专利名称：植物耐逆性相关蛋白GmNF-YB1及其编码基因和应用的制作方法干旱、高盐及低温等逆境胁迫是影响植物生长、发育的障碍因子。因此，了解小麦对逆境条件的应答与信号传导机制，提高小麦品种的抗逆性，成为小麦遗传研究及小麦品种改良的重要任务之一。在逆境胁迫下植物体内会产生一系列应答反应，伴随着许多生理生化及发育上的变化。明确植物对逆境的反应机制，将为抗逆基因工程研究和应用提供科学论据。目前，植物抗逆性研究已逐渐深入到细胞、分子水平，并与遗传学和遗传工程研究相结合，探索用生物技术来改进植物生长特性，其目的是提高植物对逆境的适应能力。在干旱、高盐和低温等环境胁迫的逆境条件下，植物能够在分子、细胞和整体水平上做出相应的调整，以最大程度上减少环境所造成的伤害并得以生存。许多基因受胁迫诱导表达，这些基因的产物不仅能够直接参与植物的胁迫应答，而且能够调节其它相关基因的表达或参与信号传导途径，从而使植物避免或减少伤害，增强对胁迫环境的抗性。与胁迫相关的基因产物可以分为两大类第一类基因编码的产物包括离子通道蛋白、水通道蛋白、 渗透调节因子(蔗糖、脯氨酸和甜菜碱等)合成酶等直接参与植物胁迫应答的基因产物；第二类基因编码的产物包括参与胁迫相关的信号传递和基因表达调节的蛋白因子，如蛋白激酶、转录因子等。其中，转录因子在植物胁迫应答的基因表达调控中起着重要作用。转录因子也称为反式作用因子，是能够与真核基因启动子区域中顺式作用元件发生特异性作用的DNA结合蛋白，通过它们之间以及与其它相关蛋白之间的相互作用，激活或抑制转录。转录因子的DNA结合区决定了它与顺式作用元件结合的特异性，而转录调控区决定了它对基因表达起激活或是抑制作用。此外，其自身活性还受到核定位及寡聚化等作用的影响。目前已知在植物中与胁迫相关的转录因子主要有具有AP2结构域的 AP2(APETALA2)/EREBP (乙烯应答元件结合蛋白，ethylene responsive element bindingprotein)转录因子家族、含有碱性区域和亮氨酸拉链的bZIP (basic region/ leucinezipper motif transcription factors)类转录因子、含有保守的WRKY氨基酸序列的WRKY转录因子家族、结合CCAAT-box的主要核转录因子的CBF(CCAAT binding factor) 类转录因子、含有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)和亮氨酸拉链的MYC家族和具有色氨酸簇 (Trp cluster)的MTO家族。这些转录因子家族，除WRKY家族不参与植物的水胁迫反应外， 其它四个家族均参与调节植物对干旱、高盐和低温等的逆境胁迫反应。其中，NF-Y转录因子在高等植物中广泛存在，近年来，在拟南芥、玉米、水稻均有报道，这表明NF-Y转录因子在高等植物中普遍存在并具有重要作用。NF-Y (核转录因子，Nuclear Factor Y)是一种结合CCAAT_box的主要的核转录因子，特异的识别并结合许多真核生物组成型、诱导性和细胞周期依赖性基因的启动子或增强子中的保守序列CCAAT-box，并调控这些基因的转录水平的表达。NF-Y是由NF_YA、NF_YB 和NF-YC三个不同亚基组成的三聚体。NF-TO和NF-YC的组蛋白折叠基序(HFM)相互作用使之形成二聚体，然后结合NF-YA形成异源三聚体的NF-Y复合物，从而结合CCAAT-box，调节其靶基因的转录。NF-YA至少有两个结构域用于蛋白质的结合富含谷氨酰胺的结构域 (Q-rich domain)和一个亚基相互作用的结构域(subunitinteraction domain)。NF-YB 也有两个蛋白结合的结构域组蛋白折叠基序(histone-fold motif)和TATA结合蛋白 (TATA-binding protein)结合结构域(TBP-binding domain)。NF-YC 有三个蛋白质的结合结构域组蛋白折叠基序，TBP结合结构域以及富含谷氨酰胺的结构域。NF-YA和NF-YC 的结构氨基酸序列与组蛋白折叠基序同源，NF-YB与H2B组蛋白折叠基序相关，而NF-YC于 H2A组蛋白折叠基序相关，该基序由三个α螺旋和两个环组成，负责Η2Α/Η2Β 二聚体的形成。目前，在植物中关于NF-Y转录因子的功能的报道较少，都在干旱胁迫中起重要的作用(Nelson et al，2007)。Nelson等认为，与拟南芥AtNF-YBl转录因子同源的ZmNF_YB2， 在缺水的条件下过表达ZmNF-YB2的转基因玉米可以明显增强抗旱性，由于ZmNF_YB2可以是多个与植物干旱有关参数发生改变，包括叶绿素含量、气口导度、叶片温度、减少萎蔫和维持光合作用，从而提高抗旱性(Nelson, Peter P. Repetti, TomR. Adams, Jingrui Wu, 2007)。Wen-Xue Li, Youko Oono等的研究证实，AtNF_YA5的表达受到干旱和ABA处理的诱导。对其启动子GUS分析表明部分诱导反应发生在转录水平。NF-YA5有一个靶位点miR169， 在干旱条件下，miR169表达受到抑制。NF-YA5在微管组织和保卫细胞有很高的表达，因此， 利用一个关键性转录因子促进多个功能基因的表达，从而增强植物的抗逆性，已经成为植物抗逆基因工程的研究热点。
本发明的目的是提供一种植物耐逆性相关蛋白GmNF-YBl及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，为一种结合CCAAT-box的核转录因子蛋白，名称为 GmNF-YBl，来源于大豆属大豆(Glycine max L.)，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由序列1衍生的蛋白质。序列1的蛋白质由174个氨基酸残基组成，自氨基端第81-85位氨基酸残基序列为可能的核定位信号区，自氨基端第33-120位氨基酸残基序列为保守的NF-YB结构域。为了使(a)中的GmNF-YBl便于纯化，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1标签的序列本发明公开了一种植物耐逆性相关蛋白GmNF-YB1及其编码基因和应用。本发明提供的蛋白质，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物耐逆性相关的由序列1衍生的蛋白质。本发明的GmNF-YB1在干旱、乙烯和ABA的诱导下表达，编码的蛋白定位到细胞核上，并且可以特异的调控含有CCAAT-box顺式元件(核心序列CCAAT)的基因的转录表达。本发明的GmNF-YB1可以提高植物的耐旱性，为人为控制抗逆和耐逆相关基因的表达提供了基础，将在培育抗逆性和耐逆性增强的植物育种中发挥重要的作用。