专利名称：Nnmt蛋白单克隆抗体、杂交瘤细胞株及应用的制作方法
本发明目的是提供一种能稳定高效分泌抗NNMT蛋白的抗体的杂交瘤细胞株，以及该细胞株分泌的单克隆抗体及应用。本发明采用的技术方案是一种尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株1E7，保藏于中国典型 培养物保藏中心，地址中国，武汉，武汉大学，邮政编码430072，保藏日期2011年8月31日，保藏编号CCTCC N0C 201167。该细胞株由尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白作为免疫原免疫小鼠后，筛选获得。本发明还涉及一种由所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体(1E7)。经检测，所述单克隆抗体为IgG亚类、2a K轻链型。本发明还涉及所述的单克隆抗体在制备检测尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白的试剂盒中的应用。由于本发明的单克隆抗体对于NNMT蛋白均有高水平的抗体效价，因此本发明的单克隆抗体或其活性片段或其保守性变异体，或其任意组合可用于制备用于检测NNMT蛋白的试剂、药剂或试剂盒。所述试剂、药剂或试剂盒可用于检测NNMT蛋白，从而可以进一步用于诊断、治疗和预后判断NNMT相关肿瘤。本发明的试剂、药剂或试剂盒优选包括标记的本发明的单克隆抗体或其活性片段或其保守性突变体。所述标记指生物标记或化学标记，例如酶标记的或突光标记的(例如荧光素标记)或化学发光标记的。优选地，所述酶标记为辣根过氧化物、丙酮酸激酶或葡萄糖氧化酶标记。检测尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白时具体可采用双抗夹心法进行检查NNMT蛋白抗原，具体为先将一抗(特异性单克隆抗体)与相应的(临床样本中的)组织抗原结合，形成抗原抗体复合物，再用二抗(酶标记的抗体)与复合物中的特异抗体结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，最后用底物显色剂显色。本申请发明人采用尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白作为免疫原免疫小鼠制备了能稳定分泌抗NNMT单克隆抗体的细胞株，然后通过NNMT蛋白的间接ELISA法筛选并进行，获得了能分泌的细胞系及由所属细胞系产生的单克隆抗体。本发明的有益效果主要体现在本发明的1E7单克隆抗体对NNMT蛋白均具有较高的抗体效价，亲和力和纯化后较高的纯度，提示该单克隆抗体可应用于对NNMT蛋白的科研研究领域，也可应用于临床检测，对不同组织的病理切片进行免疫组化，检测该组织中NNMT蛋白的表达情况，有助于NNMT相关肿瘤的诊断、治疗和预后判断。图I为2F8、1E7腹水及纯品抗体SDS-PAGE电泳图；M =Marker I 2F8腹水2 2F8纯品抗体3 1E7腹水4 1E7纯品抗体；图2为2F8细胞株分泌抗体的亚类、轻链型鉴定结果；图3为1E7细胞株分泌抗体的亚类、轻链型鉴定结果； 图4为2F8纯品抗体凝胶扫描图；图5为1E7纯品抗体凝胶扫描图； 图6为2F8、1E7细胞株纯品抗体的亲和力反应曲线图；图7为2F8细胞株单抗的免疫印迹；M =Marker I =NNMT-GST融合蛋白2:NNMT蛋白 3:GST蛋白；图8为1E7细胞株单抗的免疫印迹;M =Marker I =NNMT-GST融合蛋白2:NNMT蛋白 3:GST蛋白；图9为肝脏正常组织的免疫组化(X 100)；图10为透明细胞型肾癌(a)及正常肾组织(b)的免疫组化(X100)；图11为乳头状甲状腺癌(a)及正常甲状腺组织(b)的免疫组化(X 100)。
本发明提供了一种尼克酰胺-N-甲基化酶蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，以及该细胞株分泌的单克隆抗体及应用。本发明的单克隆抗体对NNMT蛋白均具有较高的抗体效价，亲和力和纯化后较高的纯度，提示该单克隆抗体可应用于对NNMT蛋白的科研研究领域，也可应用于临床检测，对不同组织的病理切片进行免疫组化，检测该组织中NNMT蛋白的表达情况，有助于NNMT相关肿瘤的诊断、治疗和预后判断。