专利名称：一种适合Vero细胞生长的低血清培养基的制作方法图1是二中与10%小牛血清比较的Vero细胞培养48小时图片，图2是二中自制低血清培养基Vero细胞培养48小时图片，图3是二中与商用无血清相比VeiO细胞培养48小时图片。5.下面结合对本发明作进一步详细描述:实施例1:
本发明由5%小牛血清，大豆植物水解蛋白(￥组分)58/1，表皮生长因子2(^8/1，谷氨酰胺2mM组成，β -巯基乙醇30 μ M0
本实施方式降低了常规培养使用的小牛血清的量，采用大豆植物水解蛋白，其成本低于使用常规培养基，并同时解决了因降低小牛血清的使用而造成的细胞过早死亡，形态不饱和的问题。
实施例2:
本发明由2%小牛血清，大豆植物水解蛋白(V组分)5g/L，表皮生长因子60μ g/L,谷氨酰胺4mM，亚硒酸钠50nM，柠檬酸铁100 μ Μ，维生素C 100 μ Μ，乙醇胺200 μ M组成，β -巯基乙醇30 μ Μ，丙酮酸钠ImM。
本实施方式进一步降低血清的量，增加植物水解蛋白和表皮生长因子，增加了细胞的密度，提高了比生长速率，从而提高了医药领域的疫苗产量。
配制方法:
I)大豆植物水解蛋白母液的配制在实验室规模下使用大豆植物水解蛋白用于基本生长培养时，需要使用浓·缩且消毒的储存液。在我们实验室以100g/L的浓度作为储存液。称取IOg大豆植物水解蛋白粉末，将其溶解在IOOml基础培养基中，完全溶解后用0.22 μ m的无蛋白结合的注射器式过滤器进行消毒。如果在基础培养基中不易溶解，可以在过滤前将溶液置于37°C的培养箱中保持大约30分钟。然后贴上标签，放在4°C冰箱保存，备用。
2)表皮生长因子的配制将表皮生长因子溶解在IOmM的醋酸中，用0.22mm的过滤器过滤除菌，贴上标签，放在-20°C，至少能够保存两年。必要的情况下分装成小管，使用时尽量避免反复冻融。
3)谷氨酰胺的配制称取2.922g谷氨酰胺，溶解在IOOml三蒸水中，用0.22mm过滤器过滤除菌，用高压灭菌后的5ml离心管分装，贴上标签，-20°C保存。
4)培养基的配制首先在基础培养基中加入2%的小牛血清，再分别加入大豆植物水解蛋白、表皮生长因子、谷氨酰胺、维生素C、柠檬酸铁、乙醇胺和亚硒酸钠，调节PH为7.2-7.4，用基础培养基定容至终体积，于2 V _8°C保存。


本发明研制了一种适合Vero细胞生长的低血清培养基，将常规培养小牛血清用量由10％(V组分)降至2％，并且将常规添加的动物源成分替换成植物源成分和重组蛋白。该低血清培养基降低血清的用量，不但降低了成本，而且减小培养基中血清携带外源病原菌污染的可能，同时减少了血清中大量的杂蛋白，利于下游产品的分离纯化；用植物水解蛋白和重组表皮生长因子替代动物源的成分，降低动物源成分的副作用，提高了生物制品的安全性。本发明研制的培养基不但使Vero细胞生长良好，而且降低成本，减少外源病原菌污染，减少后期纯化工艺，提高细胞产品生产的稳定性，为以Vero细胞为病毒宿主或表达载体的生物制品的生产提供了一种优质的培养基。