专利名称：至少一种漆树科植物萃取物在化妆品或护肤药品中的应用的制作方法图1是在试管中，厚皮漆树树皮的水萃取物对酪氨酸酶的所得抑制试验结果的示图，所有结果(Cl50值)概括于下表1中。表1在试管中对厚皮漆树萃取物的酪氨酸酶抑制的检测数值＝Cl50，％，重量/体积。 图2是对B16-黑素细胞所得的试验结果(统计结果，平均值+-标准偏差，二次试验，重复3次)的示图，如图2所示的全部类似试验结果列于表2。表2检测厚皮漆树树皮的水萃取物对B16-黑素细胞在体外抑制黑素的形成，值l为对B-16黑素细胞的活性指数。 这两个试验系列表明依本发明而获得的厚皮漆树萃取物具有强的抑制黑素形成能力，这种能力至少部分是由抑制酪氨酸酶能力所引起的。这一特性可用于局部治疗皮肤超色素，如老化色斑的治疗。II)检测厚皮漆树萃取物的抗自由基能力自由基(RL)是活化的化学种类，它的特征通过一个自由的、不成双地结合的电子来体现。它们可由内生分子，如不饱和类酯物、某种氨基酸或在一般的代谢作用的自发的酶催反应时或在炎症诱导时产生的氧所组成，某种应激反应下，如UV-辐射或环境污染可促进它们的生成。如果过量，会引起活性组织成分(类酯物、蛋白质、糖、ADN等)的损害。这种自由基的毒性由于氧的存在而增强，引起活性组织的衰老及严重的病变，如皮癌。厚皮漆树萃取物的抗自由基能力可通过在试管中的化学、生物化学试验来评价，这些试验不仅涉及到氧的原始基的形式，还涉及活性氧的诱导形式，实验是在合成基质上、天然基质上、如胶原和皮肤糖蛋白上进行，这些物质对氧的反应性形式活性(FRO)非常敏感。
试验还在体外培养基中在人体的成纤维细胞上进行试验，这一试验评价厚皮漆树萃取物对UV-A的细胞的光保护能力。
用UV-A作研究模型，因为它渗入真皮，在皮肤中引起一氧化应力，该应力尤其通过胞质膜的脂过氧化而表现，所形成的脂过氧化物分裂为丙二醛(Malonaldialdehyd)，这引起大量生物分子如蛋白质以及核素基(诱变剂)的网状化(酶-抑制)。a)DPPH°试验DPPH(二苯苦基-偕腙肼)是一种稳定的、自由的、紫色的基，它在白色化合物中通过接受自由基的物质而改变(“Scavenger”或Koder效应)。
试验结果是在有活性物质时，以白色化合物的比值来表示(与没有活性物的对照物相比，％)。
结果列于表III。
表III检测厚皮漆树萃取物的抗自由基效应。抗DPPH°试验形成的白色化合物的比值(对对照物的比值，二次试验的平均值)。
b)抗羟基试验(HO°)带有脱氧核糖的抗HO°试验(Fenton-反应)。
该试验评价生物活性物消除HO°的能力，HO°由Fenton反应产生(H2O2于铁存在时)。
HO°可通过脱氧核糖而产生，脱氧核糖是重要的ADN化合物，先氧化再被HO°断开。脱氧核糖的氧化产物由于与硫代巴比土酸缩合而产生(532nm时测量光密度)。这一试验在有和没有EDTA情况下进行，目的是确定萃取物与铁形成惰性络合物的能力(Ferriprive效应)。
试验结果示于下表IV.1和IV.2，该结果证明了厚皮漆树萃取物的抗羟基效应，试验以脱氧核糖进行(Fenton反应)(结果以百分率表示阻止羟基化的比例二次试验平均值)。
IV.1)Fenton反应，带EDTA
IV.2)Fenton反应，不带EDTA
c)生物化学或酶催化试验抗阴离子-过氧化物-效应(O2-)O2-是在氧化应力下通过酶黄嘌呤-氧化酶(XOD)的导入而产生的，该酶在能量的代谢作用下发生障碍或停止时，在生物组织内分解多余的次黄嘌呤(HX)。
O2-是有毒的，特别是由于它的自生能力或有过氧-歧化酶(SOD)存在时，产生过氧化氢(H2O2)，它通过Fenton-反应形成HO°源。
