30°C _37°C静置培养12-48小时，备用；三角瓶液体培养方法为以下为重量百分数，豆柏粉5.0% -15.0%，玉米浆0.5% -5. 0%, KH2PO4 0. 1% -5. 0%, MgSO4 0. 05% -2. 0%, NaCl 0. 1% -5. 0%，搅拌均匀，pH5. 5-7. 5 ； 105°C _121°C灭菌10-30分钟，冷却至25°C _45°C，接入经过斜面培养的枯草芽孢杆菌菌种，30°C -37°C摇床培养12-72小时，用于发酵罐接种。所述的离心分离除渣或用孔径为0. 1-10. 0微米的无机陶瓷膜过滤，再用732阳离子交换树脂和717阴离子交换树脂进行精制处理。所述的高温灭活后，或直接浓缩至体积比为25% _40%，然后进行喷雾干燥制成植物蛋白小肽粗制品。 本发明所采用的枯草芽孢杆菌L-B-05，分类命名枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期2005年5月8日，保藏编号CGMCCNo. 1367，地址北京市海淀区中关村北一条13号。本方法主要是通过微生物发酵作用将植物中的大分子蛋白转化为小分子活性肽的方法。其精制品可应用于食品、化妆品、保健品，粗制品可用于饲料功能强化添加剂、发酵工业的微生物培养基、植物生长促进剂等。本发明技术成熟，各项工艺参数可靠稳定，发酵条件温和，其最终产品质量稳定且具有明显的生物功能特性。先将大豆柏原料粉碎至60目，加水配制成重量百分比浓度为10%，调整pH值为
7.0，然后121°C灭菌20分钟，冷却至37°C，按体积百分比为10. 0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种。发酵罐中通入无菌空气，进行搅拌发酵，发酵前6小时，搅拌转数80rpm，发酵至6小时-24小时,搅拌转数150rpm,发酵至24小时后,搅拌转数IOOrpm,这期间不断调整无菌空气的通气量。发酵时温度控制在37°C，发酵周期为36小时。发酵结束后，迅速将温度升至42°C，保持3. 0小时。然后再将温度升至115°C进行高温灭活，高温灭活后，先进行离心分离除渣或精制，上清液再浓缩至体积比为25%，然后进行喷雾干燥制成粉末状大豆蛋白小肽产品(粗制品可不经除渣直接喷雾干燥制粉)。实施例二斜面培养基的制备和菌种培养、三角瓶液体培养基的制备和菌种培养同实例一。发酵罐培养基的制备和发酵控制 先将菜籽柏原料粉碎至60目，加水配制成重量百分比浓度为12%，调整pH值为
7.2，然后121°C灭菌20分钟，冷却至35°C，按体积百分比为10. 0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种。发酵罐中通入无菌空气，进行搅拌发酵，发酵前6小时，搅拌转数80rpm，发酵至6小时-24小时,搅拌转数150rpm,发酵至24小时后,搅拌转数IOOrpm,这期间不断调整无菌空气的通气量。发酵时温度控制在35°C，发酵周期为48小时。发酵结束后，迅速将温度升至42°C，保持2. 0小时。然后再将温度升至115°C进行高温灭活，高温灭活后，先进行离心分离除渣或精制，上清液再浓缩至体积比为25%，然后进行喷雾干燥制成粉末状菜籽柏蛋白小肽产品(粗制品可不经除渣直接喷雾干燥制粉)。实施例三斜面培养基的制备和菌种培养、三角瓶液体培养基的制备和菌种培养同实例一。发酵罐培养基的制备和发酵控制称取玉米蛋白粉，加水配制成重量百分比浓度为12%，调整pH值为7.2，然后121 °C灭菌20分钟，冷却至37°C，按体积百分比为8. 0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种。发酵罐中通入无菌空气，进行搅拌发酵，发酵前6小时,搅拌转数80rpm,发酵至6小时-24小时,搅拌转数150rpm,发酵至24小时后,搅拌转数IOOrpm,这期间不断调整无菌空气的通气量。发酵时温度控制在37°C，发酵周期为32小时。发酵结束后，迅速将温度升至45°C，保持I. 0小时。然后再将温度升至115°C进行高温灭活，高温灭活后，先进行离心分离除渣，精制，上清液再浓缩至体积比为28 %，然后进行喷雾干燥制成粉末状玉米蛋白小肽产品(粗制品可不经除渣直接喷雾干燥制粉)。