专利名称：用于脉络膜新生血管形成的疫苗疗法的制作方法由脉络膜新生血管形成(CNV)引起的渗出性年龄相关黄斑变性(AMD)是发达国家中严重视力缺损的主要原因之一。至今的证据提示血管内皮生长因子(VEGF)在CNV发生中发挥中枢作用。例如，已经报告了 CNV受到抑制VEGF生成的化合物或抑制VEGF信号转 导途径的化合物的阻抑。而且，还已经报告了抗VEGF抗体显示出与常规治疗方法(包括光动力学疗法)相比更高的治疗功效。因此，最近几年，抗VEGF剂已经成为针对CNV的药物疗法的一个主要选项。VEGF信号传导由两种类型的受体酪氨酸激酶介导，即VEGF受体I (VEGFR-I)和VEGF受体2 (VEGFR-2)。这两种受体在人CNV膜和实验室小鼠CNV膜上得到了表达。然而，VEGFR-I信号转导途径在CNV中的作用仍有争论。例如，一项研究报告了通过口服施用抗体、基因敲低、或siRNA对VEGFR-I信号传导的抑制能抑制CNV。另一项研究报告了在眼中，VEGF或胎盘生长因子I (PIGF1，一种VEGFR-2配体)对VEGFR-I的活化能经由SPARC对VEGFR-2的活化而导致CNV活化。另一方面，对于VEGFR-2，VEGFR-2信号传导的活化能促进CNV生长的发现已经得到了广泛承认。因此，预期靶向VEGFR-2的血管发生性手段(诸如系统或局部施用抗VEGFR-2剂或VEGFR-2抗体，及玻璃体内施用siRNA)能抑制VEGFR-2信号传导和CNV生长。然而，当前可得的抗VEGF剂的问题在于它们需要以4-6周间隔反复注射施用。而且，有严重并发症诸如眼内炎和视网膜剥离的高风险。因此，希望建立新型治疗方法来替换当前使用的抗VEGF剂。已知利用自人VEGF受体2衍生的肽的疫苗能在肿瘤组织中诱导具有有力的针对表达VEGFR-2的内皮细胞的细胞毒性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)(专利文件I)。还知道利用自人VEGF受体I衍生的肽的疫苗能诱导具有有力的针对表达VEGFR-I的内皮的细胞毒性的CTL(专利文件2)。而且，已经确认了利用自VEGF受体2衍生的肽的疫苗在小鼠中具有CNV抑制效果(专利文件3)。然而，正如在其它组织中，脉络膜中新生血管形成的机制中有许多不清楚之处，而且不知道有效抑制人脉络膜中CNV的疫苗的存在。[引用表][专利文献][PTL 1]W0 2004/024766[PTL 2]WO 2006/093030[PTL 3]WO 2008/099908发明概述技术问题鉴于上述情况，实现了本发明。本发明要实现的一个目标是提供用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的新型药物作用剂和方法。解决方案本发明人对新生血管性黄斑病变患者施用了含有VEGFR-I衍生肽的药物组合物/疫苗，结果发现了这能有效抑制人CNV而不引起提示安全性问题的问题，由此完成了本发明。更具体地，本发明提供一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的药物组合物，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨 基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。本发明还提供一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。本发明还提供一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。而且，本发明提供一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗，其至少含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。本发明提供一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的方法，其包括至少对受试者施用包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸的步骤。本发明还提供一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的方法，其包括至少对受试者施用包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。本发明进一步提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成弓I起的疾病的药物组合物中的用途。而且，本发明提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗中的用途。本发明还提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物中的用途。另外，本发明提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗中的用途。本发明进一步提供包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽，其用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病。或者，本发明进一步提供一种制造用于治疗或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物的方法或工艺，其中该方法或工艺包括配制药学或生理学可接受载体与活性组分即包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸的步骤。在另一个实施方案中，本发明还提供一种制造用于治疗或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物的方法或工艺，其中该方法或工艺包括混合活性组分与药学或生理学可接受载体的步骤，其中该活性组分是包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。或者，在一个实施方案中，在本发明中，VEGFR-I衍生肽也可以与VEGFR-2衍生肽组合施用来治疗或抑制人CNV。因而，本发明提供一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新 生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的药物组合物，其包含选自下组的肽每一项的至少一种类型作为活性组分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。本发明还提供一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗，其包含选自下组的肽每一项的至少一种类型作为活性组分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。本发明还提供一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物，其包含选自下组的肽每一项的至少一种类型作为活性组分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。