专利名称：一种银杏叶提取物冻干粉针剂的制备方法 银杏叶具有很高的药用价值，在我国，银杏叶提取物制剂用于治疗疾病已有5000多年的历史。自20世纪60年代以来，银杏叶提取物在很多国家用于治疗脑血管及周围血管疾病，如德法日韩等国，德国、法国等有银杏叶口服制剂、注射液等上市。我国有银杏叶口服液、胶囊等剂型上市。当前最常用的用于治疗目的的银杏叶提取物含有24％银杏黄酮和6％银杏内酯。银杏叶提取物的提取、分离和纯化方法；在WO9947148专利文献中已有详细的披露。
银杏叶提取物用于治疗急症的脑卒中临床上最适合使用注射液等剂型，但由于目前中药注射液制备具有相当的难度和制备技术的局限，制成的中药注射液存在澄明度差，稳定性不好因而保存困难等缺陷，致使目前临床上采用银杏叶提取物中药注射液治疗脑血管疾病还未能得到广泛使用，使都分病人失去了得到更合适的和有效的治疗的机会。本发明的目的是为了克服目前临床应用的银杏叶提取物注射液存在的上述缺陷，发明人经过研究开发了银杏的冻干粉针剂，该制剂克服了银杏叶提取物注射液稳定性不好的缺陷，利于贮存和运输，使用方便。发明人首先采用现有技术中去除银杏酸的方法，去除可能造成人体过敏的银杏酸。使银杏叶提取物制剂可安全的是用于人体。银杏酸的含量测定采用高效液相色谱，用紫外检测器测黄酮，用蒸发光散射检测器测内酯。银杏酸经萃取浓缩后，采用高效液相色谱，用紫外检测器检测。发明人采用如下方法制备银杏叶冻干粉针剂，银杏提取物1份，用注射用水溶解再与冻干支持剂0.5-3份混合，过滤，精滤除菌，分装，冻干，压塞，封口，优选的药物配比是银杏叶提取物1份(银杏黄酮24％，银杏内酯6％)，冻干支持剂1.2份。冻干支持剂可以是甘露醇、葡萄糖、蔗糖或乳糖，优选甘露醇。
发明人制成的银杏叶冻干粉针剂经稳定性试验，加速三个月(40℃)室温留样6个月都是稳定的，动物的长期毒性试验、急性毒性试验结果多项指标未见异常，该银杏叶提取物冻干粉针剂可安全的用于人体。

实施例1银杏叶提取物冻干粉针剂的制备方法(1)取干燥银杏叶粉碎成粗粉，置于多能提取罐中用8倍量70％乙醇回流提取三次，每次3小时，合并提取液浓缩至相对密度1.2。加2倍量体积的蒸馏水，加热至70℃搅拌15min，静置冷藏24小时，离心分离溶液与沉淀。
溶液中加入10％硅胶，搅拌15min，过滤。滤液用混合溶剂环己烷∶丙酮(40∶1)萃取银杏酸4次。分离水层与有机层，有机层回收溶剂，水层浓缩，真空浓缩，得棕褐色提取物。
(2)取银杏叶提取物17.5g(银杏黄酮24％，银杏内酯6％)，用1/2量注射用水溶解备用。另取甘露醇20g溶于适量注射用水，与银杏提取物溶液混合，补加注射用水至2000ml。过滤，冷藏8小时，同时测定半成品含量。冷藏液用0.2um微孔滤膜精滤，分装成2ml/支，共制成1000支；检查装量后冻干，压盖，成品检测，包装。
实验例1长期毒性试验注射用银杏叶提取物冻干粉针剂，大鼠腹腔注射连续60天87.5、43.75、17.5mg/kg(大、中、小)分别相当于临床剂量的150、75、30倍三个剂量组，对照组ip生理盐水溶液。结果对动物外观体征、行为活动无明显异常；体重增加迅速，组间比较无统计学差异(P＞0.05)；外周血象检查各指标均在正常范围内波动，与对照组比较无明显差异；血液生化学大剂量AST与对照组比较有统计学差异(P＜0.05)其它指标未见异常(P＞0.05)，解剖观察各组动物的组织脏器排列位置、颜色、质地等未见异常；各脏器系数组间比较P＞0.05；组织病理学检查20个组织，大剂量组16只有4只(4/16占25.0％)动物肝小叶结构欠佳，肝细胞有轻度水肿变性的组织病理改变，中剂量组有3只动物(3/16)肝小叶结构清楚，散在灶性肝细胞脂肪变性，而无水肿变化，提示可能与药品作用无关，小剂量组16只动物肝组织正常，其它各组织未见异常。停药恢复观察，以上检查未见异常。