实施例四一种微生物发酵制取植物蛋白小肽的方法，以大豆柏、花生饼柏、棉籽饼柏、菜籽饼柏、玉米蛋白粉、小麦谷朊蛋白粉、大豆分离蛋白和大豆粉任意比例混合为原料；先将原料粉碎至40目，加水配制成重量百分比浓度为6 %，调整pH值为5. 5，然后在105°C进行灭菌30分钟分钟，冷却至30°C，按体积百分比为I. 0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种；然后放入发酵罐中发酵，发酵罐中通入无菌空气，进行搅拌发酵，搅拌转数200rpm，发酵时保持温度在40°C，发酵周期为96小时；发酵结束后，迅速将温度升至65°C，保持5. 0小时；然后再将温度升至121°C进行高温灭活，高温灭活后，直接浓缩至体积比为40 %，然后进行喷雾干燥制成植物蛋白小肽粗制品。其中所述的培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种通过斜面培养和三角瓶液体培养;所述的枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌L-B-05 (Bacillus subtilis L-B-05)。所述的枯草芽孢杆菌经斜面培养方法为以下为重量百分数，牛肉膏0. 1%，蛋白胨0. I %, NaCl 0. 1%，琼脂1.5%，水为溶剂，？册.5;1211灭菌20分钟，摆成斜面冷却，接种后30°C静置培养48小时，备用；三角瓶液体培养方法为以下为重量百分数，豆柏粉5.0%，玉米浆0.5%，KH2PO4O. I %, MgSO4O. 05%, NaCl 0. I %，搅拌均匀，pH55. 5 ;105°C 灭菌 10 分钟，冷却至25°C，接入经过斜面培养的枯草芽孢杆菌菌种，30°C摇床培养72小时，备用。
实施例五一种微生物发酵制取植物蛋白小肽的方法，其特征是以大豆柏、花生饼柏、棉籽饼柏、菜籽饼柏、玉米蛋白粉、小麦谷朊蛋白粉、大豆分离蛋白和大豆粉任意比例混合为原料；先将原料粉碎至100目，加水配制成重量百分比浓度为20%，调整pH值为7. 5，然后在105°C进行灭菌10分钟，冷却至30°C，按体积百分比为10. 0%接入培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种；然后放入发酵罐中发酵，发酵罐中通入无菌空气，进行搅拌发酵，搅拌转数60rpm，发酵时保持温度在30°C，发酵周期为18小时；发酵结束后，迅速将温度升至42°C，保持I. 5小时；然后再将温度升至105°C进行高温灭活，高温灭活后，用孔径为0. l-io. 0微米的无机陶瓷膜过滤，再用732阳离子交换树脂和717阴离子交换树脂进行精制处理，得上清液再浓缩至体积比为25%，然后进行喷雾干燥制成粉末状植物蛋白小肽产品；其中所述的培养成熟的枯草芽孢杆菌液体菌种通过斜面培养和三角瓶液体培养;所述的枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌L-B-05 (Bacillus subtilis L-B-05)；所述的枯草芽孢杆菌经斜面培养方法为以下为重量百分数，牛肉膏10.0%，蛋白胨10. 0 %，NaCl 5.0%,琼脂2.0%，水为溶剂，pH7. 5 ；121°C灭菌20分钟，摆成斜面冷却，接种后37°C静置培养12小时，备用；三角瓶液体培养方法为以下为重量百分数，豆柏粉15.0%，玉米浆5. OKKH2PO4
5.0%, MgSO4 2. 0%, NaCl 5. 0%，搅拌均匀，pH7. 5 ;121°C灭菌 30 分钟，冷却至 45°C，接入经过斜面培养的枯草芽孢杆菌菌种，37°C摇床培养12小时，备用。实施例六下标为试验检验记录直喷3100KG 塔粉 1250KG 扫塔粉 850KG 合计5200 得率80. 00%


本发明提供的是一种微生物发酵制取植物蛋白小肽的方法，本方法是以大豆粕、花生饼粕、棉籽饼粕、菜籽饼粕、玉米蛋白粉、小麦谷朊蛋白粉、大豆分离蛋白、大豆粉等为原料，以其中任何一种或任何两种以上原料进行混合，通过微生物发酵作用将植物中的大分子蛋白分解为小分子活性肽，然后通过喷雾干燥制成粉末状植物蛋白小肽产品。其精制品可应用于食品、化妆品、保健品，粗制品可用于饲料功能强化添加剂、发酵工业的微生物培养基、植物生长促进剂等。本发明技术成熟，各项工艺参数可靠稳定，发酵条件温和，其最终产品质量稳定且具有明显的生物功能特性。