而且，本发明提供一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗，其包含选自下组的肽每一项的至少一种类型作为活性组分(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。本发明提供一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的方法，其包括对受试者施用选自下组的肽每一项的至少一种类型(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。本发明还提供一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的方法，其包括对受试者施用选自下组的肽每一项的至少一种类型(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的 肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。本发明进一步提供选自下组的肽在制造用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽。而且，本发明提供选自下组的肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成弓I起的疾病的疫苗中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽。本发明还提供选自下组的肽在制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。另外，本发明提供选自下组的肽在制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗中的用途(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。另外，本发明提供选自下组的肽，其用于治疗或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。另外，本发明提供选自下组的肽，其用于抑制人脉络膜中新生血管形成(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。 或者，本发明进一步提供一种制造用于治疗或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物的方法或工艺，其中该方法或工艺包括配制药学或生理学可接受载体与选自下组的活性组分作为活性组分的步骤(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。或者，本发明进一步提供一种制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗的方法或工艺，其中该方法或工艺包括将选自下组的活性组分作为活性组分与药学或生理学可接受的载体配制的步骤(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。在另一个实施方案中，本发明还提供一种制造用于治疗或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物的方法或工艺，其中该方法或工艺包括混合活性组分与药学或生理学可接受载体的步骤，其中该活性组分选自下组(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。在另一个实施方案中，本发明还提供一种制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗的方法或工艺，其中该方法或工艺包括混合活性组分与药学或生理学可接受载体的步骤，其中该活性组分选自下组(a)包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸，和(b)包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽和/或编码它的多核苷酸。更具体地，本发明提供下述[I]至[30]；[I] 一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的药物组合物，其包含(a)肽即包含自VEGF受体I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，或编码它的多核苷酸作为活性组分，[2] [I]的药物组合物，其中该上文所述(a)肽包括下文⑴和(ii)的肽(i)至少一种包含选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[3] [2]的药物组合物，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽； (4) SEQ ID NO 4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[4] [I]至[3]任一项的药物组合物，其中该组合物进一步包含(b)肽即包含自VEGF受体2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，[5] [4]的药物组合物，其中该上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)(i)至少一种包含选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[6] [5]的药物组合物，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[7] [I]至[6]任一项的药物组合物，其中该由脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)选自渗出性年龄相关黄斑变性，近视性黄斑变性，血管样条纹症，中央渗出性脉络膜视网膜病变，各种视网膜色素上皮病，脉络膜萎缩，无脉络膜，和脉络膜骨瘤，[8] [I]至[7]任一项的药物组合物，其施用于HLA抗原为HLA-A02或HLA-A24的受试者，[9] 一种用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的疫苗，其包含(a)肽即包含自VEGF受体I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，或编码它的多核苷酸作为活性组分，[10] [9]的疫苗，其中该上文所述(a)肽包括下文⑴和(ii)肽 (i)至少一种包含选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[11] [10]的疫苗，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[12] [9]至[11]任一项的疫苗，其中该疫苗进一步包含(b)肽即包含自VEGF受体2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，[13] [12]的疫苗，其中该上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)(i)至少一种包含选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[14] [13]的疫苗，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基 酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[15] [9]至[14]任一项的疫苗，其中该由脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)选自渗出性年龄相关黄斑变性，近视性黄斑变性，血管样条纹症，中央渗出性脉络膜视网膜病变，各种视网膜色素上皮病，脉络膜萎缩，无脉络膜，和脉络膜骨瘤，[16] [9]至[15]任一项的疫苗，其施用于HLA抗原为HLA-A02或HLA-A24的受试者，[17] 一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物，其包含(a)肽即包含自VEGF受体I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，或编码它的多核苷酸作为活性组分，[18] [17]的药物组合物，其中该上文所述(a)肽包括下文⑴和(ii)的肽(i)至少一种包含选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[19] [18]的药物组合物，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[20] [17]至[19]任一项的的药物组合物，其中该组合物进一步包含(b)肽即包含自VEGF受体2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，[21] [20]的药物组合物，其中该上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)⑴至少一种包含选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[22] [21]的药物组合物，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸 的肽；(3) SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[23] [15]至[19]任一项的药物组合物，其施用于HLA抗原为HLA-A02或HLA-A24的受试者，[24] 一种用于抑制人脉络膜中新生血管形成的疫苗，其包含(a)肽即包含自VEGF受体I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，或编码它的多核苷酸作为活性组分，[25] [24]的疫苗，其中该上文所述(a)的肽包括下文⑴和(ii)的肽(i)至少一种包含选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列的肽；和(ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO :1至4中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[26] [25]的疫苗，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO :1至3中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO :4的氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :4的氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，[27] [24]至[26]任一项的疫苗，其中该疫苗进一步包含(b)肽即包含自VEGF受体2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽的至少一种类型，[28] [27]的疫苗，其中该上文所述(b)肽包括下文⑴和(ii)的肽⑴至少一种包含选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列的肽；和 (ii)至少一种包含在选自SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽，[29] [28]的疫苗，其中该上文所述(ii)肽是下文⑴至(6)的任一肽(I)SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸的肽；(2) SEQ ID NO : 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(3) SEQ ID NO :11至17中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且SEQ ID NO: 11至17中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽；(4) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸的肽；(5) SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽；和(6) SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列的自N末端起的第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且SEQ ID NO :5至10中的任一氨基酸序列的C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽，和[30] [24]至[29]任一项的疫苗，其施用于HLA抗原为HLA-A02或HLA-A24的受试者。本发明的有益效果本发明可提供有效治疗和预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的药物组合物和疫苗。而且，本发明可提供有效抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物和疫苗。附图简述

图1-1图I显示已经给予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年龄相关黄斑变性患者HLA-A0201-病例I的症状缓解。(A)显示开始施用之前的断层摄影术图像，(B)显示开始施用之前的眼底照片，(C)显示开始施用之前的荧光素眼底照相术。(A)和(D)的箭指示色素上皮的线，而(B)和(E)的箭头指示色素上皮的剥离。
图1-2图I显示已经给予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年龄相关黄斑变性患者HLA-A0201-病例I的症状缓解。(D)显示开始施用之后五个月时的断层摄影术图像，(E)显示开始施用之后五个月时的眼底照片，(F)显示开始施用之后五个月时的荧光素眼底照相术。(A)和(D)的箭头指示色素上皮的线，而(B)和(E)的箭头指示色素上皮的剥离。图2图2显示通过对已经给予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年龄相关黄斑变性患者HLA-A0201-病例3 —个病例实施的光学相干断层摄影术获得的视网膜断层摄影术图像。(A)显示开始施用之前的断层摄影术图像，而(B)显示开始施用之后一个月时的断层摄影术图像。箭头指示水肿，而虚箭头指示显然已纤维化且活动减退的新生血管性膜。图3
