专利名称：黄芪总苷提取物新用途及其制备方法中药黄苗(Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge.)中含有活性较强的三蔽阜 苷、黄酮类、多糖类、氨基酸和微量元素。黄芪总皂苷，是由中药黄芪提取分离总皂苷而获得 的中药有效部位提取物，即黄芪总苷。该药物具有强心功能可用于治疗心衰；尤其具有扶正 祛邪、益气养元、养心通脉的功能，用于心气虚损、血脉瘀阻之病毒性心肌炎，症见胸闷、心 前区隐痛、心悸、头晕、气短、乏力、脉沉弱、细涩或结代者。其中黄芪甲苷(astragaloside IV)为其主要活性成分。药理学实验表明黄芪甲苷有抗炎、镇痛、镇静作用，并增加血浆中的 cAMP和再生肝DNA的含量等作用。另外的黄芪甲苷同系物有乙酰黄芪皂甙I (Acetylastragaloside 1,1), 黄苗阜试 I (astragaloside 1,2),异黄苗阜试 I (isoastragalosidel,3),异黄苗 阜试 II (Isoastragaloside 11,4),黄苗阜试 II (astragaloside 11,5)；黄苗甲试 (astragaloside IV，6)。结构式见参考文献1、2。许多研究文献报道化合物1，2，3，4，5在 碱性溶液中可能会发生乙酰基转移和去乙酰基作用，如化合物4可能会发生乙酰基转移转 化为5，也可能会去乙酰基转化为6。专利CN1425674公开黄芪总苷的制备方法，为水提_大孔树脂分离法，所得的黄芪 总苷提取物中黄芪总苷含量为80-98%，黄芪甲苷含量为50-80%，在制备过程中，用碱性 水溶液脱色，使黄芪甲苷同系物部分转化成黄芪甲苷；专利CN1470241公开了一种黄芪甲 苷药物组合物，其黄芪甲苷的含量在50%以上，尤其大于75%;专利CN1444949公开黄芪总 苷提取物，含黄芪总苷达85-90%，总苷转移率在80%~85%,采用醇提-大孔树脂分离_水 液饱和的正丁醇萃取-大孔树脂分离-甲醇溶解，硅澡土搅拌。以上工艺中均采用了碱水 处理，使黄芪甲苷同系物部分转化成黄芪甲苷。众所周知，黄芪甲苷为黄芪皂苷的指标成分，但并不一定是黄芪甲苷含量越高越 好。植物中获得的一系列同系物间往往有协同作用，所以一般不使用植物中的有效纯化合 物，而使用植物有效部位。使同系物按一定比例保留在原药材的有效部位提取物中从而在 药效和生产成本等方面达到最佳效果，就显得非常重要。
本发明的技术方案是提供了一种新的黄芪皂苷提取物，本发明还提供了该黄芪皂 苷提取物的制备方法、含有该黄芪皂苷提取物的药物组合物及其制备方法。本发明提供了黄芪总苷提取物，其中黄芪总苷的重量百分含量占总提取物的 80-100%，其中黄芪甲苷的百分含量占总提取物的6-50%。进一步地，黄芪总苷的重量百分含量占总提取物的80-90%，其中黄芪甲苷的百分 含量占总提取物的15-50%。更进一步地，黄芪总苷的重量百分含量占总提取物的80-90%，其中黄芪甲苷的百 分含量占总提取物的20-50%。上述黄芪总苷提取物，它是以药材黄芪为原料，按如下方法制备a、以中药黄芪，加水煎煮或10-80%乙醇渗漉，合并煎煮液或渗漉液，减压浓缩，得 黄芪浓缩液；b、将a步骤制备的提取液冷却后进行醇沉、静止，过滤得滤液，滤液通过吸附树脂 柱、弃去流出液，用水洗至流出液至无色，弃去水洗液；C、将b步骤的水洗后的吸附树脂柱用甲醇、乙醇、丙酮、含水甲醇或含水丙酮中的 一种或多种洗脱，收集洗脱液，浓缩；d、将c步骤的浓缩液加醇醇沉，过滤，收集滤液；浓缩干燥，即得黄芪总苷提取物。进一步的，它是以药材黄芪为原料，按如下方法制备a.以中药黄芪，加水煎煮或10-80%乙醇渗漉，合并煎煮液或渗漉液，减压浓缩， 得黄芪浓缩液；b、将a步骤的浓缩液加乙醇至含醇量达50% -80%，在0°C _5°C冷藏静置，对 36小时，滤过，滤液浓缩至每毫升相当于0. 5-1. 0克生药，冷藏静置，24 36小时，滤过；取 滤液通过大孔吸附树脂柱，水洗至近无色；C、用稀乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至无醇味，冷藏静置，滤过；d、将c步骤的浓缩液加乙醇至含醇量达70% -90%,冷藏静置，滤过，回收乙醇，煮 沸，滤过，即得黄芪总苷提取物。其中，c步骤所用的大孔树脂为非极性或/和弱极性大孔吸附树脂，型号为树脂可 选用HPD100、HPD300、D101、HPD100A、HPD700、LD140以及其他类型的大孔吸附树脂，或以上 不同型号的大孔吸附树脂按一定比例混合。其中，c步骤中所述的洗脱液是50-98%乙醇。本发明还提供了该黄芪总苷提取物的方法，它包括如下步骤取处方量黄芪，加水10倍量煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压 浓缩至每Iml相当于原生药l_2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达60%，冷藏静置M小时，滤 过，取滤液回收乙醇，冷藏静置M小时，滤过。取滤液通过HPDltltl柱，水洗至近无色，用75% 乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加 95%乙醇至含醇量达85%，冷藏静置M小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量 (12. 5g生药/ml)，密封，冷藏M小时以上，滤过即得。本发明还提供了一种药物组合物，它是含有由治疗有效量黄芪总苷提取物为活性 成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。其中，所述的制剂是丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂。本发明还提供了该药物组合物在制备治疗和预防病毒性心肌炎、心力衰竭药物中 的应用。本发明提取物中黄芪总苷的重量百分含量占提取物的80-100%，其中黄芪甲苷占 黄芪总苷的6-50%。本工艺的基础工艺路线为本提取方法采用水提-醇沉-大孔吸附树 脂柱吸附-醇沉方法。以黄芪甲苷含量作为评价指标，在整个工艺过程中没有用碱水处理， 最大限度地保留了中药黄芪中黄芪甲苷的同系物。总苷含量高、纯度高，溶解性大于黄芪甲 苷，并具有更明确的质量控制指标，尤其可以制备含量高的黄芪注射液、不用添加任何助溶 剂和稀释剂。该方法与现有技术相比具有成本低、无有机溶剂残留、以及生产过程中无环境 污染，黄芪总苷中黄芪甲苷同系物溶解性大于黄芪甲苷，在病毒心肌炎小鼠的治疗中具有 协同增效作用。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离 本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
