专利名称：一种用活体螺旋藻制备螺旋藻多肽粉的方法螺旋藻体内优质高蛋白含量高达60 70%，是鱼类的3倍，是肉类的4倍，是鸡蛋 的5倍多，而叶绿素含量是蔬菜的10倍多。此外，维生素B3的含量大约是大豆的6. 4倍；β-胡萝卜素大约是普通胡萝卜中含量的4倍；螺旋藻中大约含有11种脂肪酸，其中的亚油酸和亚麻酸都是人体必需脂肪酸；螺旋藻含有人和动物必需的常量和微量元素，不但含有大量的铁，而且可以与蛋白质和藻蓝素螯合形成有机铁，因而有利于被吸收利用；同时螺旋藻具有富集硒、锌、碘的能力。螺旋藻是一种理想的营养保健品，市场前景美好。目前螺旋藻的应用存在如下问题其一，螺旋藻有较浓的腥味，口味较差。其二，为增强吸收，螺旋藻通常要制备成螺旋藻多肽，目前制备螺旋藻多肽通常是使用螺旋藻干粉加水配制成悬浊液，再用生物酶工程技术水解螺旋藻蛋白制备螺旋藻多肽，但螺旋藻干粉活性成份已大量损失，使最终产品活性不足。其三，现有的一般生物酶工程技术水解螺旋藻蛋白制备螺旋藻多肽的方法酶解程度较低，有效酶解时间较短，提取率较低，原料浪费严重。现有技术中，CN101095458A所公开的螺旋藻多肽的制备方法，其包括了干粉配制溶液、中性蛋白酶脱腥、细胞破壁、酶法水解(纤维素酶和果胶酶、木瓜蛋白酶)、离心过滤、浓缩干燥等步骤，采用酶解(中性蛋白酶)和物理处理环糊精包裹)相结合的办法进行脱腥。另外，CN1204651A公开了螺旋藻多肽的制备方法及含有这些多肽的药剂和应用，所述方法使用螺旋藻干粉，在酸性、碱性或中性环镜中借助镁、钙、磷、硒等离子水解催化，并结合多种水解蛋白酶以得到螺旋藻多肽。上述方法中均采用螺旋藻干粉为原料，选择细胞破碎提取蛋白质。
本发明的目的是提供一种用活体螺旋藻制备螺旋藻多肽粉的方法，已解决现有的螺旋藻干粉提取螺旋藻多肽方法提取率低，成品多肽含量少，口味差的缺点。此方法提取率高，能有效的保持螺旋藻多肽产品的活性成分，同时此方法制备的螺旋藻多肽无腥味，口味较好。本方法相对于现有技术中螺旋藻多肽的制备方法的优点在于(I)采用活体螺旋藻为原料制备螺旋藻多肽，比起现有技术采用螺旋藻干粉为原料，能增加最终产品的活性，并且在制备工艺上能减少前处理的步骤，提高生产效率；(2)在脱腥处理上，出乎意料的发现，采用风味蛋白酶能很好的解决螺旋藻多肽腥味大及口味差的问题，比现有技术中采用酶解后再用环糊精包裹的技术更为简便，更利于生产扩大化；(3)选择红曲霉用于酶解螺旋藻，显著延长酶解时间，使藻泥酶解充分，提高提取率。(4)选择最优的酶解方案，即通过碱性蛋白酶、风味蛋白酶、红曲霉组合以提高螺旋藻多肽的水解度，并且通过试验确定了最优的酶解试验的参数。本发明的技术方案如下(1)活体螺旋藻过滤清洗、浙水处理；将活体螺旋藻过滤清洗，调节pH后将藻泥进行浙水处理，使藻泥的含水量达到小于 90%。(2)第一步酶解碱性蛋白酶； 将处理好的藻泥装入反应罐内，加入碱性蛋白酶，完成第一步酶解反应。(3)第二步酶解风味蛋白酶；在第一步酶解完成后加入风味蛋白酶，完成第二步酶解反应。(4)第三步酶解红曲霉；在第二步酶解完成后加入红曲霉，完成第三步酶解反应。(5)喷雾干燥。使用喷雾干燥塔喷雾干燥，所得即为活体螺旋藻多肽粉。现有技术中评价螺旋藻多肽制备方法常采用的指标是螺旋藻蛋白的水解度，本发明相对于现有技术中螺旋藻多肽的制备方法的优点除了提取率高，水解度高之外，由于采用活体螺旋藻为原料制备螺旋藻多肽，比起现有技术采用螺旋藻干粉为原料，能增加最终产品的活性。因此，本发明还引入螺旋藻多肽的活性的测定。(一)实验方法1、螺旋藻蛋白水解度的测定蛋白质水解度的测定采用pH-stat法(Adler-Nissen, 1986),螺旋藻蛋白水解度(DH)以水解断裂的肽键数目(h)占总键数目(htJ的百分数来确定，即DH = h/htotX100%2、螺旋藻多肽的活性的测定螺旋藻中藻蓝蛋白是一种具有生物活性功能的天然藻蓝素蛋白，是螺旋藻中重要的活性物质。因此，测定螺旋藻多肽中藻蓝蛋白的含量能较好的反映螺旋藻多肽的活性。藻蓝蛋白浓度的测定，参考[曲文娟等，钝顶螺旋藻蓝蛋白的脉冲超声辅助提取技术，食品科学，2007年5期，135-138]中的方法，藻蓝蛋白的特征吸收在620nm，异藻蓝蛋白的特征吸收在650nm。提取液中藻蓝蛋白浓度(C)按公式(I)计算C= (A620nm-O. 474A650nm)/5. 34, (mg/ml)3、不同酶解配方对螺旋藻蛋白水解度的影响酶法水解蛋白质是目前获得多肽的主要途径，该方法优点是节约成本、产品安全性高、无副作用。水解用酶的选择是生产螺旋藻多肽的关键。本实验选用了常见的商业化的蛋白酶及红曲霉处理螺旋藻，均采用在35°C，水解60、90、120、180分钟。本发明所用蛋白酶及红曲霉均由市面上购得，蛋白酶包括碱性蛋白酶(酶活力为40万U/g)、风味蛋白酶(酶活力为I. 5万U/g)、木瓜蛋白酶。结果见表I。表I不同酶解配方对螺旋藻蛋白水解度(DH(% ))的影响一种用活体螺旋藻制备螺旋藻多肽粉的方法。现有制备螺旋藻多肽通常是使用螺旋藻干粉加水配制成悬浊液，再用生物酶工程技术水解螺旋藻蛋白制备螺旋藻多肽，但螺旋藻干粉活性成份已大量损失，使最终产品活性不足，提取率低，不能消除螺旋藻的腥味。本发明采用活体螺旋藻为原料，通过碱性蛋白酶、风味蛋白酶、红曲霉三步酶解法制备螺旋藻多肽粉，本发明具有提取率高，能有效的保持螺旋藻多肽产品的活性成分，制备的螺旋藻多肽无腥味，口味较好的优点。