苎麻属植物的萃取物、包含其的医药组合物及其在改善肝脏功能与治疗肝脏疾病中的用途制作方法苎麻属植物的
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专利名称::苎麻属植物的萃取物、包含其的医药组合物及其在改善肝脏功能与治疗肝脏疾病中的用途的制作方法苎麻属植物的萃取物、包含其的医药组合物及其在改善肝脏功能与治疗肝脏疾病中的用途技术领域:中熟知的其它助溶或分散剂,可将此种组合物制备成盐水溶液(solutioninsaline)。对于经直肠方式的给药而言,具有一种或更多的有效化合物的组合物也可以栓剂(suppository)的形式来给予。医药组合物中的载体必须是“可接受的”,其与配方的有效成分兼容(以及优选为具有稳定有效成分的能力),并且不对要被治疗的个体有害。一种或更多的助溶剂为了有效成分的递送而作为药理学上的辅药。其它载体的例子包括胶体二氧化硅(colloidalsilicondioxide)、硬脂酸镁、纤维素、烷基硫酸盐(例如月桂基硫酸钠,sodiumIaurylsulfate)与D&CYellow#10。通过体外或体内分析可测试化合物的功效。例如,通过体外分析可初步筛选本发明的化合物,而在体外分析中,就关于肝脏功能的化合物的生物活性进行测试。通过本技术领域:所熟知的体内方法,可进一步评估在初步筛选中显示具有高功效的化合物,以评估它们在治疗肝脏疾病,例如肝癌方面的活性。在本发明的另一个具体实施方案中,本发明也提供一种治疗肝脏疾病的医药组合物。此治疗肝脏疾病的医药组合物可包括作为活性成份的苎麻属植物的萃取物与医药上可接受的载体。在一个实施例中,苎麻属植物的萃取物为水萃物。上述肝脏疾病可包括,但不限于肝脏急性或慢性炎症(acuteorchronicliverinflammation)、月干纤维化(liverfibrosis)禾口/或月干硬化(livercirrhosis)。且在本发明的另一个具体实施方案中,本发明提供一种苎麻属植物的萃取物在制备用于改善肝脏功能的保健食品中的用途。在一个实施例中,于此所述的苎麻属植物的萃取物可通过上述的萃取过程来获得。在一个实施例中,于此所述的苎麻属植物可包括任一种苎麻属植物,优选为苎麻(BoehmerianiveaL.Gaud.)或山芒麻(BoehmerianiveaL.var.tenacissima)。在又一个实施例中,苎麻属植物为在上述萃取过程中唯一的药材。此外,在本发明的又另一个具体实施方案中,本发明提供一种苎麻属植物的萃取物在制备用于治疗肝脏疾病的药物中的用途。在一个实施例中,于此所述的苎麻属植物的萃取物可通过上述的萃取过程来获得。在一个实施例中,于此所述的苎麻属植物可包括任一种苎麻属植物,优选为苎麻(BoehmerianiveaL.Gaud.)或山芒麻(BoehmerianiveaL.var.tenacissima)。在又一个实施例中,苎麻属植物为在上述萃取过程中唯一的药材。上述肝脏疾病可包括,但不限于肝纤维化、肝硬化、肝脏急性或慢性炎症、B型肝炎病毒感染、C型肝炎病毒感染或肝癌。实施例1.植物性药物萃取物(botanicalextract)的制备将苎麻(BoehmerianiveaL.Gaud.)的根(2.5kg)于室温隔夜浸泡于水(50L)中。在将根移除后,将水溶液浓缩至含有约20%固体含量(solidcontent)的混合物,以产生682g的萃取物产物BL-Ol-Ol(经浓缩的溶液),其含有约20%重量的固体含量。将经浓缩的萃取物溶液的一部份进行冷冻干燥以产生干燥的固体产物。将被分离的根再隔夜浸泡于水(50L)中,之后将水移除,并重复此过程二次后,将根于水中进行回流(reflux)5小时并且之后冷却至室温。在从水中移出后,将根以相同方法再次进行回流4小时。将第二次回流过程的萃取溶剂进行冷冻干燥可得到96g干燥的萃取物产物(BL-01-12)。将苎麻(BoehmerianiveaL.Gaud.)的根(20g)于水QOOmL)中进行回流5小时,并且之后冷却至室温。在将根移除后,将萃取溶剂进行冷冻干燥以提供3.17g的萃取物产物(BL-02)。2.生物分析2.1实验材料与方法实验动物为雄性的斯普拉-道来(SpragueDawely)大鼠。本品系实验动物已有丰富的基础参考资料与数据,可适用于由四氯化碳(CCl4)所诱导的肝纤维化动物模型。实验动物饲养于光照时间自动控制为12小时的光亮-黑暗周期(light-darkcycle),温度控制在23士2°C,湿度控制在40-70%的房间。