生物化学试验在存在XOD时以HX进行，O2-是通过鲁米诺(luminol)，一种与过氧化物酶的混合物而产生，O2-和H2O2也产生，或通过四唑鎓盐(NBT)而形成一种红色的在540nm时可检测的化合物。
结果列于下表V.1)、V.2)和V.3)。它们证明了厚皮漆树萃取物抗阴离子-过氧化酶的效应。
V.1)试验，有鲁米诺结果以抑制百分率表示(二次试验的平均值)。
V.2)试验，有鲁米诺+微过氧化酶结果以抑制百分率表示(二次试验的平均值)。
V.3)试验，有NBT结果以抑制百分率表示(二次试验的平均值)。
*对胶原型1的抗单氧效应胶原是一种皮肤糖蛋白质，对氧或FRO的反应形式的活性非常敏感，且已证明，单氧(O21)在蛋白质下引起干扰性交联。
本试验原则在有光化学的O21呈现的系统时，以胶原1型水溶液的黏度测量为基础。
O21通过UV-A存在下的核黄素而产生，引起葡萄糖存在时的胶原的凝胶化，这通过黏度增加而表现，这种效应可通过释放O21的分子而抑制，如硫脲或氨基胍。
黏度通过“Canon-Fenske”的黏度仪的毛细管的通过时间来测定。
结果列于下表VI，它突出表现了厚皮漆树萃取物对胶原I型的光保护作用，结果以抑制百分率表示。
表VI
d)对人体成纤维细胞上的抗UV-A细胞光保护试验本试验评价依本发明获得的厚皮漆树萃取物针对人体成纤维细胞的UV-A的光保护能力。
UV-A选作研究模型，因为它渗入真皮中，并在皮肤中引起一个氧化应力，该应力尤其通过胞质膜的脂过氧化作用而产生，所形成的脂过氧物分裂为丙二醛，这引起大量生物分子如蛋白质(酶抑制)以及核素基(诱变)的网状化(酶-抑制)。
将成纤维细胞接种到一有胎牛血清的营养基中，接种2至3天后加入厚皮漆树萃取物，在37℃，CO2＝5％下培养2-3天，营养基由盐溶液代替，成纤维细胞用UV-A-计量辐射(15J/cm2)。
辐射结束后，测量盐溶液表面上漂浮的MDA比率，对在成纤维细胞中的蛋白质比率也进行测量，MDA通过硫代巴比土酸和蛋白质的反应，以Bradford法计量。
结果列于下表VII.1和VII.2，它们表明了厚皮漆树萃取物对人体成纤维的细胞光保护作用。结果是以辐射的对照物的百分比表示，以及对没有被辐射的对照物(蛋白质)的比值表示，1，2试验以三次试验的平均值表示。
表VII.1)
表VII.2)
不同的试验结果表明，厚皮漆树萃取物有极强的消除(“编码”)自由基、羟基和过氧化阴离子的能力，这种抗自由基活性在胶原1型的光保护试验和在体外培养基的人体成纤维细胞的光保护试验中再次得到证明。
这一活性至少部分是抵抗自由基和氧的反应性形式(自由基-羟基，阴离子-过氧化物和单氧)的Koder-效应(或“清除剂(Scavenger)”)，以及一种铁的螯合效应，这由抗HO°活性得到证明，这一活性在缺少EDTA情况下比有EDTA时更大。
这些不同试验结果清楚证明，依本发明而得到的厚皮漆树萃取物，因其细胞光保护活性而适用于皮肤或上表组织形成的保护剂，消除衰老、环境污染、炎症和刺激(治疗敏感性皮肤)。
III.检测厚皮漆树萃取物的抗蛋白酶效应由炎症存在时的亲中子的多晶核(PNN)或通过成纤维细胞的UV-A辐射而分离出的蛋白酶，引起蛋白质的衰亡，这些蛋白质构成真皮的外细胞基层。
因此，PNN分离出弹性蛋白酶(丝氨酸-蛋白酶)，当老的或经辐射的成纤维细胞分离出具有弹性蛋白酶和胶原酶活性的金属蛋白酶时，它积极作用于弹性蛋白、蛋白聚糖和胶原上。
这二种蛋白酶类型在试管反应中通过酶催促反应进行评价。a)抗弹性蛋白酶试验试验在试管中以一种有二类基质的胰腺(丝氨酸-蛋白酶)的弹性蛋白酶进行一种是合成的、彩色的(显色的)培养基，一种是天然基质，与刚果红结合的弹性蛋白组成。
