肉桂酸和肉桂酸盐及其衍生物用于制备药物制作方法

萧湘

2001年9月12日

2000年3月8日

2000年3月8日

萧湘

A61P3/06GK1312070SQ00113309

肉桂酸 衍生物 用于

1．肉桂酸在制备用于治疗高血脂症、高胆固醇症及肥胖症的药物中的应用2．权利要求1中的肉桂酸在制备用于降低病人血浆血小板聚集率及抗血栓形成和抗动脉硬化的药物中的应用3．权利要求1中的肉桂酸在制备用于抗炎镇痛抑菌、利胆、生白细胞、抗氧化及提高机体免疫力的药物中的应用4．权利要求1中的肉桂酸的结构可是顺式或反式或顺式和反式5．权利要求1中的肉桂酸可是生理上可接受的肉桂酸盐或其衍生物

本发明涉及肉桂酸和肉桂酸盐及其衍生物在制药中的应用随着人口老龄化，一些老年性疾病已严重危害人体健康心血管疾病(动脉硬化、高血脂症、血小板聚集等)、肥胖症和糖尿病等是常见的老年性疾病，而在许多情况下是多种病症同时出现在同一病人身上但是，现有的治疗这些疾病的药物一般均存在着适用症单一、疗效不尽理想及不同程度的副作用因此，研制一种对一些老年性疾病具有良好的综合治疗作用、高效安全的药物，对老年性疾病的防治将具有意义本发明的目的是在先前提交的“肉桂酸用于制备治疗糖尿病的药物”(申请号99115661.7)和“肉桂酸的成盐用于制备治疗糖尿病的药物”(申请号99115670.6)的基础上，研究提供肉桂酸和肉桂酸盐及其衍生物用于制备药物，在抗心血管疾病(抗动脉硬化、抗高血脂症、抗血小板聚集)、抗肥胖症、镇痛、抑菌、利胆、生白细胞、抗氧化提高机体免疫力等方面有良好的作用抗心血管疾病、抗肥胖实验实例1．肉桂酸对大鼠高血脂模型形成的抑制作用一、实验材料阳性对照药LIPANTAYL(力平脂)，法国科尼大药厂生产，批号104990499实验动物SD系健康雄性大白鼠，由湖南中医学院实验动物中心繁殖提供(合格证20-002号)实验试剂胆固醇试剂盒甘油三酯试剂盒β-脂蛋白试剂盒，高密度脂蛋白胆固醇试剂盒，均由上海市荣盛生物试剂厂提供，生产日期分别为990913、990922、991020、990824二、实验方法和结果(一)、对大鼠脂代谢紊乱预防性给药模型的作用选取健康SD系大白鼠，雄性，200±20g，共90只，在实验环境下给普通饮料喂养，观察6天，无发现异常然后剪尾取血，分离血清，测定其各项血脂指标，淘汰异常血脂指标的动物，选取血脂指标正常者进行随机分组，分为肉桂酸低、中、高剂量组，阳性对照组、正常对照组及高脂对照组，每组10只各组大鼠每天上午灌服高脂食物(80％猪油+4％胆酸纳+4％胆固醇+12％蛋黄粉)20ml/kg体重，每天晚上正常对照组及高脂对照组灌服用3ml/100g体重l％羧甲基纤维素纳溶液，而其余各组大鼠分别灌服相应不同肉桂酸或阳性对照药(用1％羧甲基纤维素纳配成悬浮液)连续灌服30天取血前禁食12小时，提供饮水将各组大鼠摘眼取血，分离血清测定各项血脂指标，结果见表2-1表2-1肉桂酸对大鼠脂代谢紊乱预防性给药血脂指标的影响(n=10,X±SD) 与高脂对照组相比，P＜0.05,**P＜0.01，按照70g体重成年人每大服用300mg换算，阳性对照组大鼠等效相当其用量的3倍(二)对大鼠脂代谢紊乱治疗性给药模型的作用选择健康SD系大白鼠，雄性，200±20g，共80只，随机选出10只，作为正常对照组，供给食物和饮水，剩下70只作高脂模型组，这批大鼠每天上午定时灌服高脂食物(80％猪油+4％胆酸钠+4％6胆固醇+12％蛋黄粉)20ml/kg体重，连续灌服30天第31天禁食12小时，剪尾取血，分离血清，测定甘油三酯TC含量，挑出高于600mg/dl的大鼠50只，随机分为5组，即肉桂酸低、中、高剂量给、阳性对照组及高脂对照组，每组10只每天晚上正常对照组及高脂对照组大鼠灌服3ml/100g体重1％羧甲基纤维素钠溶液，而其余各组大鼠分别灌服相应不同浓度肉桂酸或阳性对照药(以1％羧甲基纤维素钠配成悬浮液)连续给药25天，第26天禁食12小时，将大鼠取血测定各项血指标，结果见表2-2表2-2肉桂酸对大鼠脂代谢率紊乱治疗性给药血脂指标的影响(n=10,X±SD) 与高脂对照组相比，*P＜0.05,**＜0.01三、结论由大鼠脂代谢紊乱预防给药和大鼠脂代谢治疗性给药模型实验结果表明肉桂酸能够显著降低高脂大鼠的总胆固醇、甘油三酯、β-脂蛋白含量，同时增强高密度脂蛋白胆固醇含量，说明肉桂酸对高血脂、高胆固醇症以及肥胖症具有良好治疗及预防作用实验实例2．