专利名称:内切葡聚糖酶nce5及其含有内切葡聚糖酶nce5的纤维素酶制剂的制作方法图1表示质粒pNCE5Bam的构建。图2表示pJND-c5的构建。将200ml所述粗纤维素酶制剂溶液加到硫酸铵终浓度为1M的溶液中,然后以20ml/分钟的流速上样到Source PHE柱子上(凝胶体积150ml,由Amersham Pharmacia Biotech制造),该柱子预先用1M硫酸铵溶液进行了平衡。接下来,采用硫酸铵浓度为1.0M至0M的50mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)以20ml/分钟的流速进行线性梯度洗脱并分步收集级分。在这些级分当中,发现当采用硫酸铵浓度为0.3M时得到的部分级分中的棉花原纤维-释放活性很强。因此,收集200ml的该级分。该步骤进行两次。将400ml如此得到的活性级分加到硫酸铵浓度为1.5M的50mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)中,然后以20ml/分钟的流速上样到Source ISO柱子上(凝胶体积125ml,由Amersham Pharmacia Biotech制造),该柱子预先用1.5M硫酸铵的50mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)进行了平衡。接下来,采用从硫酸铵浓度为1.5M的50mM磷酸盐缓冲液(pH7.0)至超纯水以20ml/分钟的流速进行线性梯度洗脱并分步收集级分。在这些级分当中,发现当采用硫酸铵浓度为1.05M时得到的部分级分的脱脂棉原纤维-释放活性很强。因此,收集200ml的该级分。然后,将硫酸铵加到200ml如此获得的活性级分中从而达到65%饱和度的水平,在4℃下将所述混合物搅拌60分钟,然后以15000rpm离心从而回收沉淀。将该沉淀溶解在20ml的蒸馏水中并利用Ultrafree/Biomax-5K(Millipore)进行脱盐从而回收到40ml的溶液。将30ml如此得到的活性级分加到50mM醋酸盐缓冲液(pH4.0)中,然后以5ml/分钟的流速上样到SP Sepharose FF柱子上(凝胶体积16ml,由Amersham Pharmacia Biotech制造),该柱子预先用50mM醋酸盐缓冲液(pH4.0)进行了平衡。接下来,采用从50mM醋酸盐缓冲液(pH4.0)至1M NaCl的50mM醋酸盐缓冲液(pH5.0)以4ml/分钟的流速进行线性梯度洗脱并分步收集级分。在这些级分当中,发现当氯化钠浓度约为0.12M时得到的部分级分的脱脂棉原纤维-释放活性很强。因此,收集12ml的该级分。此后,将6ml如此得到的活性级分加到50mM醋酸盐缓冲液(pH4.0)中,然后以1ml/分钟的流速上样到Mono S5/5HR柱子上(由AmershamPharmacia Biotech制造),该柱子预先用50mM醋酸盐缓冲液(pH4.0)进行了平衡。接下来,采用从50mM醋酸盐缓冲液(pH4.0)至1M NaCl的50mM醋酸盐缓冲液(pH5.0)以1ml/分钟的流速进行线性梯度洗脱并分步收集级分。在这些级分当中,发现当氯化钠浓度约为0.1M时得到的部分级分的脱脂棉原纤维-释放活性很强。因此,收集1至3ml的该级分。该级分被分离成NCE5。通过SDS-PAGE分析,该NCE5具有一条25kD的带。将上述纯化NCE5的纯化步骤重复50次,获得了大量的纯化样品。所述SDS-PAGE分析是利用Tefco提供的系统来进行的。即,使用了一个电泳槽(No.03-101),一个电源(3540型),一种8%的凝胶(01-015)和一个用于SDS-PAGE的缓冲液试剂盒(06-0301)。所述电泳条件是18mA/10分钟,然后是20mA/90分钟。为了电泳后进行蛋白质的测定,利用电泳用2D-银染色剂II“Daiichi”(由Daiichi Pure Chemicals制造)进行银染。利用由Bio-Red制造的SDS-PAGE分子量标准蛋白LowRange(161-0304)作为蛋白标准品。通过Neen Din等的方法(Neen Din等,生物技术(Biotechnology),9(1991),1096-1099)的改进方法测定脱脂棉原纤维-释放活性。即,当在下述条件下利用耐洗牢度试验仪进行反应时,以600nm的吸光度测定从脱脂棉中释放的原纤维量。