且允许大鼠自由取用食物及水。试验使用8周龄的大鼠。实验期间每日进行临床观察,并对于异常的症状及死亡的实验动物进行记录,并进行解剖以评估原因。除对照组为3只实验动物且不作任何处理外,其余实验动物分成6个处理组别,各试验组别包括8只实验动物,并以腹腔内(intraperitoneally)注射0.4ml/kg的CCl4(例如,1.67ml/kg,M%CCl4溶于橄榄油中)一周两次。也通过强饲(gavage)方式每天以下列之一来投予各处理组别达8周(1)溶剂,(2)水飞蓟素(silymarin)200mg/kg,(3)BL-01-12100mg/kg,(4)BL-01-12300mg/kg,(5)BL-01-12900mg/kg,以及(6)BL-01-01300mg/kgo在CCl4注射之前与在注射之后每两周一次直到第8周,从对照组与处理组动物的尾部抽取血液样本。将血液样本维持于室温1小时并在25°C以6000rpm离心10分钟以获得血清。以干式生化分析仪(KodakEktachemDT60II)分析丙氨酸转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)与天门冬氨酸转氨酶(aspartateaminotransferase,AST)的活性。值得注意的是,丙氨酸转氨酶与天门冬氨酸转氨酶在血液中的程度为肝脏功能的指针。#JALClinicalLaboratoryMedicine,Ed.byKennethMcClatchey,LippincottWilliams&ffilkins,2002,page288。在第8周结束时,将所有对照组与处理组的动物进行处死。将来自各个动物的肝脏的左叶固定于3.7%福尔马林(formalin)溶液中。将经固定的组织以下列30、50、70、95、99.5%乙醇与二甲苯(xylene)的顺序进行脱水,直到变透明。将二甲苯以石蜡(paraffin)取代。将石蜡包埋样本切成5μm厚的切片,并将其切片置于一玻璃玻片上并于37°C干燥以进行下述的天狼星红与固绿染色(Siriusred&Fastgreenstaining)进行胶原蛋白(collagen)染色。将肝脏切片以二甲苯处理三次,每次3分钟,以移除石蜡,并且之后将其以下列100、100、90、70、50%乙醇与TBST的顺序再水化(各3分钟)。之后,将经再水化的切片以0.天狼星红(Siriusred)与0.固绿(Fastgreen)进行染色1小时。在染色之后,将玻片以下列50、70、90、100与100%乙醇及二甲苯的顺序(各10秒钟)进行另一脱水的过程。它们被进一步以二甲苯处理三次并变透明。为了接下来的肝纤维化评估,将透明、经染色的肝脏切片以胶体固定并储存。将经固定的切片于OlympusDT70-BX51显微镜下进行检查并照相。根据Metavir评分系统的5种等级可评估肝纤维化(FO)无纤维化,(Fl)肝门的(portal)纤维化无隔膜(septa),(F2)肝门的纤维化具有少数隔膜,(F3)为数众多的隔膜无肝硬化(cirrhosis),(F4)肝硬化,如在Boigketal.,Hepatology,1997,26:643-649与Ruwartetal.,Hepatology,1989,10:801-806中所述。使用student’st_检验来测定显著性。统计显著性被采用于P值<0.05。2.2结果对于取自对照组及以(1)溶剂,(2)水飞蓟素(silymarin)200mg/kg,(3)BL-01-12100mg/kg,(4)BL-01-12300mg/kg,(5)BL_01_12900mg/kg,与(6)BL-01_01300mg/kg处理组别的动物的血液样本来分析天门冬氨酸转氨酶与丙氨酸转氨酶的值。结果如图1A、1B与IC所示。首先,参见图1A,其显示分析取自对照组及上述各处理组别动物的血液样本中的天门冬氨酸转氨酶的结果。相比于第2周,组别(2)-(5)的血液样本,其于第4周时在天门冬氨酸转氨酶的平均值方面具有大量的提升,但在组别(1)与(6)的血液样本中没有观察到此种变化。在第6周时,相比于组别⑴的血液样本,在组别(5)与(6)的血液样本中的平均天门冬氨酸转氨酶值显著地降低,且在组别(4)的血液样本中,其平均天门冬氨酸转氨酶值低于组别(的血液样本相当得多,又在组别(3)的血液样本中的平均天门冬氨酸转氨酶值,其大幅低于组别(1)与O)的血液样本的平均天门冬氨酸转氨酶值。