图3显示已经给予VEGFR-I衍生肽和VEGFR-2衍生肽的年龄相关黄斑变性患者HLA-A2402-病例I的症状缓解和视觉恢复。上部照片显示眼底照片，而下部照片显示视网膜断层摄影术图像，开始治疗之后视网膜下出血(箭头)消失且视力改善(括弧中的数值)。另外，黄斑的解剖学仍然相同。图4-1图4显示HLA-A0201-病例I的VEGFRl肽特异性应答。测试了处理前(a)和I个疗程后(b)的PBMC。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左下小图)和VEGFRl肽特异性点(右下小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。圆符指示点计数是饱和的。图4-2图4显示HLA-A0201-病例I的VEGFRl肽特异性应答。测试了 2个疗程后(C)和3个疗程后(d)的PBMC。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左下小图)和VEGFRl肽特异性点(右下小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。圆符指示点计数是饱和的。图4-3图4显示HLA-A0201-病例I的VEGFRl肽特异性应答。测试了 4个疗程后(e)的PBMC。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左下小图)和VEGFRl肽特异性点(右下小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。圆符指示点计数是饱和的。图5-1图5显示HLA-A0201-病例I的VEGFR2肽特异性应答。测试了处理前(a)和I个疗程后(b)的PBMC。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A2-773肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ；响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左下小图)和VEGFR2肽特异性点(右下小图)的数目。图5-2
图5显示HLA-A0201-病例I的VEGFR2肽特异性应答。测试了 2个疗程后(C)和3个疗程后(d)的PBMC。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A2-773肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左下小图)和VEGFR2肽特异性点(右下小图)的数目。图5-3图5显示HLA-A0201-病例I的VEGFR2肽特异性应答。测试 了 4个疗程后(e)的PBMC。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A2-773肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左下小图)和VEGFR2肽特异性点(右下小图)的数目。图6-1图6显示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特异性应答。显示了 I个疗程后(a)的PBMC响应作为代表性结果。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左中小图)和VEGFRl肽特异性点(右中小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。通过HLA-A*0201/VEGFRldextramer来检测VEGFRl肽特异性T细胞受体(下部小图)。图6-2图6显示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特异性应答。显示了 3个疗程后(b)的PBMC响应作为代表性结果。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左中小图)和VEGFRl肽特异性点(右中小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。通过HLA-A*0201/VEGFRldextramer来检测VEGFRl肽特异性T细胞受体(下部小图)。图6-3图6显示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特异性应答。显示了 4个疗程后(C)的PBMC响应作为代表性结果。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左中小图)和VEGFRl肽特异性点(右中小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。通过HLA-A*0201/VEGFR1 dextramer来检测VEGFRl肽特异性T细胞受体(下部小图)。图6-4图6显示HLA-A0201-病例3的VEGFRl肽特异性应答。显示了 5个疗程后(d)的PBMC响应作为代表性结果。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A2-770肽(左上小图)或HIV-Env肽(右上小图)刺激PBMC。R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了点计数(左中小图)和VEGFRl肽特异性点(右中小图)的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。通过HLA-A*0201/VEGFRldextramer来检测VEGFRl肽特异性T细胞受体(下部小图)。图7-1图7显示HLA-A0201-病例3的VEGFR2肽特异性应答。测试了处理前(a)、I个疗程后(b)、和3个疗程后(c)的PBMC。在每幅图中，图中指示了针对VEGFR2-A2-773肽冲激的TISI或经HIV-Env肽冲激的TISI的点计数(左边小图)和VEGFR2肽特异性点(右边小图)的数目。图7-2图7显示HLA-A0201-病例3的VEGFR2肽特异性应答。测试了 4个疗程后(d)和5个疗程后(e)的PBMC。在每幅图中，图中指示了针对经VEGFR2-A2-773肽冲激的TISI或经HIV-Env肽冲激的TISI的点计数(左边小图)和VEGFR2肽特异性点(右边小图)的数目。图8图8显示HLA-A2402-病例I的VEGFRl肽特异性应答。显示了 2个疗程后(a)和 6个疗程后(b)的PBMC响应作为代表性结果。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR1-A24-1084肽(左边小图)或HIV-Env肽(右边小图)刺激PBMC0 R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了 VEGFRl肽特异性点的数目。使用不配对Student氏t检验来实施统计分析(星号；P < O. 05)。圆符指示点计数是饱和的。图9图9显示HLA-A2402-病例I的VEGFR2肽特异性应答。显示了 2个疗程后(a)和6个疗程后(b)的PBMC响应作为代表性结果。在每幅图中，显示了 ELISP0T板的照片，其中用VEGFR2-A24-169肽(左边小图)或HIV-Env肽(右边小图)刺激PBMC0 R/S ;响应者/刺激物比。图中指示了 VEGFR2肽特异性点的数目。图10图10显示处理后受试者的视力变化。处理组的视力与无处理组相比得到改善，有显著差异(P值=0.015)。发明详述定义如本文中使用的，词语“一个/种”、“该”、和“所述”意味着“至少一个/种”，除非
