来自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶pcfae2及其编码基因与应用制作方法

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专利名称

来自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶pcfae2及其编码基因与应用制作方法
发明者

张修国
公开日

2012年9月19日
申请日期

2012年5月24日
优先权日

2012年5月24日
申请人

山东农业大学
文档编号

C12N15/11GK102676468SQ20121016406
关键字

酯酶阿魏酸 pcf 霉菌辣椒来自
权利要求

1.一种蛋白，是如下a)或b)或c)的蛋白质 a)由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列组成的蛋白质； b)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； c)将序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与辣椒疫霉菌致病性相关的由a)衍生的蛋白质2.编码权利要求I所述蛋白的核酸分子3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于所述核酸分子为如下I)或2)或3)或4)所示的基因 1)其编码序列是序列表中序列I的第61-1710位核苷酸的DNA分子； 2)其编码序列是序列表中序列I的第1-1710位核苷酸的DNA分子； 3)在严格条件下与I)或2)限定的DNA分子杂交且编码权利要求I所述蛋白的DNA分子; 4)与I)或2)限定的DNA分子具有90%以上的同源性且编码权利要求I所述蛋白的DNA分子4.下述I)-4)中的任一种生物材料 1)含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒； 2)含有权利要求2或3所述核酸分子的重组表达载体； 3)含有权利要求2或3所述核酸分子的重组微生物； 4)含有权利要求2或3所述核酸分子的转基因细胞系5.制备权利要求I所述蛋白质的方法，包括将权利要求I所述的蛋白质的编码基因在生物细胞中进行表达得到权利要求I所述蛋白质的步骤；所述生物细胞为微生物细胞、植物细胞或非人动物细胞6.制备表达权利要求I所述蛋白质的重组微生物的方法，包括将权利要求I所述的蛋白质的编码基因导入宿主微生物细胞，得到表达权利要求I所述蛋白质的重组微生物的步骤7.权利要求I所述蛋白质、权利要求2或3所述的核酸分子或权利要求4所述的生物材料的应用，其特征在于所述应用为下述I) -3)中任一种 1)权利要求I所述的蛋白质在作为阿魏酸酯酶中的应用； 2)权利要求I所述的蛋白质在调控辣椒疫霉圃致病性中的应用； 3)权利要求2或3所述的核酸分子或权利要求4所述的生物材料在制备阿魏酸酯酶中的应用8.一种鉴定辣椒疫霉菌杀菌剂的方法，包括如下a) -e)中的任一步骤 a)鉴定所述待检测物质是否抑制权利要求I所述蛋白质的表达，如所述待测物质能抑制权利要求I所述蛋白质的表达，则所述待测物质为候选的辣椒疫霉菌杀菌剂；如所述待测物质不能抑制权利要求I所述蛋白质的表达，则所述待测物质为非候选的辣椒疫霉菌杀菌剂； b)鉴定所述待检测物质是否降低权利要求I所述蛋白质的表达水平，如所述待测物质能降低权利要求I所述蛋白质的表达水平，则所述待测物质为候选的辣椒疫霉菌杀菌剂；如所述待测物质不能降低权利要求I所述蛋白质的表达水平，则所述待测物质为非候选的辣椒疫霉菌杀菌剂； c)鉴定所述待检测物质是否抑制权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录，如所述待测物质能抑制权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录，则所述待测物质为候选的辣椒疫霉菌杀菌剂；如所述待测物质不能抑制权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录，则所述待测物质为非候选的辣椒疫霉菌杀菌剂； d)鉴定所述待检测物质是否降低权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录水平，如所述待测物质能降低权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录水平，则所述待测物质为候选的辣椒疫霉菌杀菌剂；如所述待测物质不能降低权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录水平，则所述待测物质为非候选的辣椒疫霉菌杀菌剂； e)鉴定所述待检测物质是否使权利要求I所述蛋白质失活，如所述待测物质能使权利要求I所述蛋白质失活，则所述待测物质为候选的辣椒疫霉菌杀菌剂；如所述待测物质不能使权利要求I所述蛋白质失活，则所述待测物质为非候选的辣椒疫霉菌杀菌剂9.具有如下I)-5)中至少一种功能的物质在制备辣椒疫霉菌杀菌剂中的应用 1)抑制权利要求I所述蛋白质的表达； 2)抑制权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录； 3)降低权利要求I所述蛋白质的表达水平； 4)降低权利要求I所述蛋白质的编码基因的转录水平； 5)使权利要求I所述蛋白质失活10.扩增权利要求2或3所述的核酸分子的全长或其任意片段的引物对
技术领域

本发明涉及一种阿魏酸酯酶及其编码基因与应用，特别涉及来自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶PCFAE2及其编码基因与应用
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专利名称：来自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶pcfae2及其编码基因与应用的制作方法辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)属真菌门、鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目。辣椒疫霉菌是一种寄主范围广的致病菌，除侵染辣椒外，还侵染其它作物。周启明等报道侵染9科21种栽培植物和杂草；任光驰等试验结果认为该菌可危害爺子、黄瓜、番爺、豇豆、菜豆、白菜、甘蓝、萝卜、胡萝卜、桃、杏、苹果等。对葱、蒜侵染カ弱，对柑桔及马铃薯茎、叶不侵染。对辣椒的致病力最強。辣椒疫病是由辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)所引起的一种土传病害，可经雨水、土壌、气流等多种途径传播，除了引起大面积死秧外，还可造成叶片枯萎、果实腐烂、茎杆出现坏死斑，以及萎蔫死亡等多种症状。中国首次于20世纪40年代在江苏报道此病的发生，此后陆续有相关报道，且表现为逐年加重的趋势。80年代以来，辣椒疫病在全国各地普遍发生，新疆、北京、黑龙江、贵州、上海、青海、云南、陕西、甘肃、广东以及长江流域尤为严重。辣椒疫病是辣椒栽培及生产上ー种世界性分布较广的毁灭性病害，该病发病周期短，流行速度快，给生产上带来严重的经济损失。深入开展辣椒疫霉菌致病基因的分离及鉴定对辣椒疫霉菌所导致的多种植物病害的防治与研究具有重要的实践意义。
本发明的ー个目的是提供一种阿魏酸酯酶。本发明所提供的阿魏酸酯酶，名称为PCFAE2，来源于辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici) SD33,是如下a)或b)或c)的蛋白质a)由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；c)将序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列经过ー个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与辣椒疫霉菌致病性相关的由a)衍生的蛋白质。其中，序列表中序列2由569个氨基酸残基组成，第1-20位氨基酸组成信号肽。a)所述的蛋白质是阿魏酸酯酶的成熟蛋白，b)所述的蛋白质是阿魏酸酯酶的前体蛋白。为了使上述(a)中的蛋白便于纯化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表I所示的标签。表I标签的序列本发明公开了来自辣椒疫霉菌的阿魏酸酯酶PCFAE2及其编码基因与应用。本发明所提供的阿魏酸酯酶PCFAE2，是如下a)或b)或c)的蛋白质a)由序列表中序列2第21-569位所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；c)将序列表中序列2所示的氨基酸序列或序列2第21-569位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与辣椒疫霉菌致病性相关的由a)衍生的蛋白质。本发明为进一步研制辣椒疫霉病菌分子检测技术、辣椒疫霉菌所导致的多种植物病害的防治与研究提供了技术基础。

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