专利名称：用于鸡胚液冻干的耐热保护剂、其制备方法及其应用的制作方法冻干保护剂可影响生物制品的质量、效价和稳定性，改变生物制品的生产工艺，增大产品批次间的稳定性。耐热冻干保护剂有免疫活性但无药理活性，可在冻干和保存时维持疫苗的稳定性。耐热冻干保护剂及其制备方法是疫苗生产中的一项关键技术。对于耐热保护剂在鸡胚液保护中的应用，耐热保护剂中原辅材料的选择、配制、灭菌、保存和使用，对于耐热冻干保护剂的保护质量起着至关重要的作用。
本发明目的在于提供一种配制方法简单、成本低、具有良好保护性能的用于鸡胚液冻干的耐热保护剂。本发明的具体技术方案为用于鸡胚液冻干的耐热保护剂，由基础液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照4:1的体积比组成；其中，所述基础液由以下成分组成每800ml体积中含乳酸钙38 42g、硫脲9 llg、蔗糖48 52g、海藻糖4 6g、谷氨酸钠48 52g、酶解干酪素NZ-Amine AS 36 39g，其余为纯化水；所述PVP液由以下成分组成每200ml 体积中含PVP 28 32g、山梨醇9 llg，其余为纯化水。所述基础液由以下成分组成每800ml体积中含乳酸钙40g、硫脲10g、蔗糖50g、 海藻糖5g、谷氨酸钠50g、酶解干酪素NZ-Amine AS37. 5g，其余为纯化水。所述PVP液由以下成分组成每200ml体积中含PVP 30g、山梨醇10g，其余为纯化水。本发明所要解决的另一个技术问题是提供上述耐热保护剂的制备方法，其技术方案为制备用于鸡胚液冻干的耐热保护剂的方法，基础液的配制(1)加热纯化水至沸腾， 按所述比例缓慢加入乳酸钙，搅拌直至完全溶解透明，用定性滤纸过滤；(2)按所述比例依次将硫脲、蔗糖、海藻糖、谷氨酸钠、酶解干酪素NZ-Amine AS溶解到乳酸钙溶液中，加纯化水至所述比例；(3)过滤除菌；(4)常温保存；不能放2-8°C保存，否则会有析出而沉淀；PVP 液的配制(1)加热纯化水至沸腾，按所述比例加入PVP，再加山梨醇，搅拌直至完全溶解透明；(2)高压灭菌；将基础液与PVP液按照4:1的体积比混合，即得。常温保存1 一 2周可用。所述过滤除菌采用微孔滤膜的方式进行。所述微孔滤膜孔径为0. 22um。所述高压灭菌为在15磅压力下灭菌15分钟。本发明用于鸡胚液冻干的耐热保护剂在保护鸡胚液中的应用，耐热保护剂与鸡胚液按照1:1的体积比配制。本发明的有益效果为适用于鸡新城疫活疫苗、鸡传染性支气管炎活疫苗、鸡新城疫鸡传染性支气管炎二联活疫苗；耐热保护剂可常温保存；对鸡胚液有良好的保护性能； 配制方法简单、成本低。用于鸡胚液冻干的耐热保护剂，由基础液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照4:1的体积比组成；其中，所述基础液由以下成分组成每800ml体积中含乳酸钙40g、硫脲10g、蔗糖 50g、海藻糖5g、谷氨酸钠50g、酶解干酪素NZ-Amine AS 37. 5g，其余为纯化水；所述PVP 液由以下成分组成每200ml体积中含PVP 30g、山梨醇10g，其余为纯化水。制备用于鸡胚液冻干的耐热保护剂的方法，基础液的配制(1)加热纯化水至沸腾，按所述比例缓慢加入乳酸钙，搅拌直至完全溶解透明，用定性滤纸过滤；(2)按所述比例依次将硫脲、蔗糖、海藻糖、谷氨酸钠、酶解干酪素NZ-Amine AS (购自北京拜尔迪生物公司)溶解到乳酸钙溶液中，加纯化水至所述比例；(3)采用孔径为0. 22um的微孔滤膜过滤除菌；(4)常温保存；PVP液的配制(1)加热纯化水至沸腾，按所述比例加入PVPK30 (购自北京东环联合化工厂)，再加山梨醇，搅拌直至完全溶解透明；(2)在15磅压力下高压灭菌15 分钟；将基础液与PVPK30液按照4:1的体积比混合，即得。常温保存1 一 2周可用。用于鸡胚液冻干的耐热保护剂在保护鸡胚液中的应用，耐热保护剂与鸡胚液按照 1:1的体积比配制。实施例2:用于鸡胚液冻干的耐热保护剂，由基础液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照4:1的体积比组成；其中，所述基础液由以下成分组成每800ml体积中含乳酸钙42g、硫脲9g、蔗糖 52g、海藻糖4g、谷氨酸钠52g、酶解干酪素NZ-Amine AS 36g，其余为纯化水；所述PVP液由以下成分组成每200ml体积中含PVP ^g、山梨醇llg，其余为纯化水。制备用于鸡胚液冻干的耐热保护剂的方法，同实施例1。用于鸡胚液冻干的耐热保护剂在保护鸡胚液中的应用，同实施例1。实施例3 用于鸡胚液冻干的耐热保护剂，其特征是，由基础液和聚乙烯吡咯烷酮PVP液按照 4:1的体积比组成；其中，所述基础液由以下成分组成每800ml体积中含乳酸钙38g、硫脲 llg、蔗糖48g、海藻糖6g、谷氨酸钠48g、酶解干酪素NZ-Amine AS 39g，其余为纯化水； 所述PVP液由以下成分组成每200ml体积中含PVP 32g、山梨醇9g，其余为纯化水。制备用于鸡胚液冻干的耐热保护剂的方法，同实施例1。用于鸡胚液冻干的耐热保护剂在保护鸡胚液中的应用，同实施例1。试验例保护效力试验。1、试验材料毒株新城疫低毒力活疫苗(La Sota株)，购自中国兽医药品监察所；SPF鸡胚，购自山东省农科院家禽所；
2、试验疫苗按照本发明方法配制耐热冻干保护剂，与鸡胚液按照1:1的体积比配制， 冻干处理后，得疫苗；
3、试验疫苗的保存及效价测定分别置于2 8°C和室温保存，按2010年版《中国兽药典》方法测定不同时间病毒含量，试验结果见下表(单位为EID5tl/羽份)


本发明涉及一种用于鸡胚液冻干的耐热保护剂、其制备方法及其应用。其目的在于提供一种配制方法简单、成本低、具有良好保护性能的耐热保护剂。本发明的具体技术方案为用于鸡胚液冻干的耐热保护剂，由基础液和PVP液按照4:1的体积比组成；其中，所述基础液由以下成分组成每800ml体积中含乳酸钙38～42g、硫脲9～11g、蔗糖48～52g、海藻糖4～6g、谷氨酸钠48～52g、NZ-AmineAS36～39g，其余为纯化水；所述PVP液由以下成分组成每200ml体积中含PVP 28～32g、山梨醇9～11g，其余为纯化水。本发明的有益效果为有良好的保护性能；配制方法简单、成本低。