专利名称：含有透明质酸和l-精氨酸的抗粘连剂的制作方法粘连通常在肉芽组织或伤疤的形成期间会出现在炎症愈合过程中并由大量堆积的纤维素的卷绕而引起。一般情况下，粘连的发生频率为约67 93%，甚至伤口愈合后，粘连也会通常存在而导致各种后遗症，即便粘连的一部分自发退化。在腹腔镜手术的情况下，由这种粘连引起的后遗症包括肠功能紊乱、肠梗阻、慢性疼痛或诸如此类。特别是，已知妇科手术后的粘连会引起不育(Eur.J.Surg.1997，Suppl577，32-39)。为了防止这种粘连，在世界范围内进行了覆盖伤口部位或通过药理作用等来物理抑制和化学抑制周围组织的粘连发生的抗粘连剂的开发。特别是，在伤口部位上所敷用并附着的物理抗粘连屏障具有优异的效果，因为它直接阻碍粘连的发生。因此，它目前主要用于临床应用。近年来，一直在积极进行对含有生物可吸收聚合物的物理抗粘连屏障的研究。生物可吸收的聚合物在体内水合，以在伤口愈合期使伤口与周围组织隔离，从而防止粘连的发生。在伤口愈合完成后，生物可吸收的聚合物自然地被吸收并被除去，使得它们不影响正常组织。已经进行了使用生物可吸收聚合物的这种优点的各种尝试。在使用生物可吸收聚合物的方法的实例中，已经研究了透明质酸本身作为手术后的抗粘连剂的应用，美国专利4141973提出使用透明质酸。然而，由于透明质酸在体内的滞留时间相对短，透明质酸的单独使用显示效果不足。此外，因为透明质酸的高水溶性，所以它在很短的时间之内从伤口表面向下流动。由于这些问题，透明质酸的实际应用是有问题的(Journal of Gynecologic Surgery, Vol.7，N0.2，97-101(1991))。为了解决上述问题，即抗粘连材料由于其快速降解和移除几乎不显示出抗粘连效果，提出了用于交联生物可吸收聚合物的方法。作为具体的实例，EP507604公开了一种方法，其中，具有羧基端基的多糖与多价金属离子离子键合以降低其溶解度，使得可将它用作抗粘连剂。这种方法有效地延长在腹腔内的滞留时间，但在仅延长在腹腔内的滞留时间时，不能防止粘连。换句话说，用于形成金属离子盐所过量使用的金属离子可引起在腹腔内的粘连(Eur.J.Surg.1997, Suppl577, 32-39)。此外，多糖通过金属离子形成硬的水凝胶或膜，但所制备的膜具有易碎的缺点。同时，美国专利5017229、5527893、5760200等提出了通过使用透明质酸(一种多糖)和羧甲基纤维素来防止粘连的方法。 当使1-乙基-3(3-二甲基氨基丙)碳二亚胺盐酸盐(EDC)与作为主要组分的透明质酸和羧甲基纤维素反应时，EDC的一部分与羧基端基反应，以便带正电荷，而带正电荷的材料与带负电荷的羧基端基反应，以便自发形成聚电解质配合物。聚电解质配合物是具有正电荷和负电荷的聚合物化合物，这种化合物因为聚合物中的离子键而具有不易降解或溶解的水凝胶结构。当干燥水凝胶时，形成具有高的吸收能力不易在体内降解的屏障。然而，因为在上面的方法中所使用的EDC具有生物毒性，所以透析在制备期间应进行很长一段时间。另外，因为作为原料所使用的透明质酸非常昂贵，所以它提高了所制备的膜的成本。此外，通过上述的专利文件中描述的方法所制备的薄膜由于干燥后它们的低柔韧性和强度而易碎，并在它们水合时快速凝胶。由于这些原因，这些膜难以处理和操作，因为在它们应用到含有水的生物组织后，不能将它们再次分离和操作(Surg.Clin.Nor.Am.，1997,77:3,671-688)。此外，一直努力降低在使用L-精氨酸、己酮可可碱、亚甲基蓝、维生素E或诸如此类的手术后的粘连，但是这些努力还没有表现出足够的效果(Kaleli B et al., ActaObstet Gynecol Scand.77:377-380,1998 ；Kluger Y et al., Eur J Surg.166:568-571,2000)。于是，本发明人已进行研究以解决上述的问题，即透明质酸由于其快速降解和移除而几乎没有显示出抗粘连效果，结果发现，当使用透明质酸和L-精氨酸的混合物时，它具有延长的体内滞留时间和优异的抗粘连性能，从而完成了本发明。
本发明的目的是提供含有透明质酸和L-精氨酸的抗粘连剂，所述抗粘连剂具有延长的体内滞留时间和优异的抗粘连性能。本发明提供了含有透明质酸和L-精氨酸的抗粘连剂。透明质酸 是直链多糖，其中，^ -D-N-乙酰氨基葡萄糖和P -D-葡糖醛酸交替地相互键合。它没有种属特异性和器官特异性，并显示出优异的生物相容性和非常高的粘弹性，即使将它移植或注入到活体内。由于这种特性，透明质酸可于各种应用中，包括:用于治疗关节炎的插入物、抗粘连的凝胶/膜、药物释放系统、抗皱剂和塑性植入物。L-精氨酸是存在于所有的生物体中的必需或非必需氨基酸。当体内的L-精氨酸水平比正常水平低时，在体内合成L-精氨酸以满足生理需要，但必须将它提供给具有降低L-精氨酸的遗传性疾病的人。