肉桂酸对大鼠实验性血栓形成的抑制作用一、实验材料阳性对照药脑益嗪(Cinnarizine)，由广东省利民制药厂生产，批号码19960109实验动物SD系健康雄性大白鼠，雄性共50只，随机分成5组，每组10只，即肉桂酸高、中、低剂量组、阳性对照组和空白对照组肉桂酸、阳性对照药用1％羧甲基纤维素钠配成相应浓度悬浮液连续给药16天，第16天给药前禁食12小时给药1小时后，用4％戊巴比妥钠42mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧体位固定动物手术台上，进行颈动脉-颈静脉环插管手术将大鼠气管分离，插入一短塑料管，随时将气管分泌物从套管中吸出剖离左颈总动脉，右侧颈外静脉，取一段聚乙稀软质塑料细管(长管为7.3cm，内径0.15cm，管厚为0.03cm)，内放入一根8cm长的医用缝合丝线，塑料管两端用小管将丝线拉直夹紧，将多余的丝线夹在塑料管外，即塑料管内丝线实际长度为7.3cm，用肝素生理盐水充满聚乙烯管将聚乙稀管的一端插入右侧颈外静脉，另一端插入左颈总动脉，结扎固定准备好后，打开血流，血流从左颈总动脉流至聚乙烯管内，返回右外侧静脉管，准确开放血流15min后，立即中断血流，迅速取出丝线，用电子分析天平称总湿重总湿重量减去丝线重得血栓湿重，计算血栓抑制率；血栓制率(％)=(空白组血栓湿重-给药组血栓湿重)×100％空白组在栓湿重结果见表3-1表3-1肉桂酸对大鼠血栓形成的抑制作用(X±SD,N=10) 与空白对照组相比，*P＜0.05三、结论大鼠实验性动脉血栓形成模型反映整体动物血液中血小板的粘附聚集功能，血栓结构类似中的白色血栓，故与生理病理情况比较接近由上述实验结果可见，与空白对照组相比，肉桂酸低、中、高剂量组对大鼠实验性动脉血栓形成的抑制率分别为10％,20％,25.9％，具明显量级关系，P值具有显著性差异，提示肉桂酸对血液血小板粘附聚集有抑制作用生白细胞、提高机体免疫力1.1 动物、药品与仪器健康昆明种小鼠，由湖南中医学院实验动物中心繁殖提供(合格证20-002号)，110只雌雄各半(20±2)g环磷酰胺，多抗甲素(国产试剂)UV-250岛津紫外分光光度计；电热恒温培养箱；Olympos显微镜1.2 实验方法1.2.1 肉桂酸对小鼠免疫器官重量的影响将60只昆明种小鼠随机分为6组，每组10只，雌雄各半第一组生理盐水组；第二组环磷酰胺组(60mg/kg)；第三组多抗甲素组(10mg/kg)；第四组肉桂酸高剂量组(5mg/kg)；第五组肉桂酸中剂量组(2.5mg/kg)；第六组肉桂酸低剂量组(0.5mg/kg)肉桂酸高、中、低剂量组灌胃给药每日1次，连续7d，环磷酰胺组于第5天开始腹腔注射给药至第7天于第8天称体重，断头处死小鼠，取出胸腺，脾脏，称湿重，脏器系数以mg/kg体重表示1.2.2 肉桂酸对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响提取物各实验组灌胃给药每天一次，连续7d于第7天各鼠腹腔注射5％鸡红细胞生理盐水悬液1ml，注射后5h，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹腔皮肤经腹膜注入生理盐水2.5ml，轻揉小鼠腹部1min，吸取腹腔液1ml，分滴于两片载玻片上，37℃孵箱温育30min以生理盐水漂洗，除去未粘片的细胞，晾干后用甲醇固定、4％(v/v)Giemsa磷酸盐缓冲液染色3min、晾干油镜下观察100个巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数，对所得结果进行t检验吞噬百分率=巨噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100个巨噬细胞(吞及未吞噬的)×100％吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/100个巨噬细胞数1.3 