专利名称:一种诱导茄子花药形成愈伤组织的方法 图I刚接种的茄子花药 图2膨大的茄子花药 图3产生愈伤组织的茄子花药 图4愈伤组织分化出茄子芽苗 图5根芽叶俱全的再生植株 图6诱导茄子花药形成愈伤组织流程图 五 I、在盛花期于睛天上午8 :00 9 00从健壮植株上取花蕾。采用显微镜镜检的方法鉴定小孢子发育时期将花药从花蕾中剥出,置于载玻片上,滴少许去离子水浸没花药,用镊子轻轧花药使小孢子游离出来,去除残留的花药组织,盖上盖玻片,在OLYMPUS显微镜下鉴定小孢子发育时期。选取小孢子发育处于单核靠边期的花蕾用于花药培养。2、将小孢子发育处于单核靠边期的花蕾置于4°C低温冰箱预处理12小吋。3、将预处理后的花蕾进行消毒先用流水冲洗20分钟,再用75%的酒精表面消毒30秒,之后用7%的次氯酸钠消毒1(Γ15分钟,然后用无菌水冲洗3次,每次3分钟。4、在无菌滤纸上用无菌的镊子剥取花药,避免损伤、损坏花药,并把花药柄去除干净,接种在MS+0. 4mg/L2,4-D+2. Omg/LKT+3%蔗糖+7%琼脂的培养基上。每ー培养皿放入10 12枚花药(图I)。5、花药接种后,在36°C黑暗条件下热激处理3-7天,可观察到花药膨大(图2)。6、后于光照度20001x、光照时间12h、室温25 28°C下继续培养三周后,可陆续观察到愈伤组织的出现,愈伤组织诱导率在509Γ80%之间(图3)。之后,将愈伤组织转到分化培养基MS+0. Olmg/LNAA+2. 5mg/L6-BA+2%蔗糖+6%琼脂中(图4),每20天继代一次,当芽苗长到2 3厘米时,转入再生培养基1/2MS+0. 2mg/LIBA+3%蔗糖+5. 5%琼脂中培养,15 20天后有不定根出现,继续培养直至形成根、芽、叶俱全的完整植株幼苗(图5),幼苗的移栽 成活率93. 2%。
本发明涉及一种诱导茄子花药形成愈伤组织的方法,属于植物生物技术领域。本发明所提供的高效诱导茄子花药形成愈伤组织的方法,是将茄子花药进行预处理,并经过热激处理后接种到本发明培养基上,在25~28℃条件下进行培养。本发明的培养效果好,利用本发明培养基进行茄子花药培养的方法具有愈伤组织诱导率高、培养周期短的优点。将本发明培养基及花药培养方法应用于茄子遗传育种中,可提高茄子花药培养的效率,缩短茄子育种的周期,为茄子的品种改良提供重要的技术支持。
一种诱导茄子花药形成愈伤组织的方法
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