另有明确说明。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基可以是经过修饰的残基或非天然存在的残基(诸如相应的天然存在氨基酸的人工化学模拟物)的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物。如本文中使用的，术语“氨基酸”指天然存在的和合成的氨基酸，以及与天然存在的氨基酸发挥相似功能的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。氨基酸可以是L-氨基酸或D-氨基酸。天然存在的氨基酸指由遗传密码编码的氨基酸，以及在细胞中在翻译后被修饰的氨基酸(例如羟脯氨酸、Y-羧基谷氨酸、和O-磷酸丝氨酸)。短语“氨基酸类似物”指与天然存在氨基酸具有相同的基础化学结构(α碳与氢、羧基、氨基、和R基团结合)但具有一个或多个经过修饰的R基团或经过修饰的主链的化合物(例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍)。短语“氨基酸模拟物”指与具有与一般氨基酸不同的结构但发挥与一般氨基酸相似的功能的化学化合物。氨基酸在本文中可以通过它们公知的由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的三字母符号或单字母符号来指称。术语“基因”、“多核苷酸”、“核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，而且除非另有明确说明，通过它们普遍接受的单字母符号来指称。如本文中使用的，术语“组合物”意图涵盖包括规定量的规定组分的产物，以及任何直接或间接源自规定量的规定组分的组合的产物。所述术语在涉及药物组合物时意图涵盖包括活性组分和构成载体的任何惰性组分的产物，以及任何直接或间接缘于任何两种或更多种组分的组合、复合或聚集、或缘于一种或多种组分的解离、或缘于一种或多种组分的其它类型反应或相互作用的产物。因而，在本发明的语境中，短语“药物组合物”涵盖任何通过混合本发明的化合物和药学或生理学可接受载体而制备的组合物。如本文中使用的，短语“药学可接受载体”或“生理学可接受载体”表示药学或生理学可接受的材料、组合物、物质或媒介，包括但不限于活性组分从一个器官或身体部分到另一个器官或身体部分的携带或运输中涉及的液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料。除非另有定义，术语“细胞毒性T淋巴细胞”、“细胞毒性T细胞”和“CTL”在本文 中可互换使用，而且除非另有明确说明，指能够识别非自身细胞(例如病毒感染的细胞)并诱导此类细胞死亡的T淋巴细胞亚群。除非另有定义，术语“HLA-A24”指包含诸如HLA_A*2402等亚型的HLA-A24类型。除非另有定义，如本文中使用的，术语“HLA-A02”代表性指诸如HLA_A*0201等亚型。除非另有定义，如本文中使用的，术语“试剂盒”用于指试剂和其它材料的组合。术语“试剂盒”并非意图限于试剂和/或材料的特定组合。就本发明的方法和组合物可用于由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)“治疗”的语境而言，如果治疗导致临床效益，诸如受试者中色素上皮剥离减少、色素上皮剥离改善、泄漏减少、或变形改善的话，认为该治疗是“有效”的。有效性结合用于治疗由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的任何已知方法来加以确定。除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员的普遍理解相同的含义。本发明涉及用于治疗和/或预防由脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的药物组合物和用于抑制脉络膜中新生血管形成的药物组合物，其含有包含自VEGFR-I蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽(以下称作“VEGFR-1肽”)(以下，该组合物可统称为“本发明的药物组合物”)和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。而且，本发明涉及用于治疗和/或预防由脉络膜中新生血管形成引起的疾病(新生血管性黄斑病变)的疫苗和用于抑制脉络膜中新生血管形成的疫苗，其包含VEGFR-I(以下，该疫苗可统称为“本发明的疫苗”)和/或编码它的多核苷酸。上述药物组合物和疫苗可包含任何其它物质，例如免疫刺激物。优选地，可含有包含自其它蛋白质衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的的肽。更优选地，包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽(以下称作“VEGFR-2肽”)。本发明基于本发明人的发现，即包含VEGFR-I肽的药物组合物/疫苗有效抑制脉络膜中新生血管形成。
VEGFR-1 At本发明的药物组合物和疫苗中含有的VEGFR-I肽(以下，“VEGFR-1肽”可称作“本发明的肽”)可通过自已知VEGFR-I蛋白的氨基酸序列中的任何位置开始合成肽来获得。本发明可含有VEGFR-2肽，而且也可通过自已知VEGFR-2的氨基酸序列中的任何位置开始合成肽来获得。人VEGFR-I和人VEGFR-2的氨基酸序列是已知的，而且本领域技术人员能容易地自互联网上可得的蛋白质序列数据库获得它们。人VEGFR-I蛋白的氨基酸序列的一个例子是SEQ ID NO 19的氨基酸序列(由GenBank登录号NM_002019的核苷酸序列编码的氨基酸序列)。人VEGFR-2蛋白的氨基酸序列的一个例子是SEQ ID NO 21的氨基酸序列(由GenBank登录号NM_002253的核苷酸序列编码的氨基酸序列)。可以依照肽化学中常规使用的方法来实施肽合成。常规合成方法记载于文件诸如"Peptide Synthesis" , Interscience, New York,1966 ； " The Proteins" , Vol. 2,Academic Press Inc., New York,1976 ； " Peptide Synthesis (Peptide Gosei)",Maruzen,1975 ； " Fundamentals and Experiments of Peptide Synthesis (PeptideGosei no Kiso to Jikken) " , Maruzen, 1985 ；及"The sequel of Development of Pharmaceuticals(Zoku Iyakuhin no Kaihatsu)" , Vol. 14, Peptide Synthesis(PeptideGosei), Hirokawa Shoten，1991，及出版物诸如国际申请号WO 99/67288。也可以通过已知遗传工程方法来合成本发明的肽。下文是遗传工程合成方法的一个例子。