一种瑞香狼毒提取物分散片的制作方法[0002]中药材瑞香狼毒，英文名:RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES，为瑞香科植物瑞香狼毒的干燥根。秋季采挖，除去杂质、晒干，药材呈纺锤形、圆锥形或长圆柱形，稍弯曲，单一或有分枝，长短不等，根头部有地上茎残迹，表面棕色至棕褐色，有扭曲的纵沟及横生隆起的皮孔和侧根痕，栓皮剥落处露出白色柔软纤维。体轻，质韧，不易折断，断面呈纤维状。皮部类白色，木部淡黄色。气微，味微辛，毒性比狼毒略低。[0003]其性味:辛，温；有毒，功能主治有:清热解毒，消肿，泻炎症，止溃疡，祛腐生肌。[0004]对瑞香狼毒化学成分分析表明，瑞香狼毒的根含留醇、酚性成分、氨基酸、三萜类、蒽甙、狼毒甙及有毒高分子有机酸。含香豆素类虎耳草素(pimpinelline)、异虎耳草素(isopimpinelline),异佛手柑丙酯(isobergapten)，牛防风素(sphondin),伞形花内酯(7-羟基香豆素，umbelliferone)，daphnoritin。还分得多种双氢双黄酮类狼毒素(chamae jasmine)，7_甲基狼毒素(7-methoxy chamae jasmin)，狼毒素甲基衍生物(chamae jasmenin A、B、C),新狼毒素 A、B (neochamae jasmin A and B),狼毒色原丽(chamaechromone),异狼毒素(isochame jasmin)。[0005]瑞香狼毒具有以下药物作用:[0006]抗肿瘤作用:动物实验表明瑞香狼毒对小鼠移植性肿瘤确有一定的抑制作用，如腹腔注射其醇提液或水提液对小鼠Lewis肺癌抑瘤率分别为70.2%及59.9% ;水提物对小鼠肝癌抑瘤率为36.8%，对小鼠宫颈癌14(U14)的抑癌率为48.5% ;挥发物对肝癌抑瘤率为42.5%，对U14的抑瘤率为50.5%，其抑瘤效果与农吉利(40.2%)，去甲基斑蝥素(38.2%)，氟脲嘧啶(39.0%)，长春新碱(43.8%)等相当或略高，因而认为该药具有显著的抗癌作用。[0007]抗菌作用:瑞香狼毒的有效成分狼毒素为一抗菌性物质，能抑制真菌、金黄色葡萄球菌与链球菌的生长。狼毒在试管内对大肠杆菌、宋内氏痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、绿脓杆菌及霍乱弧菌等7种革兰氏阳性肠内致病菌有抑制作用。狼毒的水浸剂(I: 3)在试管内对黄色毛癣菌、同心性毛癣菌、铁锈色小芽孢癣菌、许兰氏黄癣菌、奥杜盎氏小芽孢菌、羊毛状小芽孢癣菌、腹股沟表皮癣菌、星形奴卡氏菌等皮肤真菌均有不同程度的抑制作用。[0008] 抗惊厥、抗癫痫作用:瑞香狼毒发现具有抗癫痫活性，其六种粗提物对多种动物惊厥模型均有不同程度的抗惊厥作用，其中丙酮提取物抗癫痫作用更强，毒副作用更小。实验结果表明瑞香狼毒能有效对抗最大电休克惊厥发作，延长戊四唑诱发的惊厥发作潜伏期，提高惊厥阈值，同时能延长惊厥小鼠的存活时间，降低死亡率；对声源性惊厥发作也有较好的对抗作用；亦能明显提高刺激大鼠皮层运动区诱发惊厥阈值，进一步肯定该药具有抗惊厥作用。其抗惊厥作用机制与动物脑内氨基酸神经递质比例失衡有关，也可能与细胞凋亡等有关。
[0009]对免疫系统的作用:狼毒对Raji细胞内EB病毒有非常明显的诱导作用，药物浓度为I~100 μ g，EB病毒EA细胞阳性率为31.8%~52.0% ;并能显著地促进EB病毒对淋巴细胞的转化作用。还报道对EB病毒有激活作用的瑞香狼毒与促癌物TPA —样，能促进腺病毒5型转化鼠胚细胞。从而证明狼毒不仅对EB病毒有激活作用，而且对腺病毒转化细胞也有促进作用。