在第8周时,在所有经处理样本中的平均天门冬氨酸转氨酶值降低至接近于对照组样本中的正常8参见图1B,其显示分析取自对照组及各处理组别动物的血液样本中的丙氨酸转氨酶的结果。相比于第2周,组别0)、(4)与(5)的血液样本,其于第4周时在丙氨酸转氨酶的平均值方面具有大量的提升,但在组别(1)、(3)与(6)的血液样本中没有观察到此种变化。在第6周时,相比于组别⑴的血液样本,在组别(6)的血液样本中的平均丙氨酸转氨酶值显著地降低,且在组别(4)与(的血液样本中,平均丙氨酸转氨酶值低于组别(3)的血液样本相当得多,而在组别(3)的血液样本中的平均丙氨酸转氨酶值,其大幅低于组别(1)与(2)的血液样本的平均丙氨酸转氨酶值。相比于第6周,在第8周时,来自经处理血液样本的平均丙氨酸转氨酶值降低,其接近于对照组样本中的正常值。再者,参见图1C,其显示取自对照组及各处理组别动物的血液样本中的天门冬氨酸转氨酶与丙氨酸转氨酶的比值。相比于第2周,在第4周时,组别(1)-(6)的血液样本,其在天门冬氨酸转氨酶/丙氨酸转氨酶比值方面具有大量的减低;在这6个组别的血液样本中,在组别O)、⑷与(5)的血液样本中的平均比值显著低于在组别⑴的血液样本与对照组样本中的平均比值。相比于第4周,在第6周时,在组别(4)-(6)的血液样本中平均比值具有大量的增加,且它们显著高于在组别(1)的血液样本中的平均比值。显著较高的天门冬氨酸转氨酶/丙氨酸转氨酶比值指出,在第6周时,在组别(4)-(6)的动物中的CCl4诱导的肝脏炎症显著降低。在与第6周结束时相比于第8周时提升的平均比值之中,仅有组别(6)的血液样本具有显著高于组别(1)的血液样本的比值。如前所述在第8周结束时,将所有对照组与处理组的动物进行处死。并根据此在8周长的实验结束时所获得的肝脏组织的病理学检查,以判定各组别的肝纤维化程度,并将分数计算结果显示于图2中。结果如图2所示,组别(6)的动物比起组别(1)-(5)的动物的肝纤维化程度具有明显减少改善的趋势。组别(6)的动物用测试物质BL-01-01进行处理。因此,BL-01-01在避免肝纤维化上显示出预料不到的优越功效。3.急性肝脏炎症模型以雄性斯普拉-道来大鼠作为测试由硫代乙酰胺(thioacetamideJAA)诱发急性肝脏炎症的动物模型。于大鼠腹腔注射硫代乙酰胺前M小时及腹腔注射硫代乙酰胺后第24,48小时,以隐静脉采血方式采集约0.3ml血液以作为血液生化值分析。各试验组别详述如下。大鼠分别以(1)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(溶液),(2)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(经冷冻干燥),(腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予500mg/kgBL_02(经冷冻干燥)进行处理,且以类似于上述的方法将大鼠的血液样本进行分析以测定天门冬氨酸转氨酶与丙氨酸转氨酶的值。结果分别显示于图3A至图3F中。图3A显示组别(1)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(溶液)与组别(2)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(经冷冻干燥)的天门冬氨酸转氨酶活性。图:3B显示组别C3)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予500mg/kgBL-02(经冷冻干燥)的天门冬氨酸转氨酶活性。第3C图显示组别(1)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(溶液)与组别(2)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(经冷冻干燥)的丙氨酸转氨酶活性。图3D显示组别C3)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予500mg/kgBL-02(经冷冻干燥)的丙氨酸转氨酶活性。