实验结果与生理盐水阴性组相比，肉桂酸可增加小鼠免疫器官脾脏、胸腺重量，且增加趋势与剂量明显相关(相关系数r值分别为0.9600和0.9970)5mg/kg肉桂酸的作用与10mg/kg多抗甲素相比无明显差异(表1)与生理盐水阴性组相比，肉桂酸可增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数，增加趋势与剂量明显相关(r值分别为0.9970和0.9700)(表2)表1 肉桂酸对小鼠免疫器官重量的影响器官系数(mg/100g)组脾 胸腺1 40.14±2.61 31.5±6.122 18.71 ±2.63***15.38±2.00***3 56.74±6.9***46.57±7.8***4 52.45±5.49***36.52±5.17**5 48.85±6.32***34.41±5.46*6 40.85±6.33 32.217±4.18比较 0.9％ NaCl*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001表2 肉桂酸对小鼠巨噬细胞吞噬力的影响组 噬菌作用百分比 噬菌作用指标118.11±2.470.21±0.04256.64±7.57***1.31±0.41***331.06±5.37***0.74±0.08***424.84±4.52***0.32±0.07***521.15±2.41*0.21±0.04比较0.9％ NaCl*P＜0.05***P＜0.0012结论肉桂酸能够显著促进小鼠免疫器官脾脏、胸腺增长，并可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分数和吞噬指数可见，肉桂酸具有生白细胞和增强免疫功能的作用抗炎镇痛抑菌1 实验材料1.1 药物 阿司匹林片为市售品1.2 动物 昆明种小鼠，体重18～22g,SD大鼠，体重160～200g，由湖南中医学院实验动物中心繁殖提供(合格证20-002号)；2 方法与结果2.1 抗炎作用 2.1.1对大鼠足跖角叉菜胶性肿胀的影响[1]取雄性大鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，给药组分别ig肉桂酸30mg/kg,90g/kg，对照组ig等量生理盐水，阳性组ig阿司匹林150mg/kg，每日给药1次，连续3d，末次给药后1h于大鼠左后跖腱膜下注射1％角叉菜胶0.1ml/只致炎，用特制软尺测量致炎后1h、2h、3h、4h、5h、6h后踝关节周长，以左右后踝关节周长差为肿胀度，结果进行组间t检验(见表1)表1 肉桂酸对大鼠足跖角叉菜胶致炎肿胀的影响(n=10)组别剂量 致炎后不同时间肿胀程度(mm)(X±S)(mg/kg)1h2h 3h4h5h 6h对照组 生理盐水 4.0±1.3 5.9±1.6 7.1±1.8 6.5±1.3 6.3±1.6 5.5±1.3肉桂酸901.5±0.9***1.4±1.0***1.9±1.5***3.1±1.4***3.0±1.1***3.5±1.8*肉桂酸302.7±1.1*3.6±1.5**4.9±1.0**5.0±1.3*5.4±1.7 5.1±0.7阿司匹林 150 2.4±1.6*3.5±1.4**3.2±2.0***3.1±1.8***3.4±1.1***3.0±1.0***与对照组比较*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001结果表明肉桂酸30mg/kg组、90mg/kg组及阿司匹林组均有明显抑制大鼠足跖角叉菜胶性肿胀的作用2.1.2 