一种甲氨喋呤前药及其胶束制剂和制备方法[0002]甲氨喋呤(MTX)是一种叶酸类抗代谢药剂，能与肿瘤细胞表面的叶酸受体进行结合起到很好的靶向作用，常用于各种恶性肿瘤治疗，也是常用的抗风湿药物。MTX在药用上也有许多不利之处，治疗脑部肿瘤时很少量能通过血脑屏障。本品可增加肝肾功能毒性，由于药物作用机理是通过对二氢叶酸还原酶的抑制而达到阻碍肿瘤细胞DNA的合成，所以对正常的生物细胞也有药物作用，毒副作用较大。[0003]经过两亲性高分子修饰的甲氨蝶呤前药具有提高药物的靶向性和药物的生物利用度，减少药物的毒副作用等优点，而且自组装形成的纳米粒子作为药物载体进入体内，可以有效地减少人体网状内皮系统(RES)巨噬细胞的吞噬。作为纳米级的粒子能穿越细胞间隙，可通过人体最小的毛细血管及血脑屏障(BBB)，并被细胞组织吸收，纳米粒子药物载体可以运载药物到达靶向部位控制药物释放、减少药物用量、增强药物疗效并降低药物毒性。同时，纳米粒子药物系统可以避免药物活性丧失，有利于药物的贮藏和运输。因为纳米粒子的诸多优点，使其成为一种很有前途的药物新剂型，故在癌症的治疗方面备受关注。[0004]目前关于高分子前药的报道越来越多，应用越来越广泛，本发明人之前申请的中国专利申请号为:201310239345.8，名称为:一种甲氨喋呤靶向纳米粒缓释制剂及其制备方法，其是将甲氨蝶呤化学交联到高分子载体上，但该载体是MPEG-PLA，该制剂中的靶向纳米粒子粒径较大，一般大于200nm，属于实体粒子，该粒子释药非常缓慢，比较适合作为肿瘤局部注射用，静脉注射应用受到一定的限制。
[0005]本发明所要解决的技术问题是:提供一种利用柔性分子载体制备的粒径小，适合作为静脉用靶向肿瘤制剂的甲氨喋呤前药及其胶束制剂和制备方法。[0006]为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:提供一种甲氨喋呤前药，其原料包括甲氨喋呤原料药和载体材料，所述载体材料为dspe-peg-nh2。[0007]本发明的另一技术方案为:提供一种甲氨喋呤前药靶向胶束制剂的制备方法，包括如下步骤:
[0008]I)将DSPE-PEG-Nh2溶于有机溶剂中，得溶液A ；MTX溶于DMSO水溶液中，得到溶液B ;在溶液B中加入TEA和交联剂，所述交联剂为DCC和NHS，将溶液A、B混合，在氮气保护下反应12h,得到溶液C ；
[0009]2)将步骤I)所得溶液C依次置于磷酸盐缓冲液和去离子水中透析去除杂质，透析液冻干得到MTX-PEG-DSPE化合物冻干品；
[0010]3)将步骤2所得MTX-PEG-DSPE化合物冻干品用有机溶剂溶解，通过超声乳化或透析法去除有机溶剂后冻干，消毒得MTX前药靶向胶束制剂。
[0011]本发明的又一技术方案为:提供一种上述的甲氨喋呤前药靶向胶束制剂的制备方法制备的甲氨喋呤前药靶向胶束制剂。
[0012]本发明解决了现有技术中甲氨喋呤靶向纳米粒子粒径较大，释药非常缓慢，只适合作为肿瘤局部注射用，静脉注射应用受到一定限制的技术问题。利用柔性分子载体(DSPE-PEG-Nh2)与MTX原料药化学健合制备MTX前药，然后进一步制成胶束，该胶束为柔性粒子，粒径在IOOnm左右，适合作为静脉用靶向肿瘤制剂，其静脉注射具有靶向性强、长循环和低毒性的特点，使其更容易达到肿瘤组织发挥药效。



[0013]图1为本发明实施例中DSPE-PEG-Nh2与MTX合成MTX-PEG-DSPE的简要示意图；
[0014]图2为本发明实施例中MTX-DSPE-PEG的核磁共振图谱，其中8.6,7.7,6.8是MTX的特征峰；
[0015]图3为本发明实施例中MTX-DSPE-PEG和载体材料DSPE-PEG-NH2的紫外及可见分光光谱；
[0016]图4为本发明实施例中MTX前药靶向胶束制剂的透射电镜照片，其标尺为200nm ；
[0017]图5为本发明实施例中MTX前药靶向胶束制剂在不同pH的PBS缓冲液中的释药曲线图；
[0018]图6为本发明实施例中MTX前药靶向胶束制剂肿瘤细胞靶向实验(包括激光共聚焦分析和流式细胞实验)的结果图；
[0019]图7为本发明实施例中MTX前药胶束制剂与裸药MTX的肿瘤细胞毒性实验结果图；
[0020]图8为本发明实施例中MTX前药靶向胶束在荷瘤裸鼠静脉注射后的肿瘤靶向实验及结果图。

[0021]为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图详予说明。
[0022]本发明使用的药品名称说明如表1:
[0023]表1[0024]