图1黄芪总苷和注射液薄层层析对比示意图，其中，a、黄芪总苷薄层层析；b、注射 液薄层层析；C、乙酰黄芪皂甙I薄层层析；d、黄芪皂甙I薄层层析；e、异黄芪皂甙I薄层层 析；f、异黄芪皂甙II薄层层析；g、黄芪皂甙II薄层层析；h、黄芪甲甙薄层层析；i、黄芪药 材薄层层析；j、黄芪甲甙同系物薄层层析。

实施例3本发明黄芪总苷提取方法取处方量黄芪饮片厚片，山西省产)，加水8倍量煎煮两次，每次1. 5小时， 合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度70°C ；真空度-0. OSMpa)至每Iml相当于原生药 2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达85%，冷藏静置48小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷藏静置 M小时，滤过。取滤液通LD140，水洗至近无色，用75%洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙醇 并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加95 %乙醇至含醇量达85 %，冷藏静置36 小时，滤过回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量。(12. 5g生药/ml)，密封，冷藏M小时 以上，滤过，检验，即得黄芪总苷提取物3。实施例4本发明黄芪总苷提取方法取处方量黄芪饮片厚片，甘肃陇南产)，加水10倍量煎煮三次，每次1小 时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度70°C;真空度-0. OSMpa)至每Iml相当于原生 药2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达60%，冷藏静置M小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷藏静 置M小时，滤过。取滤液通HPD100，水洗至近无色，用80%洗脱，收集洗脱液，滤过，回收乙 醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加95%乙醇至含醇量达85%，冷藏静置 24小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量(12. 5g生药/ml)，密封，冷藏M小时 以上，滤过，检验，即得黄芪总苷提取物4。实施例5本发明黄芪总苷提取方法取处方量黄芪饮片(2_4mm厚片，甘肃陇南产)，加水10倍量煎煮三次，每次1小 时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度70°C ；真空度-0. OSMpa)至每Iml相当于原生 药2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达60 %，冷藏静置M小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷藏静 置M小时，滤过。取滤液通过HPD300柱，水洗至近无色，用75%乙醇洗脱，收集洗脱液，滤 过，回收乙醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加95%乙醇至含醇量达85%， 冷藏静置M小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量(12. 5g生药/ml)，密封，冷 藏M小时以上，滤过，检验，即得黄芪总苷提取物5。实施例6本发明黄芪总苷提取方法处方量黄芪饮片(2_4mm厚片，甘肃陇南产)，加水10倍量煎煮三次，每次1小时， 合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩(温度70°C ；真空度-0.08Mpa)至每Iml相当于原生药 2g，用95%乙醇沉淀至含醇量达60%，冷藏静置M小时，滤过，取滤液回收乙醇，冷藏静置 M小时，滤过。取滤液通过柱D101，水洗至近无色，用75%乙醇洗脱，收集洗脱液，滤过，回 收乙醇并浓缩至IOg生药/ml，冷藏静置M小时，滤过；加95%乙醇至含醇量达85%，冷藏 静置M小时，滤过；回收乙醇，煮沸30分钟，加水至规定量(12. 5g生药/ml)，密封，冷藏M 小时以上，滤过，检验，即得黄芪总苷提取物6。实施例7本发明黄芪总苷提取物中黄芪总苷、黄芪甲苷的测定黄芪总苷提取物中黄芪甲苷采用蒸发光散射检测HPLC法检测。黄芪总苷采用紫 外分光光度法检测，香草醛-乙醇作为显色剂时。表1本发明黄芪总苷提取物中黄芪总苷、黄芪甲苷的含量(mg/ml)


本发明提供了黄芪总苷提取物及其新用途，其中，黄芪总苷的重量百分含量占提取物的80－100％，黄芪甲苷的百分含量占总提取物的6-50％。本发明还提供了该黄芪总苷提取物的制备方法。该方法与现有技术相比具有成本低、无有机溶剂残留、以及生产过程中无环境污染等，黄芪总苷中黄芪甲苷同系物在水中的溶解度大于黄芪甲苷，便于制剂，在病毒心肌炎小鼠的治疗中具有协同增效作用。