室温下持续培养30分钟，在410nm和520nm测量其染色。
作为对比试验的对照试样是1抗胰蛋白酶。
结果列于下表VIII和IX。
表VIII厚皮漆树萃取物的抗弹性蛋白酶活性的检测。其中利用与刚果红结合的弹性蛋白方法，结果以抑制百分率表示。
N.B.对1α-抗胰蛋白酶的Cl50％(wt/v)＝0.04％表IX检测厚皮漆树萃取物的抗弹性蛋白酶活性。其中，利用合成基质的方法，结果以抑制百分率表示。
N.B.对1α-抗胰蛋白酶的Cl50％(wt/v)＝0.04％b)在试管中的抗胶原酶试验试验以滞后梭状芽胞杆菌(klostridium Hystolitium)-胶原酶和合成的色原培养基(称为FALGPA)进行。
室温下培养持续30分钟，在324nm测量其光密度，对比抑制试样为半胱氨酸。
结果列于下表X，它表明厚皮漆树萃取物的抗胶原酶活性。(结果以抑制百分率表示。)表X
N.B.半胱氨酸的Cl50的％重量/体积＝2.4％从以上结果看出，厚皮漆树萃取物具有好的抑制弹性蛋白酶和很强的抑制胶原酶的能力。
依本发明有利方法的萃取物可用于多种用途，其中，抑制蛋白酶，如皮肤绷紧，克服皮肤和头皮的老化现象，抗炎，抗过敏等。
本发明的目的在于，利用含有漆树科植物的萃取物，特别是厚皮漆树或大漆树植物中的至少一种萃取物作为生物活性物，由于它具有强的抗自由基作用，抑制酪氨酸酶和黑素形成的能力，强的抗胶原酶能力，高的抗弹性蛋白酶作用，和/或细胞光保护作用(特别是抗UV-A)，该活性物可单独或与至少一种其它活性物质一起，用于化妆或护肤药品化合物，这些制品可作皮肤外用、黏膜和/或上皮组织的形成(皮肤)。
该组合物中的上述萃取物的使用中，可使用上述效应或特点之一，其既可被单独利用，也可同时利用至少二个以上的效应和特点或全部效应和特性同时使用。
依本发明的化妆用组合物优选方案，含有0.001％至20％重量的，优选0.1～30％重量的上述漆树科植物特别是厚皮漆树或大漆树植物的萃取物或其混合物，如上面已提到的或通过上述方法制得的。
此外可使用上述萃取物制成的药物(盖氏制剂)，如化妆品中常见的，如乳液(油在水中或水在油中)，洗面水(洗液)，体用乳液，凝胶，水性凝胶，霜，润发油，肥皂，笔，洗涤剂，上表组织形成液和香波。
此外上述萃取物或植物混合萃取物还可用于化妆媒介物中，如脂质体，常量-微量-纳米胶囊，常量-微量-纳米颗粒等。
作为实例用于说明，但并不限制本发明的组合物以这种组合物的不同配方实施以及所述制备方法。
矿脂 5.00三辛酸甘油酯/三癸酸甘油酯 5.00水相甘油 10.00漆树树皮水萃取物 3.00蒸馏水 8.50Elestab 4112防腐剂(Labo.Serobiol) 0.40香料 0.30适量加蒸馏水直到总量100.00上述霜的制备过程，主要在于油脂相在80℃加热，水相也在80℃加热，溶解Elestab 4112，分开制备漆树萃取物的母液，在涡轮机搅拌下将油相加入水相，50℃下加入由漆树-萃取物的母液，最后继续搅拌直至冷却。
香料 0.20适当加水直到总量达100.00上述乳霜制备过程，主要在于油脂相在80℃加热，水相也在80℃加热，并溶解Elestab 388和PVP，在80℃下涡轮搅拌下将油相加入水相并不搅拌下逐步冷却，约50℃下加入漆树萃取物母液，最后继续搅拌至冷却。
当然本发明不局限于上述的一些实施方案，还可在专利保护范围内进行组成的不同成分的组合或使用工业的等同物。


本发明的目的是利用漆树科植物(Lannea－Gattung)中的至少一种萃取物作为活性物质,单独或与其它活性物质一起,用于制备化妆品和护肤药品,这些药品可作局部皮肤外用、黏膜和上皮组织的形成。