测量仪器耐洗牢度试验仪L-12(Daiei Kagaku Seiki MFG.,日本)温度 55℃时间 120分钟反应pHpH7(50mM磷酸盐缓冲液)向所述处理溶液中加入适当量的不锈钢珠和脱脂棉以及内切葡聚糖酶溶液。实施例2纤维素酶NCE5的部分氨基酸序列(1)N-端氨基酸序列的鉴定为了测定实施例1中纯化的蛋白质的N-端氨基酸序列,所述NCE5级分通过采用SDS-PAGE mini(由Tefco制造)来处理,通过电子印迹转移到PVDF膜上,采用考马斯亮蓝R250(由Nakalai Tesque制造)染色,脱色,用水冲洗,然后风干。当从其中切下印迹了25kD蛋白质的部分后,上样到492型蛋白质测序仪(由PE Applied Biosystems制造)以便分析N-端氨基酸序列,没有获得通过Edman降解的信号,因此,表明所述N-端氨基酸得到了修饰和保护。因此,将所述膜浸泡在0.5%的聚乙烯吡咯烷酮(分子量40000,由Sigma制造)/100mM醋酸溶液中于37℃下保持30分钟从而封闭所述膜上蛋白质未结合部分,通过采用Pfu焦谷氨酸氨基肽酶(由Kakara Shuzo制造)在50℃下处理5小时来除去所述被修饰的N-端残基,然后再次进行序列测定。如此获得的序列如下所示。
NCE5的N-端氨基酸序列
Ser-Gly-Ser-Gly-Arg-Thr-Thr-Arg-Tyr-Trp-Asp-(Cys)-(Cys)-Lys-Pro-Ser-(Cys)-Ala-Trp-Pro (20个残基) (SEQ IDNO3)(2)肽作图为了测定实施例1中纯化的蛋白质的内部氨基酸序列,对所述蛋白质进行还原烷基化,然后绘制其肽图谱。
也就是,将300μg的纯化蛋白质溶解在被装在一支试管中的500μl还原烷基化缓冲液(0.5M tris,7M盐酸胍,10mM EDTA·2Na2)中,然后向其中加入1mg的DTT。用氮气置换所述试管中的空气,将所述内容物在室温下保持5小时从而进行所述蛋白质的还原反应。还原反应后,向其中加入2.5mg的一碘代乙酸从而在室温下进行30分钟的烷基化暗反应。反应结束后,用蒸馏水对所述反应混合物进行透析以便脱盐,然后进行冻干,将如此获得的粉末用作一种还原性烷基化NCE5。
将该粉末溶解在0.1M的碳酸氢铵缓冲液(pH8.0)中。将该溶液与基于蛋白质的约1/50摩尔量的胰蛋白酶(由Promega制造)混合并在37℃下反应过夜。通过利用172μ型的制备型HPLC系统(由PE AppliedBiosystems制造)对所述的消化产物进行柱层析(柱子C18 220×2.1mm,0.1%TFA的5%乙腈至0.085%TFA的35%乙腈梯度),分离出5种肽。每一种如此获得的肽片段的氨基酸序列通过492型的蛋白质测序仪(由PE Applied Biosystems制造)来进行测定。测得的结果如下所示T-28.8Leu-Lys-Pro-Gly-Cys-Tyr-Trp-Arg(8个残基) (SEQ ID NO4)T-32.6Tyr-Trp-Asp-Cys-Cys-Lys(6个残基) (SEQ ID NO5)T-35.9Trp-Asp-Asn-Pro-Leu-Phe-Asp-Gly-Gly-Asn-Thr-Arg(12个残基)(SEQ ID NO6)T-35.9Glu-Trp-Cys-Cys-Ala-Cys-Tyr-Glu-Leu-Thr-Phe-Thr(12个残基)(SEQ ID NO7)T-43.0Phe-Asp-Trp-Phe-Leu-Asn-Ala-Asp-Asn-Pro-Ser-Val-Asn-Trp-Arg******* (15个残基)(SEQ ID NO8)在通过肽作图获得的N-端氨基酸序列和氨基酸序列中,4种肽与由S.Takashima等(S.Takashima等,生物技术杂志,67,85-97(1999))报道的灰色腐质霉eg14序列相同。然而,在T-43.0中没有发现相同的序列。因此表明尽管所述序列具有同源性,但是它是不同的因而是一种新型蛋白质。
制备下列与由*所示肽T-43.0的N-端和部分氨基酸序列对应的合成寡核苷酸作为引物。
N-端5′-TAY TGG GAY TGY TGY AAR CC-3′(20聚体)(SEQ ID NO9)T-43.05′-TCI GCR TTI ARR AAC CAR TC-3′(20聚体)(SEQ ID NO10)以1μg的cDNA作为模板,在下列条件下于含1.25个单位的LA TaqDNA聚合酶(由Takra Shuzo制造)和其中所附的缓冲液、0.2mM dNTP、10%DMSO和1μM的各种引物的50μl反应溶液中进行PCR。在94℃下保持1分钟,(94℃,30秒钟,55.0℃,30秒钟,72.0℃,1分钟)×25次,然后在72.0℃下保持5分钟。
