专利名称：一种寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法也门铁为龙舌兰科龙血树属，属常绿小乔木，又名香龙血树、千年木等，原产于热带几内亚和埃塞俄比亚等。它株形美观，叶片挺拔，叶色浓绿有光泽，四季常青，管理简便， 具有较高的观赏价值，适合于室内摆设和园林绿化。由于也门铁需经数年才能开花结实，且分枝极少，因此使用种子和扦插繁殖难以满足生产需求，其大规模育苗只可能通过离体培养途径来获得。目前，对影响也门铁叶片愈伤组织诱导的植物激素的研究并不充分、全面，对也门铁进行组织培养快速繁殖技术不成熟，利用组织培养技术对也门铁进行快速、大规模繁殖受到了极大地限制，不利于也门铁种苗的工厂化生产。
本发明提供了一种寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法，旨在解决目前对影响也门铁叶片愈伤组织诱导的植物激素的研究并不充分、全面，对也门铁进行组织培养快速繁殖技术不成熟，利用组织培养技术对也门铁叶片进行快速、大规模繁殖受到了极大地限制，不利于也门铁种苗的工厂化生产的问题。本发明的目的在于提供一种寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法，所述方法包括以下步骤取也门铁无菌苗植株叶片作为外植体材料；在MS培养基中，加入不同浓度的NAA、2，4_D、KT，高压灭菌；接种后进行暗培养；观察愈伤组织生长情况，计算愈伤组织诱导率。本发明提供的寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法，以普通也门铁无菌苗叶片为外植体，在MS基本培养基上，分别添加不同浓度的NAA、2，4-D及KT，配置成观种激素组合的配方，通过离体培养，探索不同激素配比对也门铁叶片愈伤组织的诱导作用，实现了对影响也门铁叶片愈伤组织诱导的植物激素充分、全面的研究，使得对也门铁进行组织培养快速繁殖技术更加成熟，极大地促进了利用组织培养技术对也门铁进行快速、 大规模繁殖，利于也门铁种苗的工厂化生产，为探索高效的也门铁组培快繁新方法提供科学依据，方法简单可行，可操作性强，为建立也门铁组培再生体系奠定了基础。图1示出了本发明实施例提供的寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法的实现流程图。
该方法包括以下步骤
在步骤SlOl中，取也门铁无菌苗植株叶片作为外植体材料；
在步骤S102中，在MS培养基中，加入不同浓度的NAA、2，4-D、KT，高压灭菌；
在步骤S103中，接种后进行暗培养；
在步骤S104中，观察愈伤组织生长情况，计算愈伤组织诱导率。
在本发明实施例中，MS培养基的pH值为5. 8，琼脂浓度为0. 55%，蔗糖浓度为
在本发明实施例中，不同激素NAA、2，4-D、KT的配比如下所示 配比 1 :0mg/L NAA, 1. 0mg/L2，4-D，0. 5mg/L KT 配比 2 :0mg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，1. Omg/L KT 配比 3 Omg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，2. Omg/L KT 配比 4 Omg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，3. Omg/L KT 配比 5 Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4_D，0. 5mg/L KT 配比 6 Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4_D，1. Omg/L KT 配比 7 Omg/L NAA, 1. 0mg/L2，4_D，Omg/L KT ； 配比 8 Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4_D，3. Omg/L KT ； 配比 9 Omg/L NAA, 3. 0mg/L2，4_D，0. 5mg/L KT ； 配比10 配比11 配比12 配比13 配比14 配比15 配比16 配比17 配比18 配比19 配比20 配比21 配比22 配比23 配比24
Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4-D, 1.Omg/L KT；Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4-D，2.Omg/L KT；0.5mg/LNAA，0mg/L2，4-D, 1.Omg/L KT ；0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,1.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,2.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,3.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT0.5mg/LNAA, 2.0mg/L2，4-D,3.Omg/L KT0.5mg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT0.5mg/LNAA, 3.0mg/L2，4-D,1.Omg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,0.5mg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,1.Omg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,2.Omg/L KT1.Omg/LNAA, 1.0mg/L2，4-D,3.Omg/L KT
配比25 1. Omg/L NAA, 2. 0mg/L2，4-D，0. 5mg/L KT ；配比26 :1. Omg/L ΝΑΑ，2· 0mg/L2，4_D，3. Omg/L KT ；配比27 :1. Omg/L ΝΑΑ，3· 0mg/L2，4_D，0. 5mg/L KT ；配比28 :1. Omg/L NAA, 3. 0mg/L2，4_D，1. Omg/L KT ；在本发明实施例中，灭菌处理的实现方法为在115°C下高压蒸汽灭菌20min。在本发明实施例中，接种后黑暗培养的温度设置为25 27V。在本发明实施例中，愈伤组织诱导率的计算方法为诱导率％ =(形成愈伤组织的块数/接种的块数)X 100。本发明实施例提供的寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法，以普通也门铁无菌苗叶片为外植体，在MS基本培养基上，分别添加不同浓度的NAA、2，4-D及KT， 配置成观种激素组合的配方，通过离体培养，探索不同激素配比对也门铁叶片愈伤组织的诱导作用，实现了对影响也门铁叶片愈伤组织诱导的植物激素充分、全面的研究，使得对也门铁进行组织培养快速繁殖技术更加成熟，极大地促进了利用组织培养技术对也门铁进行快速、大规模繁殖，利于也门铁种苗的工厂化生产，为探索高效的也门铁组培快繁新方法提供科学依据，方法简单可行，可操作性强，为建立也门铁组培再生体系奠定了基础。以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。


本发明属于植物组织培养领域，提供了一种寻求诱导也门铁叶片愈伤组织的最佳激素配方的方法，以普通也门铁无菌苗叶片为外植体，在MS基本培养基上，分别添加不同浓度的NAA、2，4-D及KT，配置成28种激素组合的配方，通过离体培养，探索不同激素配比对也门铁叶片愈伤组织的诱导作用，实现了对影响也门铁叶片愈伤组织诱导的植物激素充分、全面的研究，使得对也门铁进行组织培养快速繁殖技术更加成熟，极大地促进了利用组织培养技术对也门铁进行快速、大规模繁殖，利于也门铁种苗的工厂化生产，为探索高效的也门铁组培快繁新方法提供科学依据，方法简单可行，可操作性强，为建立也门铁组培再生体系奠定了基础。