图3E显示组别(1)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(溶液)与组别(2)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予300mg/kgBL-01-01(经冷冻干燥)的天门冬氨酸转氨酶比丙氨酸转氨酶的比值。图3F显示组别C3)腹腔注射300mg/kg硫代乙酰胺与口服投予500mg/kgBL-02(经冷冻干燥)的天门冬氨酸转氨酶比丙氨酸转氨酶的比值。结果显示,在硫代乙酰胺处理后的M与48小时,BL-01-01(经浓缩溶液)显著抑制天门冬氨酸转氨酶的值增加;在硫代乙酰胺处理后的M与48小时,BL-01-01(经冷冻干燥)显著抑制丙氨酸转氨酶的值的增加;而在硫代乙酰胺处理后的对与48小时,BL-02(经冷冻干燥)并无显著抑制天门冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶的值增加。因此,在治疗急性肝脏炎症上,BL-01-01(溶液)与BL-01-01(经冷冻干燥)比BL-02效果更佳。4.其它实施例可将本说明书披露的所有特征结合成任何组合。通过具有相同、相等或相似目的的替代特征可取代披露于本说明书中的各个特征。因此,除非以别的方式特别叙述,所披露的各个特征仅为相等或相似特征的通用系列的一个实施例。虽然本发明已以优选实施例披露如上,然而其并非用以限定本发明,任何熟习此技术者,在不脱离本发明的精神和范围内,当可作些许变动与修饰,因此本发明的保护范围当以权利要求书所界定者为准。权利要求1.一种医药组合物,其通过萃取过程来制备,该萃取过程包括浸泡苎麻属植物(Boehmeriaspecies)的一部份于水中;移除该苎麻属植物的该部分以获得溶液;以及浓缩该溶液以提供医药组合物,其中该苎麻属植物为在该萃取过程中的唯一药材。2.如权利要求1所述的医药组合物,其中该苎麻属植物为苎麻(BoehmerianiveaL.Gaud.)或山芒麻(BoehmerianiveaLvar.tenacissima)。3.如权利要求1所述的医药组合物,其中浸泡温度在20°C至70°C之间。4.如权利要求3所述的医药组合物,其中浸泡温度在25°C至40°C之间。5.如权利要求1所述的医药组合物,其中浸泡时间为2-M小时。6.如权利要求1所述的医药组合物,其中该萃取过程还包括通过色谱技术来增加在经浓缩的溶液中的有效成分的步骤。7.如权利要求6所述的医药组合物,其中该色谱技术为柱色谱技术或高效液相色谱技术。8.如权利要求7所述的医药组合物,其中使用于该色谱技术中的洗脱液包括H20、CH3CN,CH3OH或其混合物。9.一种苎麻属植物的萃取物在制备用于改善肝脏功能的保健食品中的用途,其中该苎麻属植物的萃取物通过萃取过程来制备,该萃取过程包括浸泡苎麻属植物(Boehmeriaspecies)的一部份于水中;移除该苎麻属植物的该部分以获得溶液;以及浓缩该溶液以提供萃取物,其中该苎麻属植物为在该萃取过程中的唯一药材。10.一种苎麻属植物的萃取物在制备用于治疗肝脏疾病的药物中的用途,其中该苎麻属植物的萃取物通过萃取过程来制备,包括浸泡苎麻属植物(Boehmeriaspecies)的一部份于水中;移除该苎麻属植物的该部分以获得溶液;以及浓缩该溶液以提供萃取物,其中该苎麻属植物为在该萃取过程中的唯一药材。11.如权利要求10所述的苎麻属植物的萃取物在制备用于治疗肝脏疾病的药物中的用途,其中该肝脏疾病包括肝纤维化、肝硬化、肝脏急性或慢性炎症、B型肝炎病毒感染、C型肝炎病毒感染或肝癌。12.—种治疗肝脏疾病的医药组合物,包括作为活性成份的苎麻属植物的萃取物与医药上可接受的载体。13.如权利要求12所述的医药组合物,其中该苎麻属植物的萃取物为水萃物。14.如权利要求12所述的医药组合物,其中该肝脏疾病包括肝脏急性或慢性炎症、肝纤维化和/或肝硬化。全文摘要本发明涉及一种由苎麻属植物(Boehmeriaspecies)所制备的医药组合物和/或健康食品。此医药组合物和/或健康食品可用于改善肝脏功能及治疗肝脏疾病,并促进肝脏组织再生(livertissueregeneration)。文档编号A23L1/29GK102552344SQ20111042788公开日2012年7月11日申请日期2011年12月19日优先权日2010年12月27日公开号201110427884.发明者刘婉淳,李连滋,林孟男,石英珠,蔡蕙冰申请人:财团法人工业技术研究院
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