专利名称：磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用的制作方法磷酸三酯酶(Phosphotriesterase, EC 3. I. 8. I)可以水解广谱的有机磷化合物，后者被广泛的用于农业杀虫剂和化学战神经毒剂，磷酸三酯酶能够催化断裂有机磷化合物的磷酯键而使其脱毒。如下式所示 ... gj . ...+ HOZ H2O、oh R2、ZR2R1/R2:焼基Z:酿.脂肪族.芳香族S味坏基团有机磷化合物对人及家畜具有极强的毒副作用。一些比较常见的有机磷化合物及其毒性见表I。至今有超过100种有机磷杀虫剂在世界各地广泛使用，约占杀虫剂种类的38%。仅在美国每年大约有5万吨有机磷杀虫剂用于农业生产，除此每年通过“牛蚤根除计划”大约产生40万升蝇毒磷(coumaphos)废液；而一些欧盟国家生产数百万升地亚农(diazinon)用于清洗羊毛药水。由于过量和连续的使用，许多土地和水资源遭到了严重的污染，对人类健康构成了巨大威胁(Singh, B. K. Organophosphorus-degrading bacteria ecology and industrial applications. Nat. Rev. Microbiol. 2009,7 (2) :156-164.)。世界上每年大概有三百万人由于有机磷摄入中毒，其中约二十万人死亡(Karalliedde，L. , Senanayake, N. , Organophosphorus insecticide poisoning.J. Int.Fed.Cl in.Chem. 1999,11(2) :4_9.)。另一方面，世界上用于军事储备的化学战神经毒剂约为20万吨，根据国际化学武器条约这些化学武器在2023年前需要全部销毁。因此磷酸三酯酶在有机磷污染物的降解、除污、生物传感器、医药研发等领域具有广阔的应用潜力。表I几种常见的有机磷化合物及其毒性本发明提供了一种磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用。本发明由来源于嗜热细菌的Geobacillus kaustophilus HTA426的磷酸三酯酶基因出发，利用易错PCR的方法，经过多轮的突变和筛选，最终获得一个磷酸三酯酶活力显著提高的突变体，在该突变体的氨基酸序列中涉及到的突变为Phe28Ile、Tyr99Leu、Thr171Ser、Phe228Leu、Asn269Ser、Val270Gly、Trp271Cys、Gly273Asp。突变体对于几种常见的有机磷杀虫剂的比活力相比野生型得到了显著提高，在有机磷毒物的生物降解领域具有广阔的应用前景。