将其中已经插入有编码本发明肽的DNA的载体导入合适宿主细胞以生成转化细胞。可以通过收集这些转化细胞中生成的肽来获得本发明的肽。也可以最先将本发明的肽作为融合蛋白产生出来，然后使用适宜蛋白酶切割以获得肽。在一种用于制备融合蛋白的方法中，可以将编码本发明肽的多核苷酸与编码另一种肽的多核苷酸符合读码框地连接，并可以将此插入表达载体，用于在宿主中表达。为此目的可使用本领域技术人员知道的技术。对于与本发明肽融合的肽，可以使用已知肽，诸如FLAG (Ηορρ，Τ· P.等，BioTechnology (1988) 6，1204-1210)、由六个组氨酸(His)残基组成的6x HisUOx His、流感血凝素(HA)、人 c-myc 片段、VSV-GP 片段、pl8HIV 片段、T7 标签、HSV标签、E标签、SV40T抗原片段、Ick标签、α-微管蛋白片段、B标签、和蛋白C片段。也可能将本发明的肽连接至谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、流感血凝素(HA)、免疫球蛋白恒定区、β_半乳糖苷酶、麦芽糖结合蛋白(MBP)、等等以生成融合蛋白。可以通过用合适蛋白酶处理以这种方式生成的融合蛋白，然后收集感兴趣肽来获得本发明的肽。可以通过本领域技术人员知道的方法，诸如亲和层析来收集肽。作为本发明肽的氨基酸序列，例如可以使用对HLA抗原的结合亲和力作为指标自VEGFR-I蛋白的完整氨基酸序列或VEGFR-2蛋白的完整氨基酸序列选择任何序列。对HLA抗原的结合亲和力可如下测量分离在细胞表面上具有HLA抗原的细胞,诸如树突细胞,并使用通常实施的方法的测量肽对细胞的结合。或者，可以在计算机上(in silico)通过当前在互联网上可得的软件来计算结合亲和力，诸如Parker K. C. , J. Immunol. 152,1994中记载的那些。当应用于例如日本人时，优选使用据说在日本人群中频繁表达的A-24型、A-02型、等等作为HLA抗原来获得有效结果。HLA抗原诸如A-02和A-24型各自包括亚型，诸如A-0201或A-2402。对HLA_A*0201具有高结合亲和力的VEGFR-I肽的例子包括包含SEQ IDNO : I至3的氨基酸序列的肽，而对HLA-A*2402具有高结合亲和力的VEGFR-I肽的例子包括包含SEQ ID NO :4的氨基酸序列的肽(WO 2006/093030)。对HLA_A*0201具有高结合亲和力的VEGFR-2肽的例子包括包含SEQ ID NO : 11至17的氨基酸序列的肽，而对HLA_A*2402具有高结合亲和力的VEGFR-2肽的例子包括包含SEQ ID NO :5至10的氨基酸序列的肽(TO2004/024766)。在临床实践中，可以通过预先调查HLA抗原的类型来恰当选择对需要治疗的患者携带的HLA抗原具有该结合亲和力的肽。对HLA抗原具有高结合亲和力的肽很有可能作为具有诱导细胞毒性T细胞(CTL)的活性的细胞是有效的。还有，期望检查使用存在高结合亲和力作为指标选择的候选肽是否实际具有诱导CTL的活性。可如下确认CTL诱导活性，即用候选肽刺激包含人MHC抗原的抗原呈递细胞(诸如B淋巴细胞、巨噬细胞、和树突细胞)，优选自人外周血单个核细胞衍生的树突细胞；将细胞与CD8阳性细胞混合；然后测量针对靶细胞的细胞毒性。作为反应系统，可使用为表达人HLA抗原而生成的转基因动物(例如Hum. Immunol. 2000Aug ；61 (8)764-79 Related Articles, Books, Linkout Induction of CTL response by a minimalepitope vaccine in HLAA*0201/DR1 transgenic mice !dependence on HLA class IIrestricted T(H) response. , Ben Mohamed L. , Krishnan R. , Longmate J. , Auge C. , Low L. , Primus J. , Diamond DJ.中记载的那些)。可以根据自用例如51Cr等等放射性标记物的靶细胞释放的放射性计算细胞毒性。或者，可以通过使用抗IFN-Y单克隆抗体在培养基上显现抑制区及测量在携带肽的抗原呈递细胞存在下由CTL生成并释放的IFN-Y来检查活性。本发明的肽的长度不受特别限制，只要它们具有CTL诱导活性，但是优选为50个氨基酸或更少，更优选30个氨基酸或更少，进一步更优选15个氨基酸或更少。例如，当在体内呈递在抗原呈递细胞上时，各种蛋白质被降解成9聚物肽(九肽)，然后呈递。因此，本发明的肽期望是9聚物(九肽)或10聚物(十肽)。优选的VEGFR-I肽包括包含SEQ IDNO :1至4(W02006/093030)的氨基酸序列的肽。优选的VEGFR-2肽包括包含SEQ ID NO 5至17 (W0 2004/024766)的氨基酸序列的肽。而且，可以对天然存在VEGFR-I或VEGFR-2的部分肽的氨基酸序列替代、删除、添力口、和/或插入一个、两个、或几个氨基酸。在本文中，“几个”意指五个或更少，和优选三个或更少。在修饰氨基酸残基时，期望用维持氨基酸侧链特性的氨基酸替代。氨基酸侧链特性的例子有疏水性氨基酸(A，I，L，M，F，P，W，Y，和V);亲水性氨基酸(R，D，N, C，E，Q，G，H，K，SjPT);包含脂肪族侧链的氨基酸(G，A，V，L，I，和P);包含含羟基侧链的氨基酸(S，TjPY);包含含硫原子侧链的氨基酸(C和M);包含含羧酸或酰胺侧链的氨基酸(D，N, E，和Q);包含碱性侧链的氨基酸(R，K，和H);和包含含芳基侧链的氨基酸(H，F，Y，和W)(所有氨基酸用括弧中的单字母代码来表示)。这每一组内的氨基酸替代一般称作保守替代。已知包含经修饰氨基酸序列(其中对某种氨基酸序列替代、删除、添加、和/或插入一个或多个氨基酸残基)的肽保留其原始肽的生物学活性(Mark, D. F.等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA(1984)81,5662-6 ；Zoller,M. J. Smith,M. ,Nucleic Acids Res. (1982) 10，6487-500 ；Wang, A.等，Science (1984) 224 :1431-3 ；Dalbadie-McFarland, G.等，Proc. Natl. Acad.Sci. USA (1982) 79 :6409-13)。此类经修饰VEGFR-1肽的优选例子包括包含在SEQ ID NO: I至4任一的氨基酸序列中具有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。经修饰VEGFR-2肽的优选例子包括包含在SEQ ID NO 5至17中的任一氨基酸序列中具有一处或多处氨基酸替代、删除、添加、和/或插入的氨基酸序列的肽。而且，由于早就知道通过结合HLA抗原而展示的肽的序列规律(J. Immunol.，152 3913,1994 ；Immunogenetics,41 :178,1995 ；J. Immunol.，155 :4307,1994),因此可选择具有此类规律的序列，或者可以对如上所述获得的肽进行基于这种规律的修饰。例如，已知具有高HLA-24结合亲和力的肽是其中自肽N末端起第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸且C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。