专利名称：一种豌豆ems突变体库构建的方法豌豆是世界第二大食用豆类作物，常年种植面积I亿亩，在农作物轮作倒茬、畜牧业和可持续农业发展中起着重要的作用。近年，随着鲜食豌豆、淀粉加工、畜牧业的发展以及种植结构的调整，豌豆产品收购价格上升，产值明显提高，使广大农户种植生产的积极性显著增加。冬季鲜食豌豆生产中肥料使用少、农药残留低等特点使其成为高端的緑色蔬菜，在保障食品安全和丰富人民菜篮子工程等方面发挥着重要作用。化学诱变具有成本低、使用方便、诱变作用专ー性强等特点，是ー种迅速发展的育种途径。甲基磺酸こ酯(Ethylmethame sulfonate, EMS)是ー种良好的化学诱变剂，目前 已成为在作物诱变育种中应用最广泛、应用效果最好的ー种化学诱变剂。化学诱变始于20世纪初。Morgan (1910), Mc-Dongal (1911), Bauer (1916), Sacarov (1936)等相继发现了化学物质能提高果蝇及某些微生物的突变率，1943年Ochlkers用脲脘处理月见草以后，化学药剂的诱变作用得到肯定。1967年Nilan用硫酸ニこ脂(DES)处理大麦种子，育成了产量高、茎杆矮、抗倒伏的品种，开创了化学诱变在农作物育种上应用的先河。近几年来，国内外在诱变育种中应用诱导冬小麦、大豆、玉米、大麦、水稻等均获得了重大成就。中国农业科学院石家庄现代化研究所曾利用EMS处理冬小麦，M2代变异率达到15. 7%以上，获得9个早熟、矮杆突变系，比原品种增产2. 8% 20. 5% ;陈绍江等采用含有石蜡油的花粉诱变获得高油玉米突变体。王英培等用EMS处理大豆，筛选出ー批高蛋白(45% 50% )、高亚油酸(60%以上)、低亚麻酸的优良突变系。据不完全统计，国际上已有61个国家利用化学诱变在164种植物上育成2277个品种,但在豌豆上没有相关技术。本研究由农业部948项目豌豆突变体库与普通菜豆抗逆资源引进与利用项目编号2012-Z52资助。
本发明主要解决的技术问题是提供ー种豌豆EMS突变体库构建的方法，为豌豆基因遗传分析及功能基因研究奠定了材料基础，为该品种的改良提供了重要的育种材料。为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是ー种豌豆EMS突变体库构建的方法，包括以下步骤(I)用蒸馏水浸泡豌豆种子4小时；(2)以IOOmM K3P04, pH7. 5作为缓冲液，配制质量体积比0. 7% EMS溶液；(3)用配好的EMS在室温下浸泡种子，轻轻震荡8小时，转速20rpm/min ；(4)用大量蒸馏水连续充分冲洗种子至无气味；(5)将洗好的种子称为Ml代种子直接播于土壤中，待种子成熟后，单株收种，这些种子称为M2代；(6)M2代姆株取5粒种成株系,单株记载相关性状；(7)群体诱导。所述相关性状为株高增高、分枝增多即5-6个、花器官外露、双花、叶片及荚表面蜡质缺失。本发明的有益效果是本发明对豌豆HMS诱导浓度和时间进行了系统研究，总结归纳出豌豆HMS诱导的最佳时间和浓度处理，搭建出豌豆EMS诱导的技术平台，可以重复实施。利用该方法，对生产上大面积推广种植的中豌6号进行了诱变处理，获得2687个M2株系，并鉴定出株型、叶色和花等多种类型的突变体，为豌豆基因遗传分析及功能基因研究奠定了材料基础，为该品种的改良提供了重要的育种材料。本发明公开了一种豌豆EMS突变体库构建的方法，包括对豌豆EMS诱导浓度和时间进行了系统研究，总结归纳出豌豆EMS诱导的最佳时间和浓度处理，搭建出豌豆EMS诱导的技术平台。利用该方法，对生产上大面积推广种植的中豌6号进行了诱导处理，获得2687个M2株系，并鉴定出株型、叶色和花等多种类型的突变体，为豌豆基因遗传分析及功能基因研究奠定了材料基础，为该品种的改良提供了重要的育种材料。