专利名称：固公果根提取物的鉴别方法中药固公果根是蔷薇科蔷薇属植物固公果Rose odorata Sweet var. gigantea(Coll. etHemsl. )Rehd. et Wils的根，性平、味酸，具有涩肠止泻的功效，能迅速杀 死致病菌，保护消化道黏膜，加快肠壁血液循环，加快溃烂肠黏膜愈合，常用于治疗腹泻、菌 痢等疾病[1]，是一味应用历史悠久的彝族民间药材。同时该药材也是云南曲靖制药厂生产 治疗肠炎腹泻的中成药“肠舒片”原料。固公果根源于彝族民间验方，对各种腹泻均有很 好的治疗效果。但是对于该中药提取物及其产品制剂的质量控制方法相对简单，并不能完 全反映该药材以及该中成药的产品质量。只是按照1974年云南地方药品标准(滇Q/WS 269-1974)中关于固公果根药材的检测方法项下和目前国家药品监督管理局制定的肠舒片 试行标准项下要求进行固公果根药材中鞣质的定性定量鉴别。其质量控制方法的不全面性 及生产过程中的不稳定性导致各批次产品之间质量可能会出现差异，很难说能从通过“量” 达到控制“质”的目的。且如果仅通过单一指标来说明其特殊的药理活性，专属性较差，但 鉴于实际又不可能对各种成分进行一一测定，因此，需要一种快速、相对准确的固公果根提 取物及其制剂的鉴别方法，用以科学、有效地鉴别并控制中药固公果根提取物及其制剂的 质量。参考文献[1]任洁，何广新.苗药-固公果阿江制剂-“肠康胶囊”的质量标准研究.中国 民族民间医药杂志，1998，31 41.发明内容本发明的目的是克服现有技术中的不足，提供一种固公果根提取物的鉴别方法。本发明的技术方案概述如下—种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下(a)供试品溶液的制备精密称取固公果根药材适量，加入含有盐酸的体积分数 为0%-100%的甲醇水溶液、含有盐酸的体积分数为 95%的乙醇水溶液、体积分数为 0% 2%的盐酸水溶液、体积分数为 100%甲醇水溶液或体积分数为 95%的 乙醇水溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的4 12倍，振摇后浸泡提 取2 12h，提取1-3次，过滤，合并提取液，在25 60°C加热减压干燥至干，得到固公果根 提取物；用体积分数为0% 100%的甲醇水溶液或体积分数为0% 100%的乙醇水溶液 溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg 20mg/mL的供试品溶液；所述含有盐酸的体积分数 为0% -100%的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0. 2%;所述含有盐酸的体积分数为 95%的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0. 2% ；4
(b)参照物溶液的制备精密称取对照品儿茶素，用体积分数为0% 100%甲醇 水溶液或体积分数为0% 100%乙醇水溶液溶解稀释，配置成0. Olmg 5mg/mL的供试 品溶液为参照物溶液；
(c)色谱条件采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液 进行梯度洗脱；流速0. 7mL/min ；检测波长为260-320nm ；色谱柱温度为25_35°C ；以儿茶素 计算，理论塔板数为5000-20000 ；
(d)测定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱 法测定，紫外检测器或者二极管阵列检测器进行检测，制定固公果根提取物酚酸类成分指 纹图谱；
所述固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱中，有二十个共有色谱峰，以参照物儿 茶素的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对 峰面积，上述二十个共有色谱峰分别是1号峰平均相对保留时间RRT为0. 43士0. 01，相 对峰面积为13%，2号峰平均相对保留时间RRT为0. 88士0. 01，相对峰面积为63%，3号 峰平均相对保留时间RRT为0. 93士0. 01，相对峰面积为61 %，4号峰平均相对保留时间 RRT为0. 97士0. 01，相对峰面积为75%，5号峰平均相对保留时间RRT为1. 00，相对峰面 积为100%，6号峰平均相对保留时间RRT为1.04士0.01，相对峰面积为118%，7号峰平 均相对保留时间RRT为1. 22士0. 01，相对峰面积为21%，8号峰平均相对保留时间RRT为 1. 26士0. 01，相对峰面积为48%,9号峰平均相对保留时间RRT为1. 28士0. 01，相对峰面积 为25%，10号峰平均相对保留时间RRT为1.四士0.01，相对峰面积为66%，11号峰平均 相对保留时间RRT为1. 30士0. 01，相对峰面积为16%，12号峰平均相对保留时间RRT为 1. 39士0. 01，相对峰面积为40%,13号峰平均相对保留时间RRT为1. 41 士0. 01，相对峰面 积为50%，14号峰平均相对保留时间RRT为1. 52士0. 01，相对峰面积为32%，15号峰平 均相对保留时间RRT为1. 53士0. 01，相对峰面积为50%，16号峰平均相对保留时间RRT为 1. 55士0. 01，相对峰面积为66%, 17号峰平均相对保留时间RRT为1. 62士0. 01，相对峰面 积为98%，18号峰平均相对保留时间RRT为1. 75士0. 01，相对峰面积为135%，19号峰平 均相对保留时间RRT为1. 78士0. 01，相对峰面积为73%，20号峰平均相对保留时间RRT为 1. 80士0. 01，相对峰面积为98%，所述二十个色谱峰峰面积的相似度不小于0. 65 ；
第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图 谱；
第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸 酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。
所述第一步(a)供试品溶液的制备优选为精密称取固公果根药材50g，加入含有 盐酸的体积分数为O % -100 %的甲醇水溶液或含有盐酸的体积分数为1 % 95 %的乙醇水 溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的10倍，振摇后浸泡提取10h，提取 2次，过滤，合并提取液，在25 60°C加热减压回收溶剂，浓缩后喷雾干燥，得到固公果根提 取物；用甲醇或乙醇溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg 15mg/mL的供试品溶液；所述 含有盐酸的体积分数为0% -100%的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0. 1%;所述含 有盐酸的体积分数为 95%的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0. 2%。
所述第一步(b)参照物溶液的制备为精密称取对照品儿茶素，用甲醇溶解稀释，配制成lmg/mL的供试品溶液为参照物溶液。
固公果根提取物标准指纹图谱中1号峰为没食子酸、2号峰为原花青素Bl、3号 峰为表没食子酸儿茶素、4号峰为原花青素B3、5号峰为儿茶素，6号峰为绿原酸、10号 峰为表儿茶素、13号峰为没食子儿茶素没食子酸酯、14号峰为(J-fisetinidol-Ga， 8)-(-)-catechin、16 号峰为(-)-fisetinidol-G α，8)-(-)-epicatechin、17 号 峰为鞋花酸、18 号峰为(+)_guibourtinidoU4a j)-(-)-catechin、19 号峰为 (+)-guibourtinidol-(4 α ,8)-(-)-epicatechin>20 号山条为 2,4,7,9-tetrahydroxy benzopyrano5,4,3-cdebenzopyran-5,10_dioneo
步骤(c)中乙腈和冰醋酸的水溶液由A相和B相组成，按质量比A相组成为冰醋 酸水=2 98，按质量比B相组成为乙腈水冰醋酸=80 19.6 0. 4，所述梯度洗脱程序如下


本发明公开了一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱供试品溶液的制备；参照物溶液的制备；采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；以儿茶素计算，理论塔板数为5000-20000；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，用液相色谱法测定，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。本发明为完整、准确评价固公果根提取物的质量提供了新的方法和手段。