[0010]临床研究
[0011]治疗肿瘤:用瑞香狼毒挥发液、醇提物、水提物治疗恶性肿瘤54例，其中肝癌43例(II、III期占94%)，肺癌6例，宫颈癌I例，宫体癌I例，卵巢癌I例，胰腺癌I例，脑胶质癌I例。结果完全缓解3例，部分缓解9例，有效8例，改善14例，其客观有效率为63%。治疗结核病:用狼毒枣、狼毒膏治疗结核效果良好，除对肺结核未大力试用外，其他腺、骨、皮肤、副睾等结核患者，如无严重并发症及体力尚未过衰时，能坚持长期治疗，都能得到满意的痊愈或减轻的效果，对皮肤结核用狼毒膏疗法，更能加速收效。
[0012]治疗坐骨神经痛:狼毒药酒内服治疗坐骨神经痛50例，大部分患者用药2d后疼痛减轻，有效率90%。
[0013]现有的瑞香狼毒提取物，提取方法有多种，主要包括，水提，醇提，乙酸乙酯提，丙酮提，石油醚提，甲醇提等，还包括提取后用各种方法进一步的分离提取物如:用不同的色谱柱分离不同的活性物质。
[0014]现有瑞香狼毒制剂包括狼毒注射液，狼毒溶液(外用)，狼毒软膏等，主要活性成分是乙醇提取物或水提取物，由于提取工艺简单，其中含有大量混合成分，造成制剂副作用大，制剂稳定性差，疗效不佳。
[0015]采用纯度高的提取物，有些难以制成合适的制剂，有些稳定性差，有些难溶于水，生物利用度不闻等。
[0016]本发明对瑞香狼毒提取物进行了研究，找到一种合适的提取物，并意外的发现其兼具抗肿瘤作用和抗炎作用，具有治疗风湿性或类风湿性关节炎的前景，为此，本发明将该提取物制备成药物制剂，同时将其和其他抗肿瘤药物以及抗炎药物联合使用，具有显著增加现有药物疗效的作用，起到协同增效作用。本发明还对本发明的提取物进行了制剂方面的研究，找到了多种可以使用的制剂形式包括适合局部服用，胃肠道服用，非胃肠道服用的剂型，为中药的现代化提供了一种前景良好的产品。


[0017]本发明提供一种瑞香狼毒提取物，所述提取物由以下方法制备得到:
[0018]步骤1、将瑞香狼毒用丙酮和乙醇的混合溶液提取，得提取液；
[0019]步骤2、回收溶剂，浓缩干燥得到干浸膏，取大孔树脂与干浸膏混匀拌样；先用乙醇和乙酸乙酯的混合溶液作为流动相洗脱，然后改换乙醇作为流动相，洗脱得洗脱液，将该洗脱液回收乙醇后，浓缩干燥；
[0020]步骤3、将样品用制备液相色谱进一步进行梯度洗脱分离，收集不同时间流出的洗脱液，得到提取物。
[0021]优选的，本发明的提取物，其制备方法如下，[0022]步骤1、将Ikg瑞香狼毒药材粉碎后加入IOL丙酮:乙醇=2:1 (v:v)的混合溶液，加热回流I小时，滤出提取液，再次加入IOL丙酮:乙醇=2:1 (v:v)的混合溶液，加热回流I小时，滤出提取液，合并滤液得提取液；
[0023]步骤2、将合并后的提取液减压回收溶剂，浓缩干燥得到干浸膏85g，取HPD100型大孔树脂2kg，与干浸膏混匀拌样；首先，采用乙醇:乙酸乙酯=1:1 (v:v)5L作为流动相洗脱，然后改换95%乙醇5L作为流动相，洗脱得洗脱液，将该洗脱液回收乙醇后，浓缩干燥得到15g样品；
[0024]步骤3、将步骤2得到的样品用制备液相色谱进一步进行梯度洗脱分离，收集不同时间流出的洗脱液，得到提取物；其中，梯度洗脱的色谱洗脱条件为:色谱柱为制备柱YMC-PackPro C18; 30mmX 250mm,流动相A为水,流动相B为乙腈,梯度洗脱程序如下:
[0025]