专利名称：一株哈茨木霉菌株及其在防控辣椒疫病中的应用的制作方法辣椒疫病是一种发生于辣椒上的毁灭性真菌病害，该病害可以导致不同地区的多种作物发病，引起大量的经济损失。辣椒疫病典型的症状特征植株被侵染后几天就发生根茎部组织腐烂直至大量植株死亡。到目前为止，生产中还没有对辣椒疫病很好的抗性品种。目前，国内外对辣椒疫病的防治中，化学防治占据重要的地位。化学防治成本较高且易污染环境，而且病原物易对杀菌剂产生耐药性甚至抗药性。所以生物防治逐渐成为人们所关注的焦点和热点。
本发明的目的是提供一株哈茨木霉菌株及其在防控辣椒疫病中的应用。本发明提供的哈茨木霉(Trichodermaharzianum) HNA-12,已于 2012 年 04 月 11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No. 5989。哈茨木霉(Trichoderma harzianum) HNA-12CGMCC No. 5989 简称哈茨木霉 HNA-12。所述哈茨木霉HNA-12可用于抑制病原菌；所述病原菌为如下微生物中的至少一种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infenstans)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)和辣椒根腐病菌(Fusarium oxysporum)。所述哈茨木霉HNA-12可用于促进辣椒植株生长。所述哈茨木霉HNA-12可用于防控辣椒植株发生辣椒疫病。本发明还保护一种产品，它的活性成份为所述哈茨木霉HNA-12，所述产品为具有如下(I)至(3)中的至少一种功能的产品(I)抑制病原菌；所述病原菌为如下微生物中的至少一种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infenstans)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)和辣椒根腐病菌(Fusarium oxysporum)；(2)促进辣椒植株生长；(3)防控辣椒植株发生辣椒疫病。本发明还保护哈茨木霉HNA-12在制备产品中的应用；所述产品为具有如下(I)至(3)中的至少一种功能的产品(I)抑制病原菌；所述病原菌为如下微生物中的至少一种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infenstans)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)和辣椒根腐病菌(Fusarium oxysporum)；(2)促进辣椒植株生长；(3)防控辣椒植株发生辣椒疫病。本发明还保护所述哈茨木霉HNA-12的孢子液或发酵物。所述孢子液具体可为5 X IO6个孢子/mL的孢子悬浮液。所述发酵物可为固体发酵物或液体发酵物。所述液体发酵物的制备方法具体如下收集哈茨木霉HNA-12孢子，接种到含有种子培养基的发酵罐中，发酵后得到浓度为2. 5X 108CFU/mL的液体发酵物(种子液)；所述发酵的条件为溶解氧浓度20%左右，温度28-30°C，搅拌速度200-250r/min，通气量为10-15L/min。所述种子培养基(pH6. 0-6. 5)由溶质和水组成；所述溶质在种子培养基中的浓度如下麦麸2g/100mL、葡萄糖I. 0g/100mL、硫酸镁O. 5g/100mL、磷酸二氢钾O. 3g/100mL、氯化钙 O. 3g/100mL。所述固体发酵物的制备方法具体如下将所述液体发酵物与固体培养基混合均匀 (每克混合物中含有I. 5 X IO6CFU哈茨木霉HNA-12)，然后进行发酵，然后风干至7_10%，得到固体发酵物；所述发酵的条件为温度28-30°C，空气相对湿度95-100%，培养基厚度5-7cm，培养时间5-7天。所述固体培养基是将麦麸和稻壳和水混合得到的，麦麸和稻壳的质量比为7 :3，固体培养基的含水量为70%左右，pH6. 0-6. 5 ;121°C灭菌30min。所述孢子液或所述发酵物的应用，为如下(I)至(3)中的至少一种(I)抑制病原菌；所述病原菌为如下微生物中的至少一种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infenstans)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)和辣椒根腐病菌(Fusarium oxysporum)；( 2 )促进辣椒植株生长；( 3)防控辣椒植株发生辣椒疫病。