对小鼠二甲苯致炎鼠耳重量的影响取小鼠40只，雌雄兼用，按体重随机分为4组，每组10只，给药组分别ig肉桂酸30mg/kg、90mg/kg，对照组ig等量生理盐水，阳性组ig阿司匹林200mg/kg，每日给药1次，连续3d，末次给药300min后每鼠左耳用0.03ml二甲苯致炎，致炎后15min将小鼠断颈椎处死，用直径8mm的打孔器将左右耳廓相同部位打孔，两侧耳片分别用电子天平称重，以每鼠两耳片的重量差值作为肿胀度，用t检验判断组间差异(见表2)表2 肉桂酸对二甲苯致炎鼠耳重量的影响组别 剂量动物数肿胀重量差(mg)(mg/kg)(只)(X±S)对照组 生理盐水 108.25±2.61肉桂酸 90 102.51±2.12***肉桂酸 30 104.32±3.05**阿司匹林200 102.67±1.55***与对照组比较**P＜0.01***P＜0.001结果表明，肉桂酸90mg/kg组、30mg/kg组及阿司匹林组均有明显抑制二甲苯致小鼠耳部炎症肿胀的作用2.2 镇痛作用 采用醋酸扭体法，取小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，各组给药途径、方法和剂量同试验2.1.2，末次给药后1h各组小鼠均ip1.0％醋酸溶液0.15ml/只，记录注射醋酸溶液后10min内各组小鼠扭体反应次数，用t对检验判断组间差异(见表3)表3 肉桂酸对小鼠醋酸扭体反应的影响组别 剂量 动物数 扭体次数 抑制率(％)(mg/kg) (只) (X±S)对照组 生理盐水 10 40.5±9.3肉桂酸90 10 21.2±12.7**48肉桂酸30 10 30.9±10.8*24阿司匹林 20 10 24.8±8.9**39与对照组比较*P＜0.05**P＜0.01结果表明肉桂酸90mg/kg组、30mg/kg组及阿司匹林组对醋酸致小鼠扭体反应均有明显的抑制作用肉桂酸对大鼠胆汁分泌的影响动物Wistar大鼠，雄性器材大鼠固定板，胆汁分流管(外径1mm的塑料管)，粗剪刀、手术剪、平镊、眼科镊、眼科剪、止血钳、注射器药品去氢胆酸混悬液10g/dl、戊巴比妥钠液3g/dl方法雄性大鼠50只，称重后分为五组实验前12小时禁食不禁水实验时每鼠以戊巴比妥钠60mg/kg腹腔注射麻醉后，仰位固定于固定板上，沿腹正中线切开约2cm，打开腹腔，找到胃幽门部，翻转十二指肠，在十二指肠降部肠胃系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下穿2根丝线，结扎乳头部，向肝脏方向作YVY形切口，插入塑料管，即可见有淡黄绿色汁流出，结扎固定塑料管，用小烧杯收集胆汁手术后用止血钳夹闭腹壁，以盐水纱布覆盖待稳定20分钟后，先收集30分钟胆汁，然后各组大鼠分别由十二指肠给予肉桂酸0.1ml/100g,0.3ml/100g,1ml/100g；阴性对照组注入等容量生理盐水，阳性对照组给予去氢胆酸液1ml/100g给药后每隔30分钟收集胆汁一次，共3次，记录胆汁流量，计算给药后胆汁流量增加百分率胆汁流量增加率(％)=(给药后胆汁流量-给药前胆汁流量)/给药前胆汁流量×100％结果肉桂酸能增加大量胆汁流量，给药后1小时胆汁流量增加30.3％,37.5％,45.2％，与给药前比较，经t测验，差异显著或非常显著(表4)表4 肉桂酸对大鼠胆汁分泌的影响(X±SD)胆汁流量(ml/30min) 胆汁流药物 n 给药前 给药后(min)增加率(％)30 60 90生理盐水 6 0.34±0.02 0.36±0.01 0.40±0.03*0.39±0.0217.6肉桂酸 6 0.33±0.06 0.7±60.18 0.43±0.17***0.36±0.0430.3肉桂酸 6 0.32±0.04 0.41±0.01 0.44±0.03***0.44±0.0937.5肉桂酸 6 0.31±0.01 0.42±0.02 0.45±0.02***0.44±0.0145.2氢胆酸液 6 0.31±0.01 0.38±0.16 0.41±0.02**0.56±0.0332.33 结论 从以上结果可以看出肉桂酸具有抗炎抑菌镇痛利胆作用