山蚂蝗提取物及从中分离的总黄酮和山萘苷及其医药用途【技术领域】[0001]本发明涉及医药【技术领域】，是圆菱叶山蚂蝗提取物以及从中分离到的圆菱叶山蚂蝗总黄酮和山萘苷单体化合物在制备防治骨质疏松药物或食品中的应用。本申请是专利申请号为201210587958.6的分案申请。[0002]骨质疏松症(Osteoporosis, 0P)是一种常见病多发病。目前,全世界约有2亿人患骨质疏松症，其发病率已经跃居世界各种常见症的第7位。目前，治疗骨质疏松症的化学药主要使用雌激素类骨吸收抑制剂或雄性激素类等骨形成刺激剂，长期服用具有较大的副作用。从天然的植物中寻找治疗骨质疏松疾病且副作用小的有效提取物、有效部位及单体化合物成为研究热点。[0003]圆菱叶山蚂幢Podocarpium podocarpum(DC.) Yang et Huang 或 Desmodiumpodocarpum DC.是豆科蝶形花亚科(Papilionaceae, Leguminosae)山蚂幢属或长柄山蚂蝗属植物，生于海拔700~1000米山谷密林中或溪边，我国东部和西南部地区有分布。圆菱叶山蚂蝗以根、叶及全草入药，具有发表散寒，止血功能，主治急性风湿痹痛、跌打损伤，刀伤等(国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海科学技术出版社，3341-3343.)。现代药理学研究表明，圆菱叶山蚂蝗具有镇痛、解热和抗炎作用(Zhu, Z.Z., Ma, K.J., Ran, X., Zhang, H., Zheng, C.J., Han, T., Zhang, Q.Y., Qin, L.P., 2010.A nalgesic, ant1-1nflammatory and antipyretic activities of the petroleumether fraction from the ethanol extract of Desmodium podocarpum.Journal ofethnopharmacologyl33, 1126-1131.)。目前，仅有文献报道从长柄山蚂幢的变种尖叶长柄山虫马虫皇(Podocarpium podocarpum(DC.) Yang et Huang var.0xyphylIum(DC.)Yang et Huang)分离得到5个化合物:β -谷留醇、正三十烧醇、木栓酮、齐墩果酸和脱镁叶绿素甲酯(Ma, X.Q.，Zheng, C.J.，Hu, C.L.，Rahman, K.，Qin, L.P., 2011.The genusDesmodium(Fabaceae)-traditional uses in Chinese medicine, phytochemistry andpharmacology.J.Ethnopharmaco1.138,314-332.)。至今未见有关圆菱叶山蚂幢提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物具有防治骨质疏松症的报道。
[0004]本发明提供一种圆菱叶山蚂蝗提取物以及从中分离到的圆菱叶山蚂蝗总黄酮和山萘苷单体化合物，以及圆菱叶山蚂蝗提取物、圆菱叶山蚂蝗总黄酮或山萘苷单体化合物在制备防治骨质疏松药物或食品中的应用。[0005]本发明以圆菱叶山蚂蝗干燥全草为原料进行了提取分离，得到了圆菱叶山蚂蝗提取物，由圆菱叶山蚂蝗提取物制备圆菱叶山蚂蝗总黄酮并分离到山萘苷单体化合物。制备方法如下:[0006]1、制备圆菱叶山蚂蝗提取物[0007]将干燥圆菱叶山蚂蝗全草用水或体积百分比不超过95%的乙醇水溶液按常规水煎煮或回流提取，优选为60~80%乙醇，最佳为80%乙醇，将提取液减压浓缩至无醇味的浸膏，得圆菱叶山蚂蝗提取物。
[0008]2、制备圆菱叶山蚂蝗总黄酮
[0009] 将上述制得的圆菱叶山蚂蝗提取物采用大孔吸附树脂或聚酰胺柱层析纯化，优选大孔吸附树脂，先用水和20%乙醇水溶液洗脱，弃洗脱液，再用30~80%乙醇洗脱，收集洗脱液，优选收集30~60%乙醇的洗脱液，减压浓缩干燥，得圆菱叶山蚂蝗总黄酮。以山萘苷为对照采用紫外分光光度法(341nm)测定其中总黄酮含量在52~65%。
[0010]3、制备山萘苷单体化合物
[0011]将上述制备的圆菱叶山蚂蝗提取物用水溶解成混悬液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，将正丁醇萃取液减压浓缩成流浸膏状，用硅胶(100~200目)拌样，干法上柱，以二氯甲烷:甲醇为10:1~1:1的不同比例进行洗脱，收集二氯甲烷:甲醇为10: I~5: I的洗脱液，减压浓缩，用少量甲醇溶解后即析出黄色晶体，用甲醇清洗后得黄色粉末，即山萘苷单体化合物，HPLC测定含量为95~99%。山萘苷单体化合物的
化学结构式如下:
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