本发明还保护一种产品，它的活性成份为所述孢子液或所述发酵物；所述产品为具有如下(I)至(3)中的至少一种功能的产品(I)抑制病原菌；所述病原菌为如下微生物中的至少一种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infenstans)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)和辣椒根腐病菌(Fusarium oxysporum)；( 2 )促进辣椒植株生长； (3)防控辣椒植株发生辣椒疫病。本发明还保护所述孢子液或所述发酵物在制备产品中的应用；所述产品为具有如下(I)至(3)中的至少一种功能的产品(I)抑制病原菌；所述病原菌为如下微生物中的至少一种马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infenstans)、辣椒疫病菌(Phytophthora capsici)和辣椒根腐病菌(Fusarium oxysporum)；( 2 )促进辣椒植株生长；( 3)防控辣椒植株发生辣椒疫病。本发明提供的哈茨木霉HNA-12，经室内对峙拮抗实验、盆栽防治实验和大田防治试验发现，该菌株对多种病原菌(特别是辣椒疫病菌)具有良好的抑菌效果，并且利用木霉菌制剂防治植物病害具有对人畜无毒、产品无农药残留、不污染环境等优点。本发明在可持续农业发展中应用前景广阔。本发明的社会效益推广应用生物农药可以保护生态环境平衡发展，提高农产品品质及降低农产品中有害物质残留，增强农产品的市场竞争力，增加农民收入，进而增强农业生产的可持续性。本发明的经济效益推广应用生物制剂可减少化学农药的使用量，能提高疫病防治效果，降低防治成本；能有效实现农产品安全生产及显著降低农产品农药残留，提升农产品的经济附加值，扩大我国农副产品外销市场；推进绿色产业的发展，增加农民收入具有重要推进作用。图I为菌株HNA-12的PDA平板培养形态。 图2为菌株HNA-12的分生孢子梗及分生孢子。图3为哈茨木霉HNA-12和辣椒疫病菌对峙培养72小时后的照片。图4为哈茨木霉HNA-12对辣椒疫病菌的重寄生作用。图5为哈茨木霉HNA-12对辣椒疫病菌的重寄生作用。图6为哈茨木霉HNA-12挥发性代谢物对辣椒疫病菌在平板上的抑制作用。图7为哈茨木霉HNA-12非挥发性代谢物对辣椒疫病菌在平板上的抑制作用

结果见表1(三次试验的平均值)。哈茨木霉HNA-12和辣椒疫病菌对峙培养72小时后的照片见图3。结果表明，哈茨木霉HNA-12对各个病原菌均具有抑制作用。表I各个培养时间后哈茨木霉HNA-12对各个病原菌的抑菌率(％)
病原菌24小时 36小时 48小时 60小时 72小时 84小时
辣椒疫病菌20 5 42Λ 4 Γ6 56^7 θθΓδ δΓ
马铃薯晚疫病菌 ΙδΓδ 42 5 54 5 59 8 69 2 Wl 辣椒根腐病菌 5Λ 3 Τ3 50 5 6573 69 7 72 5实施例3、哈茨木霉HNA-12的温室生防效果实验辣椒种子经55°C温汤浸种30min后催芽，挑选长势一致的发芽种子播种于培养钵，每钵20粒；在温室中(25-30°C)培养直至辣椒植株长出4片真叶，分组进行如下操作(每组3个培养钵)实验组每株辣椒接种IOmL哈茨木霉HNA-12孢子悬浮液(孢子浓度为5 X IO6个/mL)和IOmL辣椒疫病菌孢子悬浮液(孢子浓度为5 X IO6个/mL);接种方式为将孢子悬浮液用注射器注入根围土壤；对照组每株辣椒接种IOmL辣椒疫病菌孢子悬浮液(孢子浓度为5 X IO6个/mL)；接种方式为将孢子悬浮液用注射器注入根围土壤。接种孢子悬浮液30天后调查发病率(辣椒疫病分级调查标准见表2)并计算病情指数。表2辣椒疫病分级调查标准
病级分级标准 ~~O健康，根茎处无症状，腐烂面积小于1% ；
"I根茎基部有水浸状病斑，或暗绿小病斑，腐烂部分环绕茎周1-25% ；
2根茎基部腐烂褐色，腐烂部分环绕茎周26-50% ；
I根茎基部腐烂褐色至深褐色，腐烂部分环绕茎周51-75%，稍有缢缩;
~根茎基部腐烂深褐至黑色，腐烂部分环绕茎周76-89%，明显缢缩;
~根茎基部腐烂黑色，腐烂部分环绕茎周90%以上，严重缢缩。
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