因此，对于要施用于携带HLA-24型HLA抗原的受试者的药物组合物或疫苗要含有的肽，可以选择自N末端起第二个氨基酸为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸和/ 或C末端氨基酸为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。或者，获得的肽自N末端起第二个氨基酸可修饰为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸，或者C末端氨基酸可修饰为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸。此类VEGFR-I肽的优选例子包括在SEQ ID NO :4的氨基酸序列中自N末端起第二个氨基酸修饰为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸和/或C末端氨基酸修饰为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。而且，此类VEGFR-2肽的优选例子包括在SEQ ID NO 5至10中的任一氨基酸序列中自N末端起第二个氨基酸修饰为苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、或色氨酸和/或C末端氨基酸修饰为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸、或甲硫氨酸的肽。同时，已知具有高HLA-02结合亲和力的肽是自肽N末端起第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸且C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽。因此，作为要施用于携带HLA-02型HLA抗原的受试者的药物组合物或疫苗中要含有的肽，可以选择其中自N末端起第二个氨基酸为亮氨酸或甲硫氨酸和/或C末端氨基酸为缬氨酸或亮氨酸的肽。或者，获得的肽自N末端起第二个氨基酸可以修饰为亮氨酸或甲硫氨酸且C末端氨基酸可以修饰为缬氨酸或亮氨酸。此类VEGFR-2肽的优选例子包括在SEQ ID NO :1至3任一的氨基酸序列中自N末端起第二个氨基酸修饰为亮氨酸或甲硫氨酸和/或C末端氨基酸修饰为缬氨酸或亮氨酸的肽。HLA-02型的经修饰VEGFR-2肽的一个例子是包含SEQ ID NO :11-17的氨基酸序列的肽。可如上所述来获得本发明的肽，但是当肽序列与具有不同功能的内源或外源蛋白质的氨基酸序列的一部分相同时，它可引起副作用，诸如针对特定物质的自身免疫性疾病或变应性症状。因此，优选使用可用的数据库来进行同源性搜索，并检查获得的肽的序列是否匹配其它蛋白质的氨基酸序列。如果肽序列匹配另一种蛋白质的氨基酸序列的话，应当优选避免选择该肽序列。如果同源性搜索显示不存在相差一个或两个氨基酸的肽的话，上文所述用于提高对HLA抗原的结合亲和力和/或CTL诱导活性的氨基酸序列修饰不会引起那些问题。多核苷酸本发明还提供编码任何上述本发明肽的多核苷酸。这些包括自天然存在的VEGFR-I 基因(GenBank登录号NM_002019(例如 SEQ ID NO :18))或VEGFR-2基因(GenBank登录号NM_002253(例如SEQ ID NO :20))衍生的多核苷酸以及具有其保守修饰核苷酸序列的多核苷酸。在本文中，短语“保守修饰核苷酸序列”指编码相同或本质上相同的氨基酸序列的序列。由于遗传密码的简并性，大量的功能上相同的核酸编码任何给定蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCGjP G⑶都编码氨基酸丙氨酸。因此，在每一个由密码子规定为丙氨酸的位置，该密码子可以改变成任何相应所述密码子，而不会改变编码的多肽。此类核酸变异为“沉默变异”，是保守修饰变异中的一类。本文中编码肽的每一种核酸序列也描述该核酸的每一种可能的沉默变异。本领域技术人员会认识到可以修饰核酸中的每一个密码子(AUG (它通常是甲硫氨酸的唯一密码子)和TGG (其通常是色氨酸的唯一密码子)除外)以产生功能上相同的分子。因而，每一种披露的序列隐含描述编码肽的核酸的每一处沉默变
巳本发明的多核苷酸可以由DNA、RNA、或其衍生物构成。诸如本领域公知的，DNA分子由碱基诸如天然存在碱基A、T、C、和G构成，而且T在RNA中替换为U。本领域技术人员会认识到多核苷酸中也可以包括非天然存在碱基。本发明的多核苷酸可以编码多种本发明肽，有或无居间氨基酸序列。例如，居间氨基酸序列可以提供多核苷酸或翻译的肽的切割位点(例如酶识别序列)。而且，多核苷酸可以在编码本发明肽的编码序列的基础上包括任何额外的序列。例如，多核苷酸可以是包括肽表达需要的调节序列的重组多核苷酸，或者可以是具有标志基因等等的表达载体(质 粒)。通常，此类重组多核苷酸可以通过使用例如聚合酶和内切核酸酶经由常规重组技术操作多核苷酸来制备。重组和化学合成技术均可用于生成本发明的多核苷酸。例如，可以通过插入适宜载体，在转染入感受态细胞后表达来生成多核苷酸。或者，可以使用PCR技术或合适宿主中的表达来扩增多核苷酸(参见例如Sambrook等，Molecular Cloning A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York, 1989)。或者，可以使用固相技术来合成多核苷酸，如记载于Beaucage SL&Iyer RP,Tetrahedron 1992,48 :2223-311 ;Matthes等，EMBO J 1984,3 :801_5。包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸的药物组合物和疫苗本发明提供用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物，其至少包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。本发明中的治疗指减轻已经实际发生由脉络膜中新生血管形成引起的疾病的特征性症状的患者中的所述症状。在本发明中，减轻的程度不受特别限制，而且只要症状降低，即使程度非常轻微，它就包括在本发明的治疗的含义中。在本发明中，预防意指预先阻抑由脉络膜中新生血管形成引起的疾病特征性的症状的进展。在本发明中，阻抑的进展的程度不受任何方式的限制，而且只要进展得到阻抑，即使程度非常轻微，它就包括在本发明的预防的含义中。由脉络膜中新生血管形成引起的疾病的症状包括视力降低。评估此症状是否减轻可通过视力测试来确定。而且，可以经由使用荧光素眼底照相术或光学相干断层摄影术的检查通过评估脉络膜新生血管的活性来确定症状的进展是否得到阻抑。而且，本发明提供用于治疗和/或预防由脉络膜中新生血管形成引起的疾病的疫苗，其至少包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸作为活性组分。在本发明中，疫苗指在施用于生物体时能在该生物体中在体内诱导免疫应答的组合物。在本发明中，在体内诱导的免疫应答特别指诱导靶向表达VEGFR-I的细胞的CTL。由于脉络膜中新生血管形成中牵涉的血管内皮细胞在细胞表面上表达VEGFR-1，因此它们可以变成通过施用此疫苗诱导的CTL的靶。就是说，施用本发明的疫苗引起本发明的肽以高密度呈递在抗原呈递细胞的HLA抗原上，这诱导与在呈递的肽和HLA抗原之间形成的复合物特异性反应的CTL，而且提高攻击脉络膜中血管内皮细胞的力量。或者，通过自患者提取树突细胞来获得在其细胞表面上具有本发明肽的抗原呈递细胞，并用本发明的肽刺激它们。经由施用将细胞返还患者在患者中引起CTL诱导，而且能提高攻击脉络膜中血管内皮细胞的力量。本发明的药物组合物和疫苗针对由脉络膜中新生血管形成引起的疾病是有效的。本发明的药物组合物和疫苗的靶疾病没有限制，只要它们是由脉络膜新生血管形成引起的疾病。优选地，疾病包括与诸如渗出性年龄相关黄斑变性、近视性黄斑变性、血管样条纹症、中央渗出性脉络膜视网膜病变、各种视网膜色素上皮病、脉络膜萎缩、无脉络膜、和脉络膜骨瘤等疾病有关的新生血管性黄斑病变。一个特别优选的例子是渗出性年龄相关黄斑变性。本发明的药物组合物和疫苗选择性攻击血管内皮细胞，并因此具有治疗后快速视力降低和发生严重并发症(它们是常规治疗方法中的问题)的低风险。因此，本发明的药物组合物不仅可应用于具有严重症状的患者，而且还可应用于具有相对较好视力的早期患者。由于视网膜损害在具有相对较好视力的早期病例中较低，因此预期晚期病例的治疗后视力预后比常规治疗有利得多。而且，已经确认了本发明的药物组合物和疫苗在不响应常规治疗方法的病例中显示了效果，可应用于此类病例。