通过该反应扩增了一个约500bp的DNA片段,利用DYEnamic ET终止子循环测序预混试剂盒(由Amersham Pharmacia Biotech制造)和ABI PRISM 310基因分析仪(由PE Applied Biosysytems制造)并按照其中所附的使用说明书进行序列测定。结果,由如此测定的核苷酸序列推导出的氨基酸序列含有所有实施例2中获得的部分氨基酸序列。因此,将该序列作为以下筛选实验中的一个探针。(3)纤维素酶组分NCE5基因的克隆(i)通过噬菌斑杂交的筛选将通过PCR扩增的100ng的500bp DNA片段预先用ECL直接DNA/RNA标记检测系统(由Amersham Pharmacia Biotech制造)进行标记。
将在(1)-(iv)中制备的噬菌斑转移到Hybond-N+尼龙转移膜(由Amersham Pharmacia Biotech制造)上,采用0.4N氢氧化钠进行碱处理从而使膜上的重组噬菌体DNA变性为单链DNA,用5×SSC(1×SSC15mM柠檬酸三钠,150mM氯化钠)冲洗,然后风干固定所述的DNA。接下来,按照试剂盒中的使用手册进行杂交和检测反应,然后对富士医用X光胶片(FUJI MEDICAL X-RAY FILM)(由Fuji Photo Film制造)进行感光处理从而得到6个阳性克隆。(ii)噬菌体DNA的制备按照试剂盒所附的使用手册由阳性克隆制备作为质粒DNA的DNA。
由氨苄青霉素抗性大肠杆菌菌株SOLRTM制备一种其中所述DNA片段被克隆到pBluescript SK(-)中的质粒,在与上述相同的条件下以所述质粒为模板并利用步骤(2)中使用的N-端和T-43.0引物进行PCR。结果,从一个质粒中得到一个500bp的扩增产物。由于据推定所述目的DNA被克隆到了该质粒中,所以采用EcoRI进行消化并进行琼脂糖凝胶电泳。
结果表明,所述质粒含有一个大约1kbp的EcoRI片段。(4)cDNA核苷酸序列的测定插入到步骤(3)-(ii)中获得的阳性重组pBluescript SK(-)质粒中的大约1kbp的EcoRI片段的核苷酸序列通过利用T3和T7引物的相同方法来测定。结果,该核苷酸序列含有一个672bp可读框,由该可读框分别推导出的核苷酸序列和氨基酸序列由序列表中的SEQ ID NO2和SEQ ID NO1表示。
而且,由于从所推导出的这种蛋白质的N-端数第18位氨基酸以后的序列与实施例2的步骤(1)中测定的25kDa蛋白质的N-端序列相同,所以表明该基因编码25kDa蛋白质。
另外,还认为所述可读框的第1个至第18个氨基酸的序列是一个用于将所述蛋白质分泌到胞外部分的信号序列。
将如此制备的原生质体悬浮在1ml的SUTC缓冲液中,将100μl的该悬浮液与10μg的DNA(TE)溶液(10μl)进行混合后在冰浴中保持5分钟。接下来,与400μl的PEG溶液(60% PEG4000,10Mm氯化钙,10mM Tris-HCl(pH7.5))混合,将该混合物在冰浴中保持20分钟,与10ml的SUTC缓冲液混合,然后以2500rpm离心10分钟。将如此收集的原生质体悬浮在1ml的SUTC缓冲液中,以4000rpm离心5分钟并最终悬浮在100μl的SUTC缓冲液中。
将如此处理的原生质体与YMG软琼脂一起铺在一种含潮霉素(200μg/ml)的YMG培养基(1%葡萄糖、0.4%酵母提取物、0.2%麦芽提取物、1%琼脂(pH6.8))上并在37℃下培养5天,将如此形成的菌落用作转化体。实施例5pJND-c5转化体的培养和鉴定(1)通过SDS-PAGE进行评价将质粒pJND-c5引进上述的Humicola insolens MN200-1中并筛选出40个具有潮霉素抗性的菌株。利用(N)培养基将这些菌株在37℃下培养5天,通过12%-SDS-PAGE mini(由Tefco制造)电泳分析如此获得的培养物上清液,结果发现12个克隆中的一种被认为是NCE5的25kDa蛋白质的含量增加得尤其明显。(2)重组NCE5的N-端氨基酸残基的鉴定为了证实在上述步骤(1)中大量表达的所述蛋白质是由NCE5基因编码的,对该蛋白质的N-端氨基酸序列进行了测定。首先,通过12%-SDS-PAGE mini电泳对所述培养物上清液进行分离,按照实施例2中的方法将得到的蛋白质电转移到一种PVDF膜上,分子量为25kDa的蛋白质经过处理除去了其被修饰的N-端氨基酸残基后进行蛋白质序列的测定。结果,其序列与由质粒pJND-c5的核苷酸序列推导出的纤维素酶NCE5的N-端氨基酸序列一致。实施例6评价由Humicola insolens表达的NCE5磨蚀被染色的粗斜纹布含纤维素织物的活性在下述条件下,利用实施例5中获得的表达NCE5基因的Humicolainsolens的培养液以及Humicola insolens的培养液,对一条退浆12盎司的蓝色牛仔裤进行磨蚀处理。按照国际公布WO98/03640的说明书通过对将表达质粒pEGD01引进Humicola insolens MN200-1后得到的转化体进行振荡培养来得到表达NCE4基因的Humicola insolens的培养液。在37℃下利用(N)培养基将所述转化体振荡培养5天。所述Humicola insolens的培养液通过在37℃下将Humicola insolensMN200-1振荡培养5天来得到。