注射用银杏叶提取物冻干粉针剂Beagl犬60天连续静脉滴注50.0、25.0、6.0mg/kg(大、中、小)分别相当于临床剂量的86.2、43.1、10.3倍，对照组静脉滴注5％葡萄糖注射液，结果大剂量组(50.0mg/kg)，静脉滴注后30min～1h之间，出现不同程度的流诞，烦躁、恶心、呕吐(呕吐为食物)，其中大剂量1号犬给药37天后开始出现体重下降，食欲减弱，在滴注过程中出现明显的呕吐和腹泻，腹泻物带伪膜中(25mg/kg)、小(6mg/kg)剂量和对照组(5％葡萄糖注射液)均无明显异常；体重增长，自身比较体重均增加；外周血象值均在正常范围内，与对照组比较无统计学差异；骨髓象增生活跃，未见原始和异常细胞；血液生化10项指标检查，各指标与给药前和组间比较相差不显著；心电图检查均为窦性心律，P、QRS波与主波方向一致，各波电压、时间正常；脏器系数经统计学处理均未见差异；病理组织学检查大剂量组4只犬，肝组织肝细胞结构不清，肝窦充血扩张，轻度水肿变性，其它组织心、肾、脾、肺、肾上腺、甲状腺、垂体、前列腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、胃、十二指肠、回肠、结肠、胰腺、膀胱、淋巴结、脑(小脑)、脊髓、胸骨、视神经、注射部位血管25个组织，检查均未见异常。中、小剂量组和对照组动作物以上各组织亦未见异常。
停药21天，外观、体重、外周血象、血液生化指标、脏器系数、组织病理学观察均正常。提示轻度的肝损伤，停药三周观察恢复正常。
实验例2急性毒性试验将注射用银杏叶提取物冻干粉针剂用生理盐水稀释，配为最高浓度9％，按1∶0.9组间递减法稀释，小鼠70只，分7组，按10g体重尾静脉注射0.2ml，1800mg/kg组尾i.v给药后动物出现反应性低下，1min左右动物逐渐出现死亡，随剂量减小出现动物死亡时间延长和数量减少，24h后未死动物恢复正常。继续观察8天并按改进寇氏法计算LD50为1397.66±188.16g/kg(1306.77～1494.86mg/kg)。
将注射用银杏叶提起物冻干粉针剂用生理盐水分别稀释为14.0％、12.6％、11.34％、10.21％、9.19％、8.27％的浓度，组间比值1∶0.9，按大鼠100g体重静脉(尾或足背静脉)注射1.0ml，给药后动物出现反应性低下等症状，1400mg/kg组，1min后动物逐渐出现死亡，随剂量增大动物的死亡数增加，时间缩短，24h后未死亡动物恢复正常。继续观察8天称体重后，解剖观察各存活动物，各主要脏器均无肉眼可见病变。并按改进寇氏法计算LD50为1062.67±64.79mg/kg(999.86～1129.43mg/kg)。
实验例3稳定性试验在西林瓶的包装条件下，于室温下进行考察，温度5～25℃，相对湿度50％～80％，当月考察一次后，以后每月考察一次，共考察3月。
表1注射用银杏叶提取物冻干粉针剂010101批初步稳定性考察结果
表2注射用银杏叶提取物冻干粉针剂010102批初步稳定性考察结果
表3注射用银杏叶提取物冻干粉针剂010103批初步稳定性考察结果


本发明公开了一种银杏叶提取物冻干粉针剂的制备方法，采用银杏叶提取物(含银杏黄酮24％，银杏内酯6％)1份，用注射用水溶解再与冻干支持剂甘露醇0.5－3份混合，过滤，精滤除菌，分装，冻干，压塞，封口，包装；该发明制备的银杏叶提取物冻干粉针剂稳定性好，利于保存和运输，临床使用方便。