在创伤、败血症或灼伤的情况下，应以饮食的形式摄入适量的L-精氨酸，以满足体内L-精氨酸的需要。此外，它还可用作免疫增强的免疫营养。此外，它起到中和在用于生命维持的蛋白质合成过程中和尿液形成过程中所产生的氨的作用，而且它也与一氧化氮、肌酸、多胺、L-谷氨酸、L-脯氨酸、精胺、四肽促吞噬肽和诸如此类的一起充当免疫调节剂。另外，当将它用作生成葡萄糖的氨基酸时，可将它转换成D-葡萄糖或糖原；或将它降解用于生物能产生。因为透明质酸的高生物相容性和生物降解性导致其在体内的滞留时间相对短，透明质酸单独用作抗粘连剂显示出不足的效果。此外，由于其高水溶性，透明质酸在很短的时间之内从伤口表面向下流动。由于这些问题，透明质酸的实际应用是有问题的。本发明含有透明质酸和L-精氨酸的抗粘连剂克服了上述问题并显示出优异的抗粘连性能。本发明还提供了含有透明质酸和L-精氨酸的重量比为1: 0.05 5的抗粘连剂。如果透明质酸与L-精氨酸的比例小于0.05或超过5，那么将难以满足用于抗粘连剂的合适的粘度性能、粘附性能和应用性能。另外，本发明提供了含有透明质酸和L-精氨酸且具有绝对粘度为500 lOOOOcps的抗粘连剂。如果抗粘连剂具有小于500cps的绝对粘度，那么由于其低粘度将不能提供足够的抗粘连性能和附着性能；如果它具有大于lOOOOcps的绝对粘度，将难以搅拌和聚合并将不适当地分布在组织中的应用位点。由于这些原因，抗粘连剂的绝对粘度优选为500 lOOOOcps,且更优选为500 2000cps。鉴于抗粘连性能、附着性能和流动性，抗粘连剂的绝对粘度甚至更优选为1000 2000cps，且最优选1000 1500cps。同时，抗粘连剂的制剂实例包括溶液制剂、凝胶制剂和膜制剂。当皮肤或组织严重损伤时，可能发生组织之间的粘连。由于这个原因，最近的外科技术已经变成缩小皮肤和组织伤口并使组织的损伤最小化的技术。由于外科技术中这种变化，也可获得防止粘连的附加效果(Hepato-Gastroenterol, 1991, 38, 283)。根据外科技术中的这种变化，抗粘连剂的最近发展趋势向着溶液型制剂或凝胶型制剂发展(TheAdhesion Prevention Opportunity, Report from MDI, 1998)。溶液型制剂是指在腹腔或骨盆腔手术后服用大量的溶液制剂的方法，并且是一种自从知道了腹腔中的粘连而已经以各种方式尝试的防止粘连的方法。虽然体内的溶液制剂在2 3天内完全排出，但因为与过量的外来物质的体内给药相关的心理负担而不频繁使用(Eur.J.Surg.1997, Suppl577,32-39)。与此相反，凝胶制剂最近已引起关注，因为它可以通过敷用少量的凝胶到伤口部位来有效地防止粘连。到现在为止，已经开发了可用于包括脊椎手术的有限应用中的凝胶型制剂(美国专利5605938)。由除了蛋白质粘合剂还包含作为活性成分的葡聚糖硫酸盐的组合物所表征的这种技术基于葡聚糖硫酸盐是防止神经胶质细胞参与纤维组织产生的化合物的事实而开发。然而，上述技术具有缺点，即它不能用于手术面积相对较大的或出血严重的外科手术中，因为葡聚糖硫酸盐具有抑制血液凝固的性质。因此，凝胶制剂仅能用于诸如脊椎手术的微外科手术，但具有许多优点，即它使用起来非常方便并能防止粘连到非预定部位。另外，在膜 型抗粘连剂的情况下，在手术后立即分离抗粘连剂后再次粘附抗粘连剂的需要会经常发生。因此，膜型抗粘连剂优选不仅具有优异的初期粘附性能，还具有优异的再粘附性能。本发明提供了基于具有合适粘度的透明质酸的抗粘连剂，并能使抗粘连剂的效果最大化。然而，应理解，本发明的范围并不限于凝胶型抗粘连剂，抗粘连剂可制成各种形式。本发明含有高生物相容性的透明质酸和L-精氨酸的抗粘连剂在粘连程度及粘连强度的测量值上显示出明显降低，具有由增加的体内滞留时间引起的优异的抗粘连性能，并维持在合适的粘度以在组织中表现出非常优异的流动性、应用性能和附着性能。图1是表示透明质酸酶与对比例I和实施例1 3的每种混合之前和之后的绝对粘度值变化的图表。

实施例1:含有透明质酸和L-精氨酸的抗粘连剂的制备将透明质酸钠与L-精氨酸以75: 25的重量比彼此混合，并用蒸馏水以5.0mg/ml的浓度与上述混合物混合，在25°C下搅拌I小时，从而制备抗粘连剂。实施例2和实施例3除了透明质酸和L-精氨酸之间的混合比如下面的表I所示进行改变，以相同的方式制备抗粘连剂。对比例I和对比例2单独使用透明质酸(对比例I)和单独使用L-精氨酸(对比例2)来制备抗粘连剂。将透明质酸或L-精氨酸以浓度为5.0mg/ml添加到水中，在25°C下搅拌每种水溶液I小时。表I


本发明涉及含有透明质酸和L-精氨酸的抗粘连剂，它具有延长的体内滞留时间和优异的抗粘连性能。根据本发明，能够防止由外科手术、感染和创伤引起的粘连发生。