试验机器20kg涤衣机(由Sanyo Electric制造的全自动洗衣机SCW5101)温度65℃时间60分钟pH 6.2(6.7mM磷酸盐缓冲液)向处理溶液中加入适量的橡胶球和每种纤维素酶制剂的溶液。
利用分光光度计(由Minolta制造,CM-525i)测定一种实验室显示系统L值(亮度)来作为磨蚀度。通过计算相对对照(未处理的织物)增加的L值(增加的亮度),即ΔL值,来评估磨蚀度,也就是说,对每种测试的粗斜纹布测定10个点的ΔL值(n=10),然后计算出它们的平均值。在此基础上,计算出作为获得ΔL值约为6所必需的蛋白质的内切葡聚糖酶的浓度。
通过利用蛋白质测定试剂盒(由Bio-Rad实验室制造)制作牛血清白蛋白的标准曲线来测定所述蛋白质的浓度。
结果见表1。
表1样品 蛋白质浓度Humicola insolens培养液80.0mg/升表达NCE4基因的Humicola insolens的培养液6.0mg/升表达NCE5基因的Humicola insolens的培养液6.0mg/升实施例7 评价由Humicola insolens表达的NCE5在磨蚀被染色的粗斜纹布含纤维素织物的过程中的逆染色在各种温度下利用实施例5中获得的表达NCE5基因的Humicolainsolens的培养液和表达NCE4基因的Humicola insolens的培养液对被染色的粗斜纹布含纤维素织物进行磨蚀。需要加入的酶浓度被定义为在65℃下获得ΔL值大约为6所必需的量。
试验结束后,为了评估逆染色,利用分光光度计(由Minolta制造,CM-525i)以实验室显示系统L值(亮度)的形式测定缝在所述被染色的粗斜纹布含纤维素织物组织上的一块白棉布的白度。L值较高意味着白布较白且逆染色度较低。
所述结果见表2。与NCE4相比,在每一反应温度下,NCE5都具有较高的磨蚀度和较低的逆染色度,因此该结果表明NCE5的逆染色度较低。
表2酶反应温度磨蚀度(ΔL)逆染色度(L)NCE5 65℃6.00 74.9955℃8.32 75.1045℃7.74 75.33NCE4 65℃5.88 74.5355℃7.29 74.1745℃6.30 74.56实施例8利用耐洗牢度试验仪评价由Humicola insolens表达的NCE5去除再生纤维素织物上的绒毛的作用按照下述方式评价实施例5中获得的由Humicola insolens表达的NCE5从再生纤维素织物的一个典型例子,lyocell进行上去除绒毛的活性。
在一个大洗衣机中与一种表面活性剂和橡胶球一起进行洗涤,使得一块被预先染色的lyocell针织布(由日本Toyoshima制造)的表面起毛。然后在下列条件下对这种起毛的lyocell针织布(由日本Toyoshima制造,10cm×10cm)进行去除lyocell绒毛的处理从而计算出完全去除所形成的绒毛所需要的由Humicola insolens表达的NCE5的蛋白质浓度。
试验机器涤衣机L-12(日本Daiei Kagaku Seiki MFG.)温度55℃
时间60分钟反应溶液40ml反应pH pH5(10mM醋酸盐缓冲液)向处理溶液中加入适量的橡胶球和所述的内切葡聚糖酶溶液。
结果表明通过加入蛋白质浓度为6mg/L的酶完全去除了所述的绒毛。实施例9评价由Humicola insolens表达的NCE5当被配制成洗涤剂时去除棉织品上的绒毛的作用按照下述方式评价实施例5中获得的由Humicola insolens表达的NCE5去除棉织品上的绒毛的活性。即在一个大洗衣机中利用实施例5中制备的表达NCE5的Humicola insolens培养物上清液与一种表面活性剂和橡胶球一起进行洗涤,使得一块针织棉布(2cm×15cm)的表面起毛。然后在下列条件下进行去除绒毛的处理。计算出完全去除所形成的绒毛所需要的蛋白质浓度。
试验机器涤衣机L-12(日本Daiei Kagaku Seiki MFG.)温度40℃时间120分钟反应溶液40ml反应pH pH9.3(5mM碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液)(非离子表面活性剂)Persoft NK-100(由Nippon Oil & Fats制造)0.20g/L(阴离子表面活性剂)LAS(由Wako Pure Chemical Industries制造)0.10g/L向处理溶液中加入适量的橡胶球和所述的内切葡聚糖酶溶液。