本发明基于如下的发现，即脉络膜中的新生血管形成受到施用VEGFR-I肽的抑制。因此，本发明提供用于抑制脉络膜中新生血管形成的药物组合物，其包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸每一种的至少一种类型。而且，包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸的药物组合物可用作疫苗。因此，本发明还提供用于抑制脉络膜中新生血管形成的疫苗，其至少包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸。抑制的程度不受特别限制，而且只要新生血管形成受到抑制，即使程度轻微，它就包括在抑制的含义中。本发明的药物组合物和疫苗不受特别限制，只要它们至少含有VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸，而且例如，它们可以包含多种类型的VEGFR-I肽和/或任何其它物质，例如免疫刺激物。优选地，可以含有包含自其它蛋白质衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽。更优选地，包含自VEGFR-2蛋白衍生的氨基酸序列且具有诱导细胞毒性T细胞的活性的肽(以下称作“VEGFR-2肽”)。本发明的药物组合物和疫苗除了肽之外可以在适当时含有常用于药品的载体、赋形剂等等。例如，它们可以以用水或其它药学可接受液体制备的无菌溶液或悬浮液的可注射形式胃肠外使用。它们可以通过将它们与药学可接受载体或媒介(更具体地，灭菌水或生理盐水溶液、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、芳香剂、赋形剂、媒介、防腐剂、粘合剂、等等)适当组合，并将它们以普遍接受的药学实践要求的单位剂量形式混合来配制。这些配制剂中包括一定量的活性组分以实现规定限制内的适宜剂量。当本发明为疫苗时，它可以包括佐剂，使得细胞免疫得到有效建立，而且它们也可以包括用于新生血管性黄斑病变等等的其它活性组分。它们也可以制成颗粒配制剂。对于佐剂，可使用文件(Johnson AG.，Clin. Microbiol. Rev. ,7 :277-289,1994)等等中记载的那些。其它配制剂可以是脂质体制剂、通过结合至微米直径的珠而生产的颗粒制剂、或脂质结合的制剂。本发明的药物组合物和疫苗中含有的VEGFR-I肽的量不受特别限制，只要它是药学有效量。例如，每一种肽的有效量可以为O. OOlmg至100011^，优选0.00111^至lOOOmg，和更优选0. Img至10mg。而且，如果药物组合物和疫苗含有VEGFR-2肽的话，VEGFR-I肽与VEGFR-2肽的组合比不受特别限制，只要含有两种肽的药学有效量。组合的VEGFR-I肽和VEGFR-2肽的量可以是相同的，或者组合的任一种肽的量可以大于另一种肽的量。虽然VEGFR-2在几乎所有血管内皮细胞的表面上表达，但是VEGFR-I只在特定部分的血管内皮细胞的表面上表达；因此，组合的VEGFR-2肽的量可以大于VEGFR-I肽的量。在本发明的另一个实施方案中，本发明的肽也可以以药学可接受盐的形式施用。盐的优选例子包括与碱金属的盐、与金属的盐、与有机碱的盐、与有机酸的盐和与无机酸的盐。本发明还包括VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的药物组合物或疫苗中的用途。而且，本发明包括VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸在制造用于抑制人脉络膜中新生血管形成的药物组合物或疫苗中的用途。本发明包括要施用于受试者以治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸。另外，本发明包括要与VEGFR-I肽和/或 编码它的多核苷酸一起施用于受试者以治疗和/或预防由人脉络膜中新生血管形成引起的疾病的VEGFR-2肽和/或编码它的多核苷酸。而且，本发明包括要与VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸一起施用于受试者以抑制人脉络膜中新生血管形成的VEGFR-2肽和/或编码它的多核苷酸。另外，本发明包括要与VEGFR-2肽和/或编码它的多核苷酸一起施用于受试者以抑制人脉络膜中新生血管形成的VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸。用于治疗或预防新生血■管性黄斑病变的试剂盒和用于抑制脉络膜中新生血■管形成的试剂盒本发明提供用于治疗和/或预防由脉络膜中新生血管形成引起的疾病的试剂盒，其至少包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸。本发明还提供用于抑制脉络膜中新生血管形成的试剂盒，其至少包含VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸。本发明的试剂盒中要包括的VEGFR-I肽可以单独个别存在，或者通过与药学可接受载体或媒介(或更具体地，灭菌水或生理盐水溶液、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性齐U、稳定剂、芳香剂、赋形剂、媒介、防腐剂、粘合剂、等等)适当组合，它们可以以配制剂或疫苗的形式存在。在将它们生产成疫苗时，可以包括佐剂以便有效建立细胞免疫，而且也可以包括用于新生血管性黄斑病变等等的其它活性组分。优选地，可以包括VEGFR-2肽。它们也可以制成颗粒配制剂。对于佐剂，可使用文件(Johnson AG. , Clin. Microbiol. Rev.,7:277-289,1994)等等中记载的那些。其它配制剂可以是脂质体制剂、通过结合至微米直径的珠子而生产的颗粒制剂、或脂质结合的制剂。本发明的试剂盒可进一步包括药学可接受载体或媒介，诸如上文描述的那些，使得制备药品的人能进行适当调整。用于治疗或预防新生血管性黄斑病变的方法和用于抑制脉络膜中新生血管形成的方法本发明进一步提供用于治疗和/或预防由脉络膜中新生血管形成引起的疾病的方法，包括对受试者至少施用VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸的步骤。而且，本发明提供用于抑制脉络膜中新生血管形成的方法，包括对受试者至少施用VEGFR-I肽和/或编码它的多核苷酸的步骤。
VEGFR-I肽可