专利名称：一种鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法鸭传染性浆膜炎又称为新鸭病、鸭败血症、鸭疫综合症、鸭疫巴氏杆菌病等，是由 鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer, RA)引起的一种接触性传染性疾病，多见于 1 8周龄的小鸭，尤以2 5周龄的雏鸭最为易感。潜伏期一般为2 5天，呈急性或慢 性败血症，临床上主要表现为眼、鼻分泌物增多、喘气、咳嗽、下痢、共济失调和头颈震颤，少 数慢性病例出现头颈歪斜等症状。病变以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎及部分 病例出现关节炎为特征，常引起小鸭的大批发病和死亡。是目前对养鸭业危害最为严重的 细菌性传染病之一。在自然条件下，本病一年四季都有发生。主要通过污染的饲料、饮水、尘埃、飞沫 等，经呼吸道、消化道或皮肤的伤口(尤其是足蹼部皮肤)而感染。不同品种鸭如番鸭、半 番鸭、北京鸭、樱桃谷鸭、狄高鸭、金定鸭、麻鸭等均易感。它的发生与鸭龄的大小、感染菌株 的毒力强弱、饲养管理条件的好坏、各种不良应激因素或其它病原感染有一定的关系，死亡 率一般在5 % 75 %，在有其它疾病混合感染时，死亡率可高达90 %以上。耐过鸭常生长不 良，增重缓慢，失去饲养价值，而且该病在发病鸭场能持续存在，引起不同批次鸭的感染发 病，给养鸭业造成严重的经济损失。由于RA病给养鸭业带来严重的经济损失，有关其免疫预防研究引起了越来越多 的关注。尽管RA血清型较多，各型之间基本无交叉保护作用，给疫苗的研制带来了较大的 困难，但关于RA疫苗的研究，还是引起了兽用生物制品领域科研人员的广泛关注并认为鸭 疫里默氏菌预防的根本措施还是接种疫苗。目前研究报道的RA疫苗主要有RA灭活疫苗 (只有一种血清型的单价灭活疫苗、含多种血清型的多价灭活疫苗)、RA和E. coli 二联灭 活疫苗、RA弱毒活疫苗、提取获得RA亚单位成分的亚单位疫苗。其中灭活疫苗效果确实， 就目前研究进展来说是鸭疫里默氏菌预防最好的选择，但目前国内多是自家场疫苗(即自 己小量生产，自己使用)，鸭疫里默氏菌灭活苗的配方和乳化生产工艺没有正规的程序，但 灭活疫苗的配方和乳化过程对疫苗质量十分重要，它不仅对接种动物的安全有影响，对疫 苗的质量也有直接的影响，是鸭疫里氏杆菌灭活疫苗生产的基础和关键之一，目前未有用 于工厂化大规模发酵生产鸭疫里氏杆菌灭活疫苗的配方和乳化工艺的效果报道。。
本发明目的在于提供一种鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法。本发明采用如下技术方案—种鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法，包括以下步骤水相制备4份吐温-80 装入瓶中灭菌，冷却后加入96份菌液，充分振摇，至吐温-80完全溶解为止；油相制备93份注射用白油、5份司本_80、2份硬脂酸铝，配油相时，先取少量注射 用白油与硬脂酸铝混合，加热溶化，再与全量司本-80及注射用白油混合均勻，搅拌至透明 为止，116°C灭菌30分钟，备用；将水相和油相按1 1.5-1 3的比例进行乳化，乳化转速3200-4800r/min，乳化 时间8-12分钟。所述的鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法，乳化时间为9 10分钟。所述的鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法，水相和油相混合比例为1 2。所述的鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法，乳化转速为4000r/min。采用本发明的乳化方法制备鸭传染性浆膜炎灭活疫苗为油包水型(W/0)，用清洁 吸管吸取少量疫苗滴于冷水中，呈油滴状不扩散，剂型合格率提高；疫苗在37°C左右条件 下放置21日，或取疫苗10ml装于离心管中以3000rpm/min离心15分钟，均不出现分层，稳 定性好；用1. 00ml吸管(出口内径1. 2mm)，吸取25°C左右的疫苗1. 00ml，令其垂直自然流 出，流出0. 4ml所需的时间均在8秒之内，粘度合格率高；外观为白色乳状液，色泽均勻，符 合要求。1.4硬脂酸铝购自上海远航化学试剂厂。1.5吐温-80购自成都东金化学试剂厂。1.5甲醛溶液AR、购自于成都鸿鹤试剂厂。2试验方法2. 1水相制备 4份吐温-80装入瓶中灭菌，冷却后加入96份菌液，充分振摇，至 吐温-80完全溶解为止。2. 2油相制备93份注射用白油、5份司本_80、2份硬脂酸铝，配油相时，先取少量 注射用白油与硬脂酸铝混合，加热溶化，再与全量司本-80及注射用白油混合均勻，搅拌至透明为止，116°C灭菌30分钟，备用。2. 3将培养的菌液分成4组，水相和油相比例分别按1 1.5、1 2、1 3的比例 进行乳化，在8分钟、9分钟、10分钟、11分钟、12分钟进行抽样检验乳化效果。同时对3批次实验室培养菌液进行乳化试验。2. 4对3批实验室培养菌液乳化时间按9 10分钟，乳化水油相比例设定为 1 2，分别按 3200r/min、3600r/min、4000r/min、4400r/min、4800r/min 的转速进行乳化， 并抽样作检验。3结果评估3. 1结果判定结合各条件下乳化效果进行判定。①外观应为均勻的白色乳状液。②剂型为油包水型(W/0)。用清洁吸管，吸取少量疫苗滴于冷水中，应呈油滴状 不扩散。③稳定性疫苗在37°C左右条件下放置21日，或取疫苗10ml装于离心管中以 3000rpm/min离心15分钟，应不出现分层。④粘度用1. 00ml吸管(出口内径1. 2mm)，吸取25°C左右的疫苗1. 00ml，令其垂 直自然流出，记录流出0. 4ml所需的时间。应在8秒之内为合格。3. 2试验的有效性本实验使用的理论和技术成熟，结果判定指标客观，整个实验 的各个环节严格操作、正确评估实验结果，结果如有疑议至少重复操作2次。每次试验培养 规模及条件设置稳定，由此认为本实验结果有效。4 结果4. 1乳化时间和乳化水油相比例结果见表1 表1乳化时间和乳化水油相比例优化结果


本发明公开了一种鸭传染性浆膜炎灭活疫苗乳化方法，包括以下步骤水相制备4份吐温-80装入瓶中灭菌，冷却后加入96份菌液，充分振摇，至吐温-80完全溶解为止；油相制备93份注射用白油、5份司本-80、2份硬脂酸铝，配油相时，先取少量注射用白油与硬脂酸铝混合，加热溶化，再与全量司本-80及注射用白油混合均匀，搅拌至透明为止，116℃灭菌30分钟，备用；将水相和油相按1∶1.5-1∶3的比例进行乳化，以3200-4800r/min的转速进行乳化，乳化时间8-12分钟。