结果表明通过加入蛋白质浓度为45mg/L的酶完全去除了所述的绒毛并使得布的颜色能够变得澄明。
另外,还按照JIS L1096的45°悬臂式方法测定了棉针织物的抗弯曲性。结果表明如果不加入所述的酶处理,被测试的针织棉布片的迁移长度为127mm,如果加入15mg/L(蛋白质浓度)的NCE5进行处理,被测试的针织棉布片的迁移长度为81mm,显然它被软化了。实施例10评价由Humicola insolens表达的NCE5提高纸浆的打浆度的效果将蛋白质量为60μg的表达NCE5的Humicola insolens培养液加到6g干重的来源于宽叶树的未漂白牛皮纸浆中,然后在50℃下于270ml的50mM柠檬酸盐缓冲液(pH6.0)中反应1小时。通过将所述混合物煮沸10分钟使得所述酶失活,然后按照JIS P-8121测定打浆度(CSF)。
结果见表3。
表3样品 CSF(ml)未加入酶试验区 492表达NCE5的Humicola insolens培养液 519本文引用的所有出版物、专利和专利申请的全部内容被引入本申请的说明书中作为参考。
工业实用性本发明的内切葡聚糖酶NCE5可被用于洗涤剂组合物中而且还可用于使废纸脱墨、提高纸浆的打浆度和改善含纤维素织物的性能,如绒毛的去除、手感及外观的改善、使颜色澄明、颜色的局部改变和硬挺度的降低。
序列表<110>Meiji Seika Kaisha,Ltd.<120>含内切葡聚糖酶NCE5的纤维素酶制剂<130>PH-1228-PCT<160>12<170>PatentIn Ver.2.0<210>1<211>223<212>PRT<213>Humicola insolens<400>1Met Gln Leu Pro Leu Thr Thr Leu Leu Thr Leu Leu Pro Ala Leu Ala1 5 10 15Ala Ala Gln Ser Gly Ser Gly Arg Thr Thr Arg Tyr Trp Asp Cys Cys20 25 30Lys Pro Ser Cys Ala Trp Pro Gly Lys Gly Pro Ala Pro Val Arg Thr35 40 45Cys Asp Arg Trp Asp Asn Pro Leu Phe Asp Gly Gly Asn Thr Arg Ser50 55 60Gly Cys Asp Ala Gly Gly Gly Ala Tyr Met Cys Ser Asp Gln Ser Pro65 70 75 80Trp Ala Val Ser Asp Asp Leu Ala Tyr Gly Trp Ala Ala Val Asn Ile85 90 95Ala Gly Ser Asn Glu Arg Gln Trp Cys Cys Ala Cys Tyr Glu Leu Thr100 105 110Phe Thr Ser Gly Pro Val Ala Gly Lys Arg Met Ile Val Gln Ala Ser115 120 125Asn Thr Gly Gly Asp Leu Gly Asn Asn His Phe Asp Ile Ala Met Pro130 135 140Gly Gly Gly Val Gly Ile Phe Asn Ala Cys Thr Asp Gln Tyr Gly Ala145 150 155 160Pro Pro Asn Gly Trp Gly Gln Arg Tyr Gly Gly Ile Ser Gln Arg His165 170 175Glu Cys Asp Ala Phe Pro Glu Lys Leu Lys Pro Gly Cys Tyr Trp Arg180 185 190Phe Asp Trp Phe Leu Asn Ala Asp Asn Pro Ser Val Asn Trp Arg Gln195 200 205Val Ser Cys Pro Ala Glu Ile Val Ala Lys Ser Gly Cys Ser Arg210 215 220<210>2<211>672<212>DNA<213>Humicola insolens<400>2atgcagctcc ccctgaccac gctcctcacc ctcctccccg ccctcgcggc ggcccagtcc 60ggcagcggcc gcaccacgcg ctactgggac tgctgcaagc cgtcgtgcgc gtggcccggc 120aagggcccgg cgcccgtgcg gacgtgcgac cggtgggaca acccgctgtt cgacggcggc 180aacacgcgca gcgggtgcga cgcgggcggc ggcgcctaca tgtgctcgga ccagagcccg 240tgggcggtca gcgacgacct ggcgtacggc tgggcggccg tcaacattgc cggctccaac 300gagaggcagt ggtgctgcgc ctgctacgag ctgaccttca ccagcgggcc ggtggcgggc 360aagaggatga ttgtgcaggc gagcaacacg ggaggcgatt tggggaacaa ccactttgat 420attgctatgc ccggcggtgg cgtcggtatc ttcaacgcct gcaccgacca gtacggcgcg 480ccccccaacg gctggggcca gcgctacggc ggcatcagcc aacgccacga gtgcgacgcc 540ttccccgaga agctcaagcc cggctgctac tggcgctttg actggttcct caacgccgac 600aacccgagcg tcaactggcg gcaggtcagc tgcccggccg agattgtggc caagagcggc 660tgctcgcgtt aa 672<210>3<211>20<212>PRT<213>Humicola insolens<400>3Ser Gly Ser Gly Arg Thr Thr Arg Tyr Trp Asp Cys Cys Lys Pro Serl 5 10 15Cys Ala Trp Pro20<210>4<211>8<212>PRT<213>Humicola insolens<400>4Leu Lys Pro Gly Cys Tyr Trp Arg1 5<210>5<211>6<212>PRT<213>Humicola insolens<400>5Tyr Trp Asp Cys Cys Lys1 5<210>6<211>12<212>PRT<213>Humicola insolens<400>6Trp Asp Asn Pro Leu Phe Asp Gly Gly Asn Thr Arg1 5 10<210>7<211>12<212>PRT<213>Humicola insolens<400>7Gln Trp Cys Cys Ala Cys Tyr Glu Leu Thr Phe Thr1 5 10<210>8<211>15<212>PRT<213>Humicola insolens<400>8Phe Asp Trp Phe Leu Asn Ala Asp Asn Pro Ser Val Asn Trp Arg1 5 10 15<210>9<211>20<212>DNA<213>合成序列<220><223>合成序列的描述合成DNA<400>9taytgggayt gytgyaarcc 20<210>10<211>20<212>DNA<213>合成序列<220><223>合成序列的描述合成DNA<220><221>n<222>3<223>肌苷<220><221>n<222>9<223>肌苷<400>10tcngcrttna rraaccartc 20<210>11<211>38<212>DNA<213>合成序列<220><223>合成序列的描述合成DNA<400>11ggggatcctg ggacaagatg cagctccccc tgaccacg 38<210>12<211>38<212>DNA<213>合成序列<220><223>合成序列的描述合成DNA<400>12ggggatcctg catttaacgc gagcagccgc tcttggcc 38
本发明提供了一种内切葡聚糖酶,该酶可用于减少含纤维素纤维的绒毛、改善其手感和外观、使颜色澄明、局部改变颜色、降低硬挺度并可用于洗涤剂组合物中,还可用于使废纸脱墨和提高纸浆的打浆度等。从Humicola insolens中克隆了一种编码内切葡聚糖酶NCE5的cDNA并测定了其DNA序列和由该DNA序列推导出的氨基酸序列。
内切葡聚糖酶nce5及其含有内切葡聚糖酶nce5的纤维素酶制剂制作方法
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