具有抗肿瘤作用的丁香提取物及其药物制剂制作方法

刘明, 刘海洲, 廖德忠, 林秀坤, 魏鉴腾

2011年8月31日

2010年11月7日

2010年11月7日

林秀坤

A61P35/00GK102166260SQ20101053361

提取物 抗肿瘤 丁香 作用 具有

1.具有抗肿瘤作用的丁香提取物，所述丁香提取物按照如下方法制备用水和/或有机溶剂作为提取剂，从丁香干燥花蕾中提取得到丁香提取物2.根据权利要求1所述的丁香提取物，其特征在于所述的提取剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯、甲苯中的一种或几种3.根据权利要求1所述的丁香提取物，所述提取为回流提取，提取的温度为60-100°C， 至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时4.一种用于肿瘤治疗的药物制剂，其特征在于含有治疗有效剂量的丁香提取物和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与丁香提取物组方的其它药物5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有1%_99%的丁香提取物和99%-1% 的药用赋形剂或其它可组方的药物6.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于所说的药物制剂是口服制剂或非肠道给药的剂型7 根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于所说的口服制剂选自于片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的任何一种8.丁香提取物在制备抗肿瘤药物中的应用9.根据权利要求8的用途，其特征在于所说的抗肿瘤是指抑制肿瘤细胞和实体瘤的生长10.根据权利要求9的用途，其特征在于所说的肿瘤细胞为以下6种人卵巢癌细胞 (Skov-3)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肝癌细胞(BEL-7402)、人结肠癌细胞(HT-29)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胰腺癌细胞(PANC-1)，所说的实体瘤为上述6种肿瘤细胞的裸鼠移植性肿瘤

本发明涉及丁香提取物在制备抗肿瘤药物中的应用及其药物制剂，属于中药领域背景技术丁香(Eugenia caryophyllata Thimb)为桃金娘科蒲桃属植物，以花蕾和其果实入药 花蕾称公丁香或雄丁香，果实称母丁香或雌丁香在花蕾开始呈白色，渐次变绿色，最后呈鲜红色时可采集将采得的花蕾除去花梗晒干即成丁香性温，味辛已知功能主治为治呃逆、呕吐、反胃、痢疾、心腹冷痛、痃癖、疝气、癣症等丁香中含有的丁香酚成分有局部麻醉止痛作用；水或醇提取物对猪蛔虫有麻醉和杀灭作用；对细菌及致病性真菌均有抑制作用恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病，抗癌药物的开发已成为本世纪新药研究的重大课题目前，从植物中寻找高效低毒的抗肿瘤药物，已成为国内外抗肿瘤药物研究的重点我们在筛选抗肿瘤药物过程中发现丁香提取物具有很强的抑制肿瘤细胞和实体瘤生长的作用在本发明之前未见以丁香提取物为原料制备药物剂型并用于预防和治疗肿瘤疾病的报道发明内容本发明的目的之一是提供了丁香提取物的制备方法； 本发明的目的之二是提供了丁香提取物的药物制剂； 本发明的目的之三是提供了丁香提取物的抗肿瘤新用途本发明的目的是通过以下技术方案实现的本发明的丁香提取物是按照如下方法制备用水和/或有机溶剂作为提取剂，从丁香的干燥花蕾中提取得到丁香提取物其中，所述有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯所述提取剂优选体积百分含量为60%-99%的乙醇水溶液，最好选择体积百分含量为80%-95%的乙醇水溶液所述提取可为回流提取，提取温度可为60-100°C，至少提取一次，每次提取的时间为1-4小时本发明的药物制剂含有1%_99%的丁香提取物和99%_1%的赋形剂(包括其它配用的药物)，优选含有20%-80%的丁香提取物和80%-20%的赋形剂(包括其它配用的药物)，最好含有40%-60%的丁香提取物和60%-40%的赋形剂(包括其它配用的药物)按药剂学方法，可以将本发明的丁香提取物制备成多种临床药物剂型作为抗肿瘤药物，包括口服制剂或非肠道给药的剂型所说的口服制剂选于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、微囊片剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何一种；所说的非肠道给药剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型当中的一种本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等本发明的抗肿瘤药物中的其它配伍用的药物，指的是以有效剂量的丁香提取物为一定的药物原料，再配伍其它已允许合用的中药或化学药品上述预防和/ 或治疗肿瘤药物的用量一般为200-1000mg 丁香提取物/kg体重/天，疗程为10至15天本发明的丁香提取物药物制剂具有抗肿瘤作用，是通过以下的药效学试验得到证实的试验例1考察了丁香提取物对体外6种肿瘤细胞的抑制作用细胞人卵巢癌细胞(Skov-3)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肝癌细胞(BEL-7402)、人结肠癌细胞(HT-29)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胰腺癌细胞(PANC-1)以上细胞均为中科院海洋所海洋药物实验室提供药品及试剂丁香提取物中科院海洋所海洋药物实验室提供，膏状物；5-氟脲嘧啶(5-FU)江苏南通精华制药有限公司产品，批号为100402 ； MTT (SIGMA, USA) ；DMSO (SIGMA, USA)；胰蛋白酶(SIGMA，USA) ；RPMI1640 (GIBCO, Invitragen Co.，USA) ；DMEM (GIBCO, Invitragen Co.，USA)；优级胎牛血清(GIBCO，Invitragen Co.，USA)；特级胎牛血清 Fetal Bovine Serum (Hyclone)0仪器超低温冰箱(Nature，USA),细胞培养箱(SANYO, Japan),倒置显微镜 (NIKON, Japan), Slfeft (Bio-Tek Instruments, Inooski, VT, USA), PHifCThermo orion, USA)，超净工作台(FLC-哈尔滨东联仪器厂)实验方法MTT法各种人的肿瘤细胞株按照常规方法培养传代，收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度5 X IO4个/ml左右将细胞悬液加入96孔培养板中，每个孔加入 180 μ 1置于37°C恒温培养箱中培养M h后，实验组加入各浓度丁香提取物(以5-FU作为阳性对照组)20 μ 1/孔，每组各设4个平行孔，并分别设空白孔(只加入溶剂)以调零 在培养箱37°C，培养48 h后，用移液枪将96孔板中液体洗净后每孔加入MTT (1 mg/ml)30 μ 1，置(X)2培养箱37°C培养4 h，弃去上清，每孔加入DMSO 150 μ 1，置摇床摇勻30 min, 用酶标仪在492 nm下检测，利用SPSS统计软件，计算细胞死亡率，求取IC5(1实验结果表明，经SPSS软件统计，丁香提取物对用于试验的6种肿瘤细胞，人卵巢癌细胞(Skov-3)、人宫颈癌上皮细胞(Hela)、人肝癌细胞(BEL-7402)、人结肠癌细胞 (HT-29)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胰腺癌细胞(PANC-I)均有不同程度的抑制作用，并且呈一定的剂量依赖关系，不同浓度的丁香提取物对各种肿瘤细胞的抑制率、IC5tl值详见表 1表1不同浓度的丁香提